镰刀菌发酵培养液中纤维素酶的分离纯化

选用镰刀菌菌株液体培养产纤维素酶。将菌株在30℃、120 r.min-1摇床培养108 h,5000 r.min-1离心20 min,取上清液经硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100凝胶过滤层析和DEAE-Sephadex A-50离子交换层析进行纤维素酶的分离纯化,并用SDS-PAGE进行纯度检验。结果表明,分离纯化后的纤维素酶酶活为35.25 U.mL-1,比活力提高到19.56倍。为进一步研究纤维素酶的组分、结构奠定了基础。     

一种竹腐朽菌胞外木聚糖酶的分离和特性研究

从腐朽的竹子上分离得到一株产木聚糖酶侧耳真菌Pleurotus sp.GH196,研究了其液体振荡培养的产酶条件。适宜碳源是1%稻草粉与1%麸皮组成的复合碳源,氮源是0.2%NH4NO3。经过硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sephadex A-25离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤三步纯化得到木聚糖酶的一个主要酶活组分A。该木聚糖酶在40～50℃、pH 4.0～5.5可以保持较好的稳定性,酶活最适反应条件是温度55℃、pH 4.5。     

杂色云芝漆酶的分离、纯化和酶学特性研究

杂色云芝发酵液,经超滤、DEAE-Sephadex A250柱层析两步分离、纯化出两型漆酶。以愈创木酚与酶带在适当条件下反应呈棕红色谱带鉴定出漆酶谱带。两型漆酶分别命名为LacA和LacB。经测定两漆酶亚基的分子量分别为66.0kDa和30.7kDa;等电点pI分别为4.79和5.18;LacA的最适作用温度是40℃,LacB为50℃;保温2h, LacA的半失活温度为60℃,LacB为90℃;LacA和LacB催化愈创木酚的酶活最适pH值均为4.0; 二者的稳定pH值也都在2.5~5.5之间。LacA催化氧化愈创木酚的Km和Vmax分别为286.5molL-1和292.4nmol mL-1 min-1;LacB催化氧化愈创木酚的Km和Vmax分别为813.0mol L-1和127.4nmol mL-1 min-1。     

粘红酵母ATP:柠檬酸裂解酶基因的克隆表达和酶学性质

从粘红酵母(Rhodotorula glutinis)中克隆得到ATP:柠檬酸裂解酶基因两个亚基acl1和acl2,转化毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115进行诱导表达,通过Ni柱纯化目的蛋白,以实时波长扫描对重组蛋白的酶学性质进行测定.SDS-PAGE分析表明,两个亚基ACL1和ACL2的分子量分别为...     

绳状青霉β-葡萄糖苷酶的分离纯化及其酶学性质研究

从绳状青霉（Penicillium funiculosum）深层发酵液中分离得到一种未知的β-葡萄糖苷酶,并对其酶学性质进行初步分析.粗酶液经硫酸铵沉淀、DEAE-Sephadex A-25离子交换层析、Sephadex G-50凝胶过滤层析等步骤,获得了一种凝胶电泳均一的β-葡萄糖苷酶,经SDS-PAGE测得其分子量为19 kDa,其最适反应温度为60℃、最适反应pH值为4.5.     

高强度耐有机溶剂蛋白酶的纯化及性质

分离纯化了自行筛选的耐有机溶剂的地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis YP1所产的溶剂稳定性蛋白酶. 发酵液经硫酸铵沉淀、疏水层析及强阳离子交换层析纯化,得到电泳纯的蛋白酶;分子量约为28 kDa,纯化蛋白酶的比酶活达到1.18′105 U/mg,纯化倍数为37.2,酶活回收率为20.8%. 纯化的YP1蛋白酶对50%(j)的多种亲水或疏水有机溶剂具有很高的耐受性,其中50%(j)的DMF和DMSO能显著促进YP1蛋白酶活力. YP1蛋白酶为Zn2+蛋白酶,最适反应温度为55℃,最适反应pH为10.0,pH 8.0~13.0范围内具有高活力. 以酪蛋白为底物,YP1蛋白酶的米氏常数Km为0.048 g/L.     

