基于G-四链体/硫黄素T无标记荧光适配体传感器快速检测氟苯尼考

硫黄素T(ThT)通过非共价相互作用与G-四链体结合,形成G-四链体/ThT复合物,呈现出较强荧光强度,而游离ThT荧光十分微弱。当存在氟苯尼考(FF)时,具有G-四链体结构的适配体(Apt)对靶标的高亲和力,使得Apt/FF复合物形成并释放ThT,荧光强度降低。基于这一特点,本研究设计一种灵敏快速的现场检测体系,用于检测氟苯尼考,即基于G-四链体/硫黄素T的无标记荧光适配体传感器。该适配体传感器的检测范围为0.0128~200 ng/mL,实际检出限0.0128 ng/mL,检测总时长10 min。同时,对实际加标样品(牛奶和鸡蛋)进行回收率计算,加标回收率在91.2%~117.1%之间。所建立的无标记荧光适配体传感器具有高特异性、成本低、耗时短等优点,可用于实际样品的现场检测。     

基于改进G-四链体DNA酶的电化学适配体传感器构建及卡那霉素高灵敏检测

将阳离子多肽(peptide)与G-四链体DNA酶(G4 DNAzyme)共价组装得到高活性的G4 DNAzyme-peptide复合物,进一步构建新型电化学适配体传感器,研究该复合物对电化学适配体传感器响应性能的影响,并将该传感器用于牛奶中卡那霉素(KANA)的检测分析。结果表明：G4 DNAzyme-peptide可以显著放大电化学信号,明显提高传感器检测灵敏度;在捕获探针序列最优浓度(2.0μmol/L)下,电流信号强度变化与目标物浓度(0.06 pmol/L～20 nmol/L)对数值呈良好的线性关系,检测限为0.02 pmol/L,优于其他KANA检测方法;该传感器对KANA具有良好的选择性,在实际牛奶样品检测中,KANA的加标回收率为97.1%～105.5%,相对标准差为3.60%～5.74%,且检测结果与ELISA法一致,说明该传感器能够实现牛奶中KANA的高灵敏检测。     

基于二氧化锰纳米片和核酸外切酶I构建荧光适配体传感器检测氯霉素

为创建食品中氯霉素的新型快速检测方法,以二氧化锰纳米片淬灭适配体的荧光,核酸外切酶I酶切放大荧光信号,构建了检测氯霉素的适配体传感器。结果表明:在适配体浓度50nmol/L,二氧化锰质量浓度0.05mg/mL,核酸外切酶用量0.4U/μL,酶切时间50min的最佳荧光检测条件下,线性范围为0.1~80.0nmol/L,检出限为0.08nmol/L。构建的检测方法具有操作简单,检测灵敏度高的优点,并实现了在食品样品中的准确检测。     

G-四链体特性及其基于核酸辅助检测方法的研究进展

G-四链体(G-quadruplex)是多聚鸟嘌呤(G)重复序列通过Hoogsteen氢键配对形成的由四链构成的非典型二级结构,可与氯化血红素(hemin)结合,形成具有类似过氧化物酶活性的脱氧核酶,可使其底物显色,或改变某些染料的荧光强度,起到生物传感器的作用.G-四链体作为功能性核酸,以其稳定、灵敏、特异性强等优势...     

基于核酸适配体检测动物性食品中氯霉素残留的研究进展

氯霉素是一种禁用于食品动物的广谱抗生素,建立对其残留的快速检测尤为重要;核酸适配体作为新型生物识别元件,稳定性好且易合成,结合核酸适配体对氯霉素进行残留检测是继传统抗体检测之后又一新的突破方向,因此具有良好发展前景。在此综述了近5年基于核酸适配体检测动物性食品中氯霉素残留的研究进展,主要包括比色分析法、荧光分析法、化学发光分析法、表面增强拉曼散射检测法以及电化学生物传感器法等,发现当前适配体在氯霉素残留检测领域缺乏系统深入研究,相关检测应用难以同时兼顾简单快速和灵敏准确的检测需求,特此比较和讨论不同分析方法,并分析其优缺点及发展趋势,以期为动物性食品中氯霉素残留的高效监管提供有益参考。     

