血脂康对新生大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的观察血脂康对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖及胶原合成的影响,并探讨可能的分子机制。方法采用胰酶消化法分离培养Sprague-Dawley大鼠心肌成纤维细胞,建立AngⅡ诱导CFs增殖的模型,以MTT比色法和流式细胞仪检测细胞周期分析法观察血脂康对CFs数目和细胞周期的影响。AngⅡ及不同浓度血脂康作用48 h后,用天狼星红染色法检测培养上清中胶原的含量;ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β1蛋白表达;RT-PCR法检测胶原和TGF-β1 mRNA表达。结果AngⅡ对CFs增殖有明显促进作用,血脂康可明显抑制AngⅡ诱导的CFs增殖,且呈剂量依赖性;血脂康可增加G0/G1期细胞百分率,降低S、G2/M期细胞百分率,降低胶原含量、TGF-β1蛋白及胶原和TGF-β1 mRNA的表达。结论血脂康能抑制AngⅡ诱导的CFs增殖和胶原的产生,其作用可能是通过抑制TGF-β1表达实现的。     

熊果酸对血管内皮细胞增殖的影响及其机制

目的研究熊果酸(Ursolic acid,UA)对人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖及ERK1、c-Jun、c-Myc、Cyclin D1基因mRNA和蛋白表达的影响,探讨熊果酸抑制血管生长的机制。方法体外培养HU-VECs,用不同浓度熊果酸(31.5、62.5、125、250、500μg/ml)处理不同时间(12、24、48 h),MTT法检测细胞增殖抑制率。用125μg/ml熊果酸和100μmol/L PD98059(ERK抑制剂)处理HUVECs 48 h;不同浓度熊果酸处理24 h;125μg/ml熊果酸处理不同时间,RT-PCR和Western blot分别检测HUVECs中ERK1、c-Jun、c-Myc、Cyclin D1基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平。结果不同浓度的熊果酸对HUVECs的增殖均有明显的抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;经熊果酸和PD98059处理的HUVECs中ERK1、c-Jun、c-Myc、Cyclin D1基因mRNA和蛋白的表达水平均明显降低,且呈剂量和时间依赖性。结论熊果酸可通过抑制ERK信号转导通路而抑制血管内皮细胞增殖。     

藁本内酯对血管紧张素Ⅱ诱导损伤的人脐静脉内皮细胞中miR-122表达的影响及其作用机制

目的 探讨藁本内酯对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中miR-122表达的影响及其作用机制.方法 将HUVECs随机分为6组:空白组(不给药)、模型组(1×10-5 mol/L AngⅡ...     

血管紧张素转换酶2过表达对大鼠急性心肌梗死后心室重构的影响及其分子机制

目的探讨血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)过表达对大鼠急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)后心室重构的影响及其可能的分子机制。方法采用开胸结扎冠状动脉法建立SD大鼠AMI模型,将模型大鼠随机分为MI、MI+(NS)、MI+AdEGFP、MI+AdACE2组,另设SHAM(假手术)组,每组15只,MI+NS、MI+AdEGFP和MI+AdACE2组沿心肌梗死周边区选取5个点,通过直接心肌内注射方式分别注射NS、AdEGFP和AdACE2,SHAM和MI组不注射。术后4周末,采用Western blot法检测大鼠心肌梗死周边区心肌组织中ACE2、α-SMA、MKP-1、ERK1/2、p-ERK1/2、P38、TGF-β1蛋白的表达;HE染色后于普通显微镜下观察心肌组织结构及细胞炎症变化,天狼猩红-饱和苦味酸染色后于普通显微镜及偏振光显微镜下分别观察心肌胶原表达分布情况;SP免疫组化染色法检测大鼠心肌梗死周边区心肌组织中AngⅡ、Ang(1-7)、α-SMA蛋白的表达,同时采用ELISA法检测Ang(1-7)蛋白的表达;使用羟脯氨酸试剂盒检测大鼠心肌梗死周边区心肌组织中羟脯氨酸含量。结果术后4周末,MI+AdACE2组大鼠心肌梗死周边区心肌组织中ACE2蛋白的表达量显著高于其他各组,同时Ang(1-7)蛋白的表达量也显著升高(P<0.05);与SHAM组相比,MI、MI+NS、MI+AdEGFP组大鼠心肌梗死周边区心肌组织中AngⅡ、Ang(1-7)、α-SMA蛋白的表达量显著升高(P<0.05),MI+AdACE2组与MI、MI+NS、MI+AdEGFP组相比,AngⅡ、α-SMA蛋白表达水平降低,Ang(1-7)蛋白表达水平升高更显著;与MI、MI+NS、MI+AdEGFP各组相比,MI+AdACE2组大鼠心肌梗死周边区心肌组织中MKP-1蛋白的表达水平明显增加(P<0.05),p-ERK、P38、TGF-β1蛋白的表达水平降低,羟脯氨酸含量显著降低(P<0.05);HE染色和天狼猩红-饱和苦味酸染色证实,ACE2对AMI后梗死周边区的炎症反应和胶原重塑均有明显的改善作用。结论 ACE2在心肌过表达能有效改善大鼠AMI后心肌梗死周边区心肌纤维化进程,缓解心室重构,其机制可能与ACE2调节肾素-血管紧张素系统(rennin-angiotensin system,RAS)、平衡丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPK)活性相关。     

