穿心莲内酯对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤中NF-κB信号通路的影响

目的探讨穿心莲内酯(Andrographolide,AP)对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)中NF-κB信号通路的影响。方法将雄性C57BL/6小鼠随机分为3组:空白对照组、LPS组和AP+LPS组。AP+LPS组腹腔内注射10 mg/kg的AP,空白对照组腹腔内注射等体积的NS,2次/d,连续3 d,第3天注射后2 h,LPS组和AP+LPS组气管内雾化吸入LPS(1 mg/kg),空白对照组气管内雾化吸入等剂量的NS,12 h后处死小鼠,开胸取肺,10%甲醛溶液固定,随后进行石蜡切片及常规HE染色,光镜下观察各组小鼠肺组织的病理学变化;免疫组化法观察肺组织中血管细胞黏附分子-1(Vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)蛋白的表达;Western blot法检测肺组织中磷酸化抑制蛋白IκB(Phospho-inhibitor ofκB,p-IκBα)和p-NF-κB(P65)蛋白的表达。结果 LPS组小鼠肺损伤明显,有明显的炎症反应;AP+LPS组小鼠肺损伤明显减轻,炎症细胞浸润明显减少。与LPS组相比,AP+LPS组小鼠肺组织中VCAM-1蛋白的表达明显抑制;p-IκBα和p-NF-κB(P65)蛋白的表达明显降低(P<0.05)。结论 AP可通过抑制磷酸化的IκBα的降解及P65单体的磷酸化来调节NF-κB通路,从而减轻小鼠肺损伤的炎症变化。     

凋亡细胞对巨噬细胞中白细胞介素-27表达的影响

目的探讨凋亡细胞对巨噬细胞中白细胞介素-27(Interleukin-27,IL-27)表达的影响。方法分别将小鼠巨噬细胞系RAW264.7(RAW细胞)和小鼠腹腔巨噬细胞分为6组:空白对照组、LPS刺激组、凋亡细胞刺激组、LPS+凋亡细胞刺激组、IFNγ+LPS刺激组及IFNγ+LPS+凋亡细胞刺激组。用IL-27 p28启动子荧光素酶报告基因瞬时转染RAW细胞,检测各组细胞中IL-27 p28启动子荧光素酶活性;RT-PCR法检测各组RAW细胞中IL-27 p28基因mRNA的转录水平,实时定量PCR法检测各组小鼠腹腔巨噬细胞中IL-27 p28基因mRNA的转录水平;Western blot法检测各组小鼠腹腔巨噬细胞中IL-27的表达水平。结果瞬时转染的RAW细胞中,IFNγ+LPS刺激组中IL-27 p28启动子荧光素酶活性明显高于空白对照组及IFNγ+LPS+凋亡细胞刺激组(P<0.05);RAW细胞与腹腔巨噬细胞中,LPS刺激组和IFNγ+LPS刺激组中IL-27 p28基因mRNA的转录水平明显高于空白对照组、LPS+凋亡细胞刺激组和IFNγ+LPS+凋亡细胞刺激组(P<0.05);LPS刺激组和IFNγ+LPS刺激组细胞中IL-27的表达水平明显高于LPS+凋亡细胞刺激组和IFNγ+LPS+凋亡细胞刺激组。结论巨噬细胞在摄取凋亡细胞后,IL-27 p28亚基的表达水平下降,从而导致IL-27的表达水平下降,为进一步研究其机制及临床应用奠定了理论基础。     

siRNA介导NF-κB p65沉默联合5-Fu诱导胃癌细胞SGC7901凋亡

目的运用siRNA抑制胃癌细胞株SGC7901中NF-κB p65基因的表达,探讨其对细胞增殖和凋亡的影响,并分析该基因对化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药性的作用。方法将SGC7901细胞分为空白对照组、脂质体组、5-Fu组、siRNA组和联合组,除空白对照组外,各组分别给予相应的药物。Western blot法检测各组细胞NF-κBp65蛋白的表达;Annexin V-PI法检测细胞凋亡;MTT法检测各组细胞的增殖水平。结果NF-κBp65蛋白在空白对照组和脂质体组中高表达,在5-Fu组、siRNA组和联合组中低表达,其中以联合组表达量最低;各组细胞早期凋亡率分别为1.40%±0.20%、2.36%±0.58%、6.68%±0.34%、6.60%±0.64%和21.62%±1.12%,其中以联合组最高;细胞的增殖活性随着siRNA浓度的增加和作用时间的延长而下降。结论siRNA能有效抑制NF-κBp65基因的表达,从而抑制SGC7901细胞增殖,促进其凋亡,并增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。     