1,3-丙二醇脱氢酶-步纯化与杂化凝胶固定化的初步研究

转录表达来源于Klebsiella.pl,3-丙二醇脱氢酶(PDH)基因片段的E.coli工程菌,在5L发酵罐、30℃、pH值7.0、200r/min(微氧)条件下培养20h;发酵菌体经破碎分离后所得样品通过HisTrap HP柱亲和层析一步纯化得到电泳纯的PDH,纯化倍数为2.94倍,活性回收率为50%,经SDS-PAGE电泳鉴定获得一条清晰条带,表达蛋白亚基相对分子质量约为41kDa.用改进的溶胶-凝胶法(杂化凝胶)包埋纯化酶,考察正硅酸乙酯(TEOS)浓度、海藻酸盐(ALG)浓度、CaCl2浓度及ALG与TEOS体积比等因素对酶固定化效果的影响,结果表明,较优包埋条件为:p(TEOS)=20g/L,p(ALG)=30g/L,p(CaCl2)=40g/L,V(ALG):V(TEOS)=3:1;由此制备的PDH的ALG-SiO2杂化凝胶保藏60天后酶活仍保持80%,进行批次反应时,反应3批后酶活保持7013%,反应第6批时酶活剩余29.8%.     

Nocardia sp.腈水合酶的纯化过程研究

对Nocardiasp.高活力腈水合酶进行了纯化研究。在细胞破碎中,超声时间对腈水合酶比酶活存在一个最优值,超声时间为20.00min时得到的比酶活最高。在离子交换层析过程中,采用DEAE-Sepharose作为层析介质,分别对平衡缓冲液pH、离子强度和线性梯度洗脱体积进行了优化。结果表明,采用pH7.20、50mmolL-1的Na2HPO4-NaH2PO4溶液作为平衡缓冲液,0.00~1.00molL-1的NaCl线性梯度洗脱,洗脱体积为20~25倍柱体积,此条件下腈水合酶的纯化倍数和酶活收率较佳。以Phenyl-SepharoseFF为层析介质研究了疏水层析精制腈水合酶的工艺过程,采用两步层析优化方法纯化出的Nocardiasp.腈水合酶比酶活达到2648.0U穖g-1,酶活收率为40.84%,用SDS-PAGE检测其纯度为99.00%以上。Nocardiasp.腈水合酶的两个亚基分子量分别为22.90kDa和27.38kDa。     

糙皮侧耳菌漆酶的分离纯化及部分性质研究

对糙皮侧耳菌5.42产生的漆酶粗酶液通过超滤浓缩、DEAE-Cellulose和SephadexA-50纯化,得到纯化18.1倍漆酶,得率36%,用PAGE检测为单一条带,用SDS-PAGE证明漆酶的分子量为61.4 kD,而用经过高效液相色谱分离的酶液进行质谱检测分子量为60.5 kD。该酶最适温度为40℃,最适pH为5.0。金属离子对酶活有很大的影响,其中K+、Mn2+、Cu2+有明显促进作用,Hg2+、Ag+、Ba2+等对酶活有明显的抑制作用。该酶与果胶酶按比例组合在一起,对荨麻生物脱胶取得良好的脱胶效果——木质素去除率为85%。     

Kitasatospora sp.MY 5-36中e-聚赖氨酸降解酶的纯化及酶学性质

对Kitasatospora sp. MY 5-36中e-聚赖氨酸降解酶(PLD酶)进行了纯化和酶学性质研究. 通过DEAE-Sepharose, Source 15Q, Mono Q三步阴离子交换层析从细胞中得到纯酶，收率达40.7%，纯化倍数为500倍. 经SDS-PAGE电泳、凝胶过滤层析检测PLD酶由2个同聚亚基组成，亚基和全酶相对分子量分别为43.6和87.0 kDa. PLD酶的最适反应温度为30℃，最适pH值为7.0, 20~40℃保存时酶活力稳定，50~60℃保存时酶活力迅速下降，最大反应速率Vmax=0.112 mmol/(L×min), 米氏常数Km=0.216 mmol/L. PLD酶是一种金属酶，能够被Co2+激活、被Ca2+抑制.     

菊粉酶及其制备低聚果糖研究进展

低聚果糖作为一种功能性低聚糖,具有增殖肠道有益菌等独特的生理功能,近年来备受关注。文章主要从菊粉提取、微生物产菊粉酶、酶法制备低聚果糖及其下游分离纯化等方面,综述了近年来菊粉酶及其制备低聚果糖的国内外研究进展与现状。     

纳滤法制备高纯度雪莲果低聚果糖及其结构表征

采用纳滤分离技术以雪莲果为原料纯化低聚果糖,通过Box-Behnken中心组合设计（CCD）及响应面分析（RSM）建立预测低聚果糖纯度的二次多项数学模型,优化分离纯化工艺。结果表明：操作压力0.15 MPa,循环流量5.3 mL/min,pH值2.7时,纯化倍数为5,实际低聚果糖纯度为95.1%,达到P级产品标准。通过应用HPLC-MS、IR、¹H NMR及¹³C NMR等对雪莲果低聚果糖组分的纯度、组成、结构进行表征,结果表明：分离纯化得到的雪莲果低聚果糖由蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖组成,纯度为95.1%,平均包含5个果糖单元,主要是由β-呋喃构型的果糖组成。     