内皮素-1对人子宫肌层成纤维细胞表型分化的影响

目的探讨内皮素-1(endothelin-1,ET-1)对人子宫肌层成纤维细胞向成肌纤维细胞转化的影响。方法原代培养人子宫肌层成纤维细胞,经免疫细胞化学法鉴定后,将细胞分为实验组和对照组,实验组分别以0.1、1、10、100 nmol/L ET-1作用24 h,另以10 nmol/L ET-1分别作用6、12、24、48 h,设未处理细胞作为对照,采用实时定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)和Western blot法检测各组细胞α-SMA mRNA及蛋白的表达水平。结果人子宫肌层成纤维细胞的α-SMA蛋白染色呈阴性,波形蛋白染色呈阳性;不同浓度ET-1作用细胞24 h后,均可检测到α-SMA mRNA及蛋白的表达,与对照组相比,差异有统计学意义(P0.05),其中10 nmol/L ET-1实验组表达量最高,与0.1和1 nmol/L ET-1实验组相比,差异有统计学意义(P0.05);经10 nmol/L ET-1作用不同时间的实验组,α-SMA mRNA及蛋白均有表达,与对照组相比,差异均有统计学意义(P0.05),其中以作用48 h实验组表达最高,与作用6、12、24 h实验组相比,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 ET-1可促进子宫肌层成纤维细胞向成肌纤维细胞的转化。     

三七总皂甙对大鼠肺动脉血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的探讨三七总皂甙(Panax notoginseng saponins,PNS)对大鼠肺动脉血管平滑肌细胞(Pulmonary artery smoothmuscle cell,PASMC)增殖和凋亡的影响及其机制。方法将PASMC分为5组:对照组(不给药)、bFGF组(8 ku/L)、bFGF+低、中、高剂量PNS组(bFGF 8 ku/L+300、450、600μg/L PNS),给药24 h后,采用MTT法检测PASMC的增殖活力;流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率;Westernblot检测细胞中胱天蛋白酶-3(caspase-3)蛋白的表达。结果 PNS干预可抑制PASMC增殖,阻遏bFGF诱导的PASMC进入S期,提高滞留在G0/G1期细胞的比例,并使PASMC凋亡率和caspase-3蛋白表达上调,PASMC凋亡率达(18.70%±0.33%)～(28.40%±0.79%),是bFGF诱导组的10～14倍。结论 PNS能显著抑制bFGF诱导的PASMC增殖,促进其凋亡,其机制可能与其调控细胞周期转换、激活caspase-3蛋白的表达有关。     

人肝再生增强因子对人外周血单个核细胞增殖的影响及其机制

目的探讨人肝再生增强因子(hALR)对人外周血单个核细胞(PBMC)增殖的影响及其机制。方法梯度离心分离PBMC,将细胞分为正常对照组、刀豆蛋白A(ConA)(5mg/L)组和ConA(5mg/L)+hALR(30mg/L)组,分别培养10min、30min、1h、2h、4h后,MTT法检测各组各时间点细胞增殖水平,钙荧光指示剂法检测细胞内游离Ca2+浓度的变化,Western blot法检测细胞内胞外信号调节激酶(ERK)的磷酸化程度。结果4h内,各组细胞的增殖水平差异无统计学意义,但ConA组细胞增殖水平已表现出逐渐升高的趋势。正常对照组细胞内Ca2+浓度在加入Fluo-3/AM后2h达高峰,ConA组1h达高峰,ConA+hALR组10min达高峰。正常对照组细胞内磷酸化的ERK随培养时间的延长而逐渐减少;ConA组细胞内磷酸化的ERK在30min达高峰,之后逐渐降低;ConA+hALR组细胞内磷酸化的ERK在2h前明显低于ConA组。结论hALR可能通过影响细胞内Ca2+浓度的变化峰值和磷酸化的ERK,来抑制人PBMC的免疫功能,从而影响其增殖。     