解偶联蛋白-2在软脂酸诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗中的作用及其与核转录因子-κB的关系

目的探讨解偶联蛋白-2(Uncoupling protein-2,UCP-2)在软脂酸诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗(Insulin-resistance,IR)中的作用及其与核转录因子-κB(Nuclearfactor-κB,NF-κB)的关系。方法将HepG2细胞分为正常对照组、软脂酸组(加0.25mmol/L软脂酸)、高胰岛素组(加100nmol/L胰岛素)、软脂酸+京尼平组(加0.25mmol/L软脂酸和10μmol/L京尼平),培养24h后,再用100nmol/L胰岛素刺激,分别于12h后测定培养液中葡萄糖、MDA、SOD、ALT、AST、GGT、TG的浓度;油红O染色法观察细胞的脂变情况;流式细胞术检测线粒体膜电位改变;30min后采用半定量RT-PCR及Westernblot法检测细胞IRS-2、UCP-2及NF-κB的表达水平。结果胰岛素作用12h后,细胞培养液中葡萄糖含量软脂酸组与高胰岛素组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。培养液中葡萄糖含量、ALT、AST、MDA、GGT、TG的含量及UCP-2和NF-κB的表达水平,软脂酸组均较正常对照组和软脂酸+京尼平组显著升高(P<0.05),软脂酸+京尼平组与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。线粒体膜电位、SOD和IRS-2的水平,软脂酸组显著低于正常对照组和软脂酸+京尼平组(P<0.05),软脂酸+京尼平组与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 UCP-2在软脂酸诱导的肝脏胰岛素抵抗中起着重要作用,其机制可能与NF-κB有关。     

红藻氨酸致痫大鼠海马小窝蛋白(Cav-1)和核因子(NF-κB)的变化及灵芝多糖的干预

观察灵芝多糖(GLP)对于红藻氨酸(kainicacidKA)致痫大鼠海马Cav-1和NF-κB的影响。方法:将60只健康雄性Wistar大鼠随机分成正常对照组、假手术组、癫痫模型组、灵芝多糖治疗低浓度组、灵芝多糖治疗中浓度组、灵芝多糖治疗高浓度组每组10只。采用激光共聚焦方法计数各组海马Cav-1和NF-κB阳性细胞的数量。结果:癫痫模型组Cav-1阳性细胞数明显高于正常对照组;灵芝多糖治疗组Cav-1阳性细胞数高于癫痫模型组;NF-κB阳性细胞数癫痫模型组明显高于正常对照组;灵芝多糖治疗各组NF-κB阳性细胞数低于癫痫模型组。同时,高、中浓度组之间Cav-1和NF-κB蛋白光密度未见明显异常。结论:灵芝多糖能增强大鼠海马神经元Cav-1表达和抑制NF-κB的表达,减轻海马神经元的变性、坏死和凋亡,起到抗癫痫作用。     

miR-628-3p靶向结合STK17B基因对卵巢癌进展的抑制作用

目的 分析miR-628-3p通过靶向丝氨酸/苏氨酸激酶17B(serine/threonine kinase 17B,STK17B)抑制卵巢癌（ovarian cancer,OV）增殖、迁移和侵袭的能力。方法 生物信息学分析miR-628-3p在OV组织中的表达水平及预后。分别将空载NC质粒（miR-NC）、miR-628-3p、miR-628-3p+STK17B转染至人OV细胞SKOV3和HO8910中,RT-qPCR法检测转染细胞中miR-628-3p表达水平;CCK-8法和克隆试验检测各组细胞增殖能力;划痕愈合试验检测各组细胞迁移能力;Transwell侵袭试验检测各组细胞侵袭能力。裸鼠成瘤试验检测瘤体质量及体积变化。Starbase数据库预测miR-628-3p靶基因,双荧光酶素报告试验进行验证。Western blot法测定各组细胞STK17B蛋白表达水平。结果miR-628-3p在OV组织中低表达,且患者无病生存期低。与miR-NC组相比,miR-628-3p组SKOV3和HO8910细胞中miR-628-3p表达均上调（t分别为7.789和7.862,P均<0.0...     