基于核酸适配体免标记光度法检测牛奶中的甲硝唑

目的 建立核酸适配体光度法检测牛奶中的甲硝唑的分析方法。方法 将含DNA酶序列的核酸探针与甲硝唑适配体混合反应,引入目标检测物甲硝唑,使其与甲硝唑适体特异性结合,再于体系中引入氧化还原试剂,用紫外可见分光光度计检测溶液吸光度变化。优化各反应条件,以达到最佳反应条件,最后对所构建的方法进行方法学评价。结果 当甲硝唑质量浓度在0.08~5.13 g/L时,体系的荧光强度差值（ΔA）与甲硝唑质量浓度（C）呈线性关系,ΔA=0.1542+0.1396c（r=0.9968）,检出限为0.0358 g/L。在低、中、高3水平浓度的加标回收率为85.91％~102.04％,相对标准偏差分别为1.36％、1.93％、1.95％。结论 本方法具有良好的精密度、选择性、回收率,可用于实际样品牛奶中甲硝唑的检测。     

基于氯化血红素/G-四链体比色分析检测食品中赭曲霉毒素A

为了满足食品质量安全并快速检测食品中赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)的含量,探究基于氯化血红素/G-四链体比色分析检测OTA的方法。通过引入两条无标记DNA单链,其中链1由OTA适配体和富含鸟嘌呤的序列组成,链2与链1部分互补。无OTA时,两条DNA链杂交成双链,氯化血红素因聚集使其酶活性降低。而有OTA时,OTA与链1中适配体特异性结合,双链解离,链1中富含鸟嘌呤的序列与氯化血红素结合形成具有酶催化活性的G-四链体结构,可催化过氧化氢氧化2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)使溶液呈深绿色,最大吸收波长420 nm。OTA检测的线性范围为0.001~2.5 μmol/L(R²>0.99),检出限为70.3 pmol/L(3α/κ,n=10)。将此方法用于食品中OTA的检测,加标回收率为91.9%~109.0%,表明该探针能够准确、灵敏地检测食品中的OTA。     

G-四链体与As-PCR联用可视化检测沙门氏菌

沙门氏菌是食源性病原菌,常在食品媒介中传播,因此快速检测是控制该病原菌的关键。本研究用沙门氏菌基因组DNA作模板,通过对不对称PCR(As-PCR)扩增条件的优化,证明当非限制性引物HF终浓度0.4 μmol/L,与限制性引物GR终浓度比10∶1、退火温度58 ℃,扩增40个循环时可获得最大浓度的单链DNA(ssDNA)产物。带有G-四链体序列的ssDNA与40 μmol/L氯化血红素作用60 min时,G-四链体显示出最高的过氧化物酶活性。在此基础上,将As-PCR和G-四链体联用,实现了可视化检测沙门氏菌invH基因,在2 pg/μL~258 ng/μL的质量浓度区间,质量浓度对数与吸光值A421nm呈线性关系(y = 0.0691x + 0.3085,R2 = 0.9729)。对污染的牛奶样品检测,检出灵敏度高,为35 CFU/mL,且操作便捷,为病原微生物检测提供了新技术支撑。     

基于核酸适配体调控噻菁染料聚集体构建铅离子检测方法

基于调控噻菁染料(Dye2)的超分子自组装性质及其与核酸适配体(T30695)特异性结合的能力,构建了Pb2+的特异性识别模块.结果表明,当体系中加入Pb2+时,T30695单链形成G-四链体,并将二聚体形式存在的噻菁染料诱导解聚为单体,引起422,445 nm处紫外吸收峰变化,仅需通过UV-vis光谱仪便可实现对Pb...     