血管生成素-2对人结肠癌细胞SW1116增殖的影响及其机制

目的探讨血管生成素-2(Angiopoietin-2,Ang-2)对人结肠癌细胞SW1116增殖的影响及其机制。方法用不同浓度的Ang-2处理SW1116细胞,MTT法检测其对SW1116细胞增殖的影响;将SW1116细胞分为正常对照、无血清DMEM、Ang-2(1.2 mg/L)及PI3K/Akt阻断剂LY294002(10μmol/L)+Ang-2组,作用24 h后,MTT法检测LY294002对SW1116细胞增殖的影响,Western blot分析Tie-2、PI3K和Akt蛋白的表达。结果 Ang-2在1.2 mg/L时,对SW1116细胞增殖的影响最显著;LY294002能有效抑制由Ang-2引起的SW1116细胞的增殖;Ang-2组与无血清DMEM组比较,Tie-2的表达略有上升,但差异无统计学意义(P>0.05),Akt蛋白的表达显著增强(P<0.01),而PI3K蛋白的表达显著降低(P<0.01),LY294002+Ang-2组中3种蛋白的表达与Ang-2组相比,均明显降低(P均<0.01)。结论 Ang-2能促进SW1116细胞增殖,LY294002可抑制由Ang-2引起的SW1116细胞的增殖,其机制可能与Tie-2/PI3′-kinase/Akt调节的信号通路有关。     

血管细胞黏附分子-1对脑心肌炎病毒体外增殖的影响及其作用机制

目的 探讨血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)对脑心肌炎病毒(encephalo-myocarditis virus,EMCV)体外增殖的影响及其作用机制.方法 将EMCV按MOI=0.001感染C2C12细胞,于感染24及48 h时,采用qPCR及W...     

8-溴-7-甲氧基白杨素诱导人肺癌(A549)细胞凋亡及其机制的探讨

目的观察8-溴-7-甲氧基白杨素(BrMChR)诱导人肺癌(A549)细胞凋亡作用,并探讨其与P53基因超甲基化的关系。方法以体外培养的A549细胞为研究对象。PI染色流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡率;凝胶电泳观察BrMChR诱导基因DNA梯形条带;甲基化特异性PCR检测A549细胞P53基因甲基化状态及BrMChR对P53基因甲基化的影响。结果 PI染色FCM分析显示0.3,3.0和30.0μmol/L的BrMChR作用于A549细胞48h后,其凋亡率分别为(2.8±0.60)%、(5.1±0.11)%、(19.8±1.74)%,其中30.0μmol/L的BrMChR组的凋亡率明显高于空白对照组(P<0.01);琼脂糖凝胶电泳呈现典型梯形DNA条带;甲基化特异性PCR显示A549细胞P53基因呈现超甲基化状态,BrMchR能逆转P53基因超甲基化。结论 BrMchR具有诱导A549细胞凋亡的作用,其作用机制可能与其逆转P53基因超甲基化作用有关。     

慢病毒介导siRNA对大鼠脊髓组织细胞外信号调节激酶1/2及核因子E2相关因子2基因的影响

目的评价慢病毒介导细胞外信号调节激酶1/2(extracellular-signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)-si RNA及核因子(nuclear factor,NF)E2相关因子2(NF-E2-related factor 2,Nrf2)-si RNA进入大鼠局部脊髓组织的转染效果。方法采用NYU撞击法构建SD大鼠脊髓损伤模型(模型组),使用微量注射器将含荧光慢病毒载体(LV-Nrf2-RNAi和LV-ERK1/2-RNAi)稀释液注射至其脊髓T10水平背侧深约0.8 mm处,荧光显微镜下观察不同时间点(12 h、24 h、72 h、7 d及14 d)转染效果。以只切除椎板,不打击脊髓的大鼠作为假手术组,在模型组和假手术组中同时设转染组和未转染组。取大鼠脊髓组织,采用RT-PCR及Western blot法检测转染后7 d时ERK1/2及Nrf2基因m RNA转录及蛋白表达水平。结果与假手术组相比,模型组大鼠脊髓组织在慢病毒转染后各时间点均有较强的荧光表达,病毒转染7 d以内,荧光强度与时间呈正相关,在转染7 d后达到高峰。转染7 d后,假手术组与模型组中ERK1/2及Nrf2基因m RNA转录及蛋白表达水平均较未转染组明显降低(P均0.05)。结论慢病毒介导si RNA转染大鼠脊髓组织,能够有效沉默ERK1/2及Nrf2基因的表达。