夏桑菊对甲型H1N1流感病毒的作用及其机制

目的探讨夏桑菊对甲型H1N1流感病毒的作用及其机制。方法 MTT法检测夏桑菊对MDCK细胞的半数有毒浓度(TC50)及对甲型H1N1流感病毒半数抑制浓度(IC_(50)),并计算选择指数(selection index,SI);Reed-Muench法检测甲型H1N1流感病毒对MDCK细胞的半数感染量(TCID50);空斑减少试验检测夏桑菊对甲型H1N1流感病毒的作用;荧光染色法观察夏桑菊对流感病毒NP蛋白的核定位作用;Western blot法检测夏桑菊作用流感病毒感染细胞后NF-κB通路相关蛋白的表达情况。结果 TC_(50)为4.98 mg/m L,IC_(50)为2.063 mg/m L,SI为2.414,TCID_(50)为0.044 668;甲型H1N1流感病毒经夏桑菊作用后,抑制了病毒株的空斑形成、病毒NP蛋白的核输出及NF-κB通路相关蛋白Iκκα、Iκκβ、NF-κBp50、NF-κBp65的磷酸化。结论夏桑菊对甲型H1N1流感病毒有明显的抑制作用,可能是通过抑制NF-κB通路相关蛋白磷酸化实现的。     

BC02复合佐剂成分协同增强巨噬细胞固有免疫应答的分析

目的初步分析BC02(BCG Cp G DNA combination adjuvants system 02)复合佐剂构成成分在巨噬细胞激活过程中的协同加强作用。方法采用夹心ELISA和RT-PCR法分别检测BC02复合佐剂及其构成成分[Al(OH)3佐剂及BC01(BCG Cp G DNA compound adjuvants system 01)佐剂]对小鼠巨噬细胞RAW264.7分泌的TNF-α及单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)细胞因子水平和m RNA转录水平的影响。信号通路蛋白磷酸化芯片检测经BC01和BC02刺激45 min后,RAW264.7细胞中核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路的变化情况。结果 BC02对巨噬细胞的刺激存在剂量和时间依赖性,最佳浓度和培养时间分别为1/10人用剂量[(7.5μg/m L BC01+20μg/m L Al(OH)3]和24 h。Al(OH)3无机盐佐剂能协同增强BC01生物佐剂对RAW264.7细胞的刺激活性,同时,TLR-9抑制剂ODN 2088与NLRP3抑制剂MCC 950单独或联合处理RAW264.7细胞,均能显著降低BC02刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α和MCP-1细胞因子的能力。信号通路蛋白磷酸化芯片结果表明,BC02复合佐剂显著上调NF-κB信号通路中NF-κB-p105/p50、NF-κB-p65及NF-κB-p100/p52等关键蛋白分子的磷酸化水平;同时,也能显著上调MAPK信号通路中p38 MAPK、c-Jun、SPAK/JNK及EIK-1等关键蛋白分子的磷酸化水平。结论 BC02复合佐剂中BC01生物佐剂与Al(OH)3无机盐佐剂成分在激活小鼠巨噬细胞参与固有免疫应答中具有协同加强作用。     

Notch2胞内段基因过表达对K562细胞增殖的影响及其机制

目的探讨外源性Notch2胞内段基因过表达对慢性粒细胞白血病(Chronic myeloid leukemia,CML)细胞株K562增殖的影响及其机制。方法将携带Notch2胞内段(ICN2)基因的质粒转染K562细胞,MTT法检测细胞的增殖;流式细胞仪检测细胞的细胞周期分布;RT-PCR检测Notch2基因全长mRNA的转录,Western blot检测Notch2蛋白的表达;RT-PCR检测Notch通路下游靶基因Hes1、Hey1及细胞增殖、凋亡相关基因numb、Bcl-2、NF-κB和TGF-β1的mRNA转录水平。结果与未转染组相比,转染组K562细胞数量减少,增殖显著受抑(P<0.01);转染48 h后的K562细胞G1期细胞比例显著增多(P<0.01),S期细胞比例显著减少(P<0.01);Notch2基因mRNA及下游靶基因Hes1和Hey1 mRNA转录水平均明显增强(P<0.01),Notch2蛋白表达量增加(P<0.01);numb基因mRNA转录水平无变化;Bcl-2表达下调,NF-κB和TGF-β1表达上调。结论Notch2胞内段基因过表达可抑制K562细胞增殖,其机制可能是通过上调TGF-β1和NF-κB基因表达及下调Bcl-2基因表达,将细胞阻滞于G1期来实现的。     