基于G-四链体的PCR-RCA双重扩增技术检测沙门氏菌

将聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）与滚环扩增技术（rolling circle amplification,RCA）联用,并把G-四链体互补序列嵌入到RCA扩增所需的哑铃环状模板上,通过PCR和RCA的双重扩增及特异性结合G-四链体的硫黄素T荧光信号增强的作用,达到基于G-四链体的PCR-RCA技术检测沙门氏菌（Salmonella）的目的。在优化的检测体系下,确定了沙门氏菌基因组DNA浓度对数与486 nm波长处的荧光信号强度具有良好的线性关系,回归方程为y=2.101x＋2.872 3（R2=0.992 5）,线性范围为17 fg/μL～1.7 ng/μL。根据实验的特异性分析,表明此方法适用于沙门氏菌属的检测,对人工污染沙门氏菌牛奶样品进行检测,检出限为4.28 CFU/mL。该方法具有特异性强、灵敏度高、检出限低等优点,为实现食源性致病菌的快速检测提供新的方法。     

基于核酸适配体的电化学法检测铅离子

目的 建立基于核酸适配体的铅离子电化学检测方法。方法 铅离子适配体能够与辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)标记的铅离子适配体互补单链DNA形成稳定的结构, 当向溶液中加入铅离子时, 铅离子适配体与铅离子结合, 导致电极上固定的HRP减少。HRP能够催化溶液中双氧水(H2O2)和对苯二酚(hydroquinone quinol, HQ)发生氧化还原反应产生电化学信号。通过电化学信号的改变实现对铅离子的定量检测。结果 在铅离子浓度为1.0×10?4~1.0×10?1 g/L时, 电流与铅离子浓度呈线性关系为I(μA)=?17.678LogC/(g/L)+ 1.331(r2=0.995), 检测限为9.0×10?5 g/L。结论 该方法具有操作简单、灵敏度高、特异性好等优点, 可用于食品安全检测和分析中铅离子的测定。     

基于适配体检测农药残留的技术进展

随着多种农药地广泛使用,农药残留带来的健康问题越来越受到大众的关注.基于核酸适配体进行农药残留的检测技术在有毒有害物质检测方面发挥着重要作用.相比于抗体,适配体具有稳定性好、容易合成和修饰、靶标范围广等优势.近些年来,发表了一些适配体与荧光检测、电化学检测、拉曼光谱等方法进行结合的新型方法.这些方法可以更加准确、灵敏地...     

荧光定量免疫层析法测定鸡肉和牛奶中的氯霉素

目的建立一种荧光定量免疫层析法测定动物源性食品鸡肉与牛奶中氯霉素残留的分析方法。方法将氯霉素鼠单克隆抗体与羧基化铕微球进行偶联标记。经过荧光微球活化、探针偶联等一系列条件优化确定最佳反应体系条件,根据纸条测试线(T线)信号值与质控线(C线)信号值的比值(T/C)和样本中氯霉素浓度建立定量标准曲线。针对鸡肉和牛奶样品,对荧光免疫层析检测方法的灵敏度、准确度和精密度等进行评价,并与液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)标准仪器分析方法进行比较。结果本研究建立的荧光免疫层析检测方法对鸡肉和牛奶中氯霉素残留的检出限分别为0.041μg/kg和0.040μg/kg,定量限分别为0.079和0.100μg/kg,添加回收率在76.26%～112.92%之间,变异系数均小于15%。结论本研究建立的荧光定量免疫层析方法灵敏度高、稳定性好,且与使用仪器方法得到的检测结果一致性较高,适用于鸡肉和牛奶中氯霉素残留的现场快速检测。     