脂多糖对奶牛乳腺成纤维细胞增殖速率、胞内Toll样受体及其信号通路相关基因mRNA表达水平的影响

目的探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对奶牛乳腺成纤维细胞(bovine mammary fibroblast,BMFB)增殖速率、胞内Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)及其信号通路相关基因m RNA表达水平的影响。方法原代培养BMFB,用LPS(终浓度10μg/mL)刺激BMFB不同时间后,经CCK-8法检测BMFB的增殖速率,实时荧光定量PCR法检测BMFB胞内TLR及其信号通路相关分子m RNA的表达水平。结果 LPS刺激BMFB 0、1、3 h后,BMFB增殖速率差异无统计学意义(P0.05),LPS刺激BMFB 6 h开始,试验组BMFB的增殖速率明显快于对照组(P0.05)。与对照组比较,LPS刺激BMFB 12 h后,TLR2、TLR4、信号转导通路激活核转录因子κB(nuclear factor of kappa B,NF-κB)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TNF receptor associated factor 6,TRAF6)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha-α,TNF-α)和白细胞介素-1受体相关激酶1(interleukin-1 receptor associated kinase 1,IRAK1)基因m RNA表达水平显著升高(P0.05),髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,My D88)基因m RNA的表达水平差异无统计学意义(P0.05)。结论 BMFB可能通过TLR2和TLR4识别LPS,并与NF-κB信号通路级联诱导炎性细胞因子和趋化因子的释放,参与奶牛乳腺先天性免疫应答。     

脂多糖对奶牛乳腺上皮细胞体外生长及细胞内固醇调节元件结合蛋白-1、肝脏X受体基因mRNA转录水平的时序性影响

目的分析脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMECs)体外生长及细胞内固醇调节元件结合蛋白-1(sterol regulatory elementbinding protein 1,SREBP-1)和肝脏X受体(liver X receptor,LXR)基因mRNA转录水平的时序性影响。方法原代培养BMECs,用LPS(终浓度为10μg/m L)分别刺激BMECs 0、1、3、6、12、24和48 h后,显微镜下观察细胞状态,采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法检测BMECs中SREBP-1及LXR基因mRNA的时序性表达水平。结果 LPS刺激BMECs 0、1、3 h后的生长状态良好,细胞形态饱满,胞浆丰富,无任何肉眼可见变化;LPS刺激6 h后,BMECs开始出现明显收缩、变圆,细胞间隙增大,细胞突起减少。与LPS刺激0 h比较,LPS刺激BMECs 1 h后可显著下调LXR基因mRNA转录水平(P0.05),刺激3 h后可显著下调SREBP-1基因mRNA转录水平(P0.05),且均随时间的延长呈逐渐降低趋势(P0.05),均于LPS刺激12 h时达最低,刺激24及48 h后LXR及SREBP-1基因mRNA转录水平均明显高于12 h,24和48 h间差异无统计学意义(P0.05)。结论 LPS可对BMECs产生严重损伤,能有效抑制BMECs中SREBP-1及LXR基因mRNA转录水平,且具有一定的时间依赖性。     

核转录因子NF-κB与肾脏缺血-再灌注损伤

核转录因子κB(NF-κB)普遍存在于真核生物细胞内,在免疫反应、炎症反应、细胞凋亡、缺血-再灌注损伤等病理生理改变过程中起着重要的调控作用。NF-κB在肾脏缺血-灌注损伤中的起着重要作用,本文就这方面的研究进展进行综述。     

柳氮磺吡啶与维生素K3联合应用对神经胶质瘤C6细胞增殖的影响

目的观察柳氮磺吡啶(SAS)与维生素K3(VK3)联合应用对神经胶质瘤C6细胞增殖的影响,并探讨二者的作用机制。方法取对数生长期的大鼠神经胶质瘤C6细胞,分别加入不同浓度的SAS、VK3,MTT法检测各组细胞增殖水平,RT-PCR及Western blot法分别检测细胞IKBα基因mRNA的转录水平及P65蛋白的表达水平;TUNEL法检测细胞凋亡。结果SAS单独作用于C6细胞,呈剂量依赖性地抑制细胞增殖;SAS与VK3联合作用,抑制细胞增殖效果更明显。SAS与VK3联合作用4、8、12h,C6细胞IKBα基因mRNA的转录水平逐渐下降,4h时,C6细胞P65蛋白的表达水平增加,而8、12h时降低。SAS与VK3联合作用,TUNEL阳性细胞率明显高于空白对照组及SAS、VK3单独作用组。结论SAS与VK3联合应用,可通过影响NF-κB/IKBα基因的表达,抑制C6细胞增殖,二者联合应用可减少单独药物用量,减轻对正常细胞的毒性作用。     

阿奇霉素对人单核白血病细胞THP-1髓系细胞触发受体-1的调节作用

目的 探讨阿奇霉素在脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激下对人单核白血病细胞THP-1髓系细胞触发受体-1(Triggering receptor expressed on myeloid cells-1,TREM-1)的调节作用及TREM-1调控对炎症反应的意义。方法将THP-1细胞分为LPS组(加入1μg/ml LPS)、LPS+TREM-1/FC融合蛋白组(加入1μg/ml LPS和1μg/ml TREM-1/FC融合蛋白)和LPS+阿奇霉素组(加入1μg/ml LPS和10μg/ml阿奇霉素)。分别于培养4、8、12、24、48 h后,采用RT-PCR和Western blot法检测各组细胞中TREM-1基因mRNA及蛋白的表达,ELISA法检测各组细胞上清液中可溶性TREM-1(Soluble TREM-1,sTREM-1)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)和白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)的水平。结果 TREM-1/FC融合蛋白和阿奇霉素可抑制在LPS刺激下THP-1细胞TREM-1蛋白的表达,但对其基因表达无抑制作用;二者还可明显抑制炎性细胞因子的分泌,与LPS组比较,差异均有统计学意义(P<0.01),且TREM-1/FC融合蛋白的抑制作用强于阿奇霉素。结论 TREM-1是调控炎症反应及感染性疾病的重要靶点;阿奇霉素对TREM-1具有调节作用,为其进一步的临床研究提供了实验依据。     

激活素A抑制脂多糖活化巨噬细胞的作用机制

目的探讨激活素A(Activin A)抑制脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)活化巨噬细胞的作用机制。方法取小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,分别添加Activin A(5 ng/ml)、LPS(1μg/ml)和Activin A(5 ng/ml)+LPS(1μg/ml),同时设以含单纯2.5%胎牛血清的DMEM培养液培养的细胞作为对照孔,培养24 h后,采用还原酶法检测细胞分泌一氧化氮(Nitric oxide,NO)的水平,流式细胞术分析TLR2和TLR4蛋白的表达水平,RT-PCR分析细胞ActRⅡA和ActRⅡB基因mRNA的转录水平。结果 Activin A和LPS单独作用均促进RAW264.7细胞分泌NO,但二者联合使用时,Activin A可抑制LPS刺激RAW264.7细胞的NO分泌;Activin A能抑制LPS上调RAW264.7细胞TLR4蛋白的表达,但对TLR2蛋白的表达无影响;LPS可促进RAW264.7细胞ActRⅡA基因mRNA的转录水平,但对ActRⅡB基因mRNA的转录水平无影响。结论 Activin A通过调控TLR4途径抑制LPS的作用,LPS可能通过促进ActRⅡA的表达进一步增强Activin A的负反馈调节作用。     

TGF-β1/Smad7信号通路在白藜芦醇增强胆固醇酯水解酶表达中的作用

目的探讨TGF-β1/Smad-7信号通路在白藜芦醇增强胆固醇酯水解酶(cholesteryl ester hydrolase,CEH)表达中的作用。方法用氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)诱导小鼠单核巨噬细胞株RAW 264.7转化为泡沫细胞,将经泡沫化处理的巨噬细胞进行2次分组,第1次分为正常对照组、白藜芦醇组、LY2157299组和白藜芦醇+LY2157299组,第2次分为正常对照组、白藜芦醇组、Ad-Smad-7组和白藜芦醇+Ad-Smad-7组,均处理48 h,通过胆固醇流出试验检测各组巨噬细胞内胆固醇流出率,油红O染色检测细胞泡沫化情况,RT-PCR法和Western blot法检测细胞中p-Smad-7和CEH基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平。结果与正常对照组比较,白藜芦醇组巨噬细胞内胆固醇流出率明显升高(P0.05),白藜芦醇+LY2157299组、LY2157299组、白藜芦醇+Ad-Smad-7组和Ad-Smad-7组胆固醇流出率均明显降低(P0.05);白藜芦醇组巨噬细胞泡沫化程度明显下降(P0.05),白藜芦醇+LY2157299组、LY2157299组、白藜芦醇+Ad-Smad-7组和Ad-Smad-7组巨噬细胞泡沫化程度明显增强(P0.05);白藜芦醇组巨噬细胞中CEH基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平明显增强(P0.05),p-Smad-7基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平明显下降(P0.05),而白藜芦醇+LY2157299组、LY2157299组、白藜芦醇+Ad-Smad-7组和Ad-Smad-7组CEH基因mRNA的转录及蛋白的表达均明显被抑制(P0.05),p-Smad-7基因mRNA的转录及蛋白的表达均明显增强(P0.05)。结论白藜芦醇可能是通过TGF-β1/Smad-7信号通路来增强CEH的表达。     