基于金掺杂的锆基金属有机框架电化学适配体传感器检测玉米中黄曲霉毒素B1

目的 基于金掺杂的锆基金属有机框架(Gold-doped zirconium-based metal-organic framework, Au@Zr-MOF)的电化学适配体传感器建立检测玉米中黄曲霉毒素B1 (Aflatoxin B1,AFB1)的方法。方法 利用具有高比表面积、介孔结构的Zr-MOF作为骨架,通过原位还原生长的方法掺杂金纳米粒子(Au NPs),得到导电性良好、分散均匀的Au@Zr-MOF。并基于Au-S键共价结合黄曲霉毒素B1 适配体,构建电化学阻抗型适配体传感器,当AFB1存在时,适配体对其进行识别结合,引起电极表面电化学传质电阻增加,随着AFB1浓度的增大,阻抗值也随之增加,并根据阻抗值的变化实现对AFB1的定量检测。结果 在最佳的实验条件下,该传感器对AFB1检测的线性范围为10-4-10 ng/mL,检出限为0.19 pg/mL,对玉米样品的回收率为96-112%。结论 本研究建立的电化学适配体传感器可以实现对AFB1的定量检测,且具有良好的特异性和重现性,为准确、快速检测食品中的AFB1提供思路。     

基于核酸适配体建立的小分子危害物检测技术研究进展

食品中小分子危害物污染是重要的食品安全问题之一,加强其污染水平监测十分必要,通常采用的仪器法和免疫分析法均无法实现对其的快速简便检测。核酸适配体作为抗体的替代分子,有制备周期短、易改造、亲和力高等优点,在食品中小分子危害物监测领域有着十分广阔的应用前景。目前基于核酸适配体建立的快速检测食品中小分子危害物的方法主要包括纳米金/荧光比色法、电化学传感法、酶联适配体法、时间分辨荧光法、荧光偏振荧光法、荧光共振能量转移法。本文综述了上述各方法的研究进展,并列出了各方法的优缺点,可作为实际检测中选择最合适方法的参考。     

基于核酸适配体的胶体金比色法检测奶粉中的乳铁蛋白

目的 建立一种基于核酸适配体胶体金(colloidal gold,AuNPs)比色法检测奶粉中乳铁蛋白(lactoferrin, LF)的方法。方法 以无标记的LF适配体为生物识别元件, AuNPs为信号分子,利用AuNPs的光学特性构建一种可定性和定量检测LF的比色适配体传感器。结果 在最优条件下,20min内即可完成检测,在5～75 nmol/L浓度范围内具有良好线性关系,相关系数(r²)为0.998,检出限为3.6 nmol/L,特异性较好,并且在基质标准曲线中也表现出较好的线性关系(r²=0.987)。结论 该方法操作简单,分析快速,安全环保,灵敏度较高,有望应用于奶粉中LF的检测。     

核酸适体技术及其在生物毒素检测中的应用

核酸适体是经指数富集配体系统进化技术(SELEX)从体外筛选出能与靶物质高亲和力、高特异性相结合的寡核苷酸片段。核酸适体因其众多优势在医学、生物、食品领域中迅速发展,对核酸适体技术及其近年来在生物毒素检测中的应用进行了综述。     

功能核酸生物传感器在铅离子检测中的研究进展

铅离子(Pb²⁺)是一种广泛存在于环境中的有毒金属污染物,严重影响人类健康。传统的大型仪器检测Pb2方法存在成本高、耗时长、操作过程复杂等弊端,限制了其广泛应用。现如今,生物传感器技术发展迅速,其在Pb²⁺检测中的应用是当前的研究热点。功能核酸具有稳定性好、易化学合成和功能化修饰的优点,在生物传感器领域中占有重要地位。本文重点综述了基于Pb²⁺依赖型脱氧核酶、G-四链体两种类型的功能核酸传感器在Pb²⁺检测中的研究进展,根据信号传导类别的不同,主要分为荧光传感器、比色传感器、电化学传感器3大类,本文阐述了各种检测方法的优缺点,并对其应用前景和发展方向进行展望,以期为今后研发更灵敏的快速检测Pb²⁺的功能核酸生物传感器提供新思路。