大鼠脑缺血再灌注后NF-κB的表达及低分子肝素的保护作用

目的探讨低分子肝素在大鼠脑局灶性缺血再灌注损伤后核转录因子NF-κB的表达及其保护作用。方法选择健康雄性SD大鼠,随机分为假手术组、缺血再灌注组、低分子肝素组,采用改良Longa[1]法制作大鼠右侧大脑中动脉闭塞局灶性脑缺血再灌注模型,观察海马CA1区NF-κB的表达情况。结果再灌注后各时间点NF-κB的表达随再灌注时间延长逐渐增加,低分子肝素组核NF-κB的表达量低于脑缺血再灌注组。结论低分子肝素能抑制模型大鼠的核转录因子NF-κB的释放,减少梗死范围,具有脑保护作用。     

百合知母汤对LPS诱导小鼠急性肺损伤的保护作用

探讨百合知母汤对内毒素(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的保护作用。给予小鼠腹腔注射LPS(5mg/kg)复制ALI模型。将小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、地塞米松组(2 mg/kg)和百合知母汤组(6.5、13 g/kg)。观察各药物对小鼠支气管肺泡灌洗液中性粒细胞百分比,肺组织中丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)、肿瘤坏死因子-ɑ(TNF-ɑ)、炎症因子白介素-6(IL-6)的含量变化;观察各药物对小鼠肺组织中核转录因子(NF-κBp65)和环氧化酶-2(COX-2)蛋白表达。百合知母汤组(6.5、13 g/kg)可有效降低LPS所致肺泡灌洗液中性粒细胞百分比,显著肺组织中提高SOD活性,能降低MDA含量,可显著下调NF-κBp65和COX-2的蛋白表达。百合知母汤6.5、13 g/kg可减轻LPS所致急性肺组织损伤,对LPS诱导小鼠急性肺损伤具有保护作用。     

低氧诱导因子-1α促进人甲状腺未分化癌FRO细胞侵袭转移的分子机制

目的探讨低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)对人甲状腺未分化癌FRO细胞侵袭转移的影响,并探讨其分子机制。方法用5%O2的低氧培养箱培养FRO细胞不同时间(0、2、4、8、12 h),倒置显微镜下观察细胞形态的变化,Western blot法检测细胞中上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)相关蛋白HIF-1α、Snail、E-cadherin、Vimentin、MMP2的表达;另设FRO细胞常氧组、HIF-1α特异性抑制剂3-(5’-羟甲基-2’-呋喃基)-1-苯甲基吲哚(YC-1)+常氧组、YC-1+低氧组、常氧+HIF-1α激活剂氯化钴(CoCl2)组,采用Western blot法检测各组细胞中HIF-1α和EMT相关蛋白的表达,Transwell侵袭和迁移试验检测各组细胞的侵袭和迁移能力。结果随着低氧培养时间的延长,FRO细胞逐渐发生间质样改变,低氧12 hHIF-1α、Snail、Vimentin、MMP2蛋白的表达量较0 h显著升高(P0.01),上皮细胞特征性蛋白E-cadherin的表达持续降低(P0.01)。YC-1+低氧组与低氧组比较,HIF-1α、Snail、Vimentin、MMP2蛋白的表达量显著降低(P0.01),E-cadherin蛋白的表达量显著升高(P0.05)。低氧组和常氧+CoCl2组与常氧组比较,HIF-1α蛋白的表达量显著升高(P0.01);常氧+CoCl2组与常氧组比较,Snail、Vimentin、MMP2蛋白的表达量显著升高(P0.01),E-cadherin蛋白的表达量显著降低(P0.01);常氧+CoCl2组与低氧组比较,HIF-1α、Snail、Vimentin蛋白的表达量显著升高(P0.01),E-cadherin蛋白的表达量显著降低(P0.01),MMP2蛋白的表达量差异无统计学意义(P0.05)。低氧组和常氧+CoCl2组的穿膜细胞数和迁移细胞数均较常氧组显著增多(P0.01)。结论低氧使FRO细胞中HIF-1α高表达,HIF-1α可上调Snail、Vimentin和MMP2的表达,下调E-cadherin的表达,对FRO细胞的侵袭转移具有促进作用。