几种亲和色谱吸附剂的制备及其在二氢蝶啶还原酶分离纯化中的应用

为了分离纯化二氢蝶啶还原酶制备了海格纳明吸附剂[Higenaminecarboxylic Acid(HGCA)-Sepharose]和萘醌吸附剂[Naphthoquinone(NO)-Sepharose]。酶的纯化经过了硫酸铵沉淀以及 DEAE-Sephacel、Matrex Gel、Blue A、NQ-Sepharose 和 HGCA-Sepharose一系列柱层析步骤。二氢蝶啶还原酶的电泳图谱显示了单一的谱带,相当于分子量26000的亚基。     

生物法拆分外消旋甲霜灵制备R-甲霜灵

从土壤和污泥样品中分离得到一株能不对称水解甲霜灵的革兰阴性菌。通过分子生物学鉴定,命名该菌株为Albibacters sp.zjut528。当底物浓度为50 g·L~(-1),湿菌体(含水量81%):底物=0.3:1(质量比),反应28 h,产物得率为47.1%,主产物为R-甲霜灵酸,对映体过量值eep99.9%。将菌株细胞破碎得到的粗酶液分离纯化得到一个SDS-PAGE电泳纯的酯酶,分子量约为40×10~3,酶的N端10个氨基酸序列为NH2-Ala-Ala-Lys-Ala-Pro-Leu-Arg-Leu-Lys-Glu。该酶最适温度为40℃,20~40℃稳定性较好。最适pH为9.0,在pH 5.0~10.0范围内稳定。Fe~(2+)、Mn~(2+)、Zn~(2+)对酶活有促进作用,Fe~(3+)对酶活有一定的抑制作用。在含有20%的乙腈、异丙醇、丙酮、二异丙醚、环己烷、正己烷的水溶液中,酶活均比在纯水相中有明显提高。该酶反应动力学符合米氏方程,Vm为0.18 mmol·L~(-1)·min-1,Km为2.29 mmol·L~(-1),Kcat为0.85 min~(-1)。建立了一条利用Albibacters sp.zjut528细胞作催化剂拆分甲霜灵制备R-甲霜灵的工艺路线,终产品R-甲霜灵的纯度是96.2%,ee值为99.3%。     

改性色谱分离树脂的制备及在果糖分离中应用

通过直接对KRS-1色谱分离树脂进行表面氟化改性,调节氟的加量,使氟原子在树脂骨架上分布,在树脂表层形成橡胶弹性体,试验证明,该氟化改性色谱分离树脂用于果葡糖浆中果糖分离,果糖质量分数及分离度均高于未氟化树脂,力学性能也得到提高,树脂破碎率远低于未氟化树脂.最适宜氟化试验反应条件为:V(N2)∶V(F2)为9∶1,氟气...     

三相法分离番薯过氧化物酶

采用三相法(TPP)分离纯化番薯过氧化物酶(SPP),以番薯过氧化物酶的酶活回收率和纯化倍数为优化目标,分别利用单因素法和响应面分析法对其影响因素进行考察。建立了最佳提取条件:以叔丁醇作溶剂、硫酸铵饱和度为66%、粗提物与叔丁醇体积比为1. 0∶1. 13、温度为26℃、pH=5. 0,在最优提取条件下,其酶活回收率和纯化倍数分别达133. 5%和3. 5。SDS-PAGE电泳分析结果显示SPP酶蛋白主要为一条带,其分子质量约为40 kDa左右。三相法操作简便、耗时短、成本低,此外分离过程增强了SPP酶与底物的亲和力,提高了酶活回收率,有利于工业化应用。     

超高效色谱柱分析测定中草药中低聚果糖的方法研究

采用超高效色谱柱建立高效液相色谱法测定中草药中低聚果糖的方法。通过小颗粒色谱柱的高塔板数分离能力,有效排除中草药基质干扰,并准确定量中草药中低聚果糖的含量。结果表明,建立的测试方法下,低聚果糖中蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五塘的标曲线性关系良好,相关系数均在0. 999以上,检出限均为0. 3 g/100 g、回收率在95%～105%之间,相对偏差均小于4%。该测定方法操作简单、高效,适合中草药中低聚果糖含量的检测分析。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定蔬菜中葡萄糖、果糖、蔗糖及山梨醇含量

建立了超高效液相色谱-串联质谱联用测定蔬菜中葡萄糖、果糖、蔗糖及山梨醇含量的分析方法。以50%乙腈水溶液为提取溶剂,以乙腈-水(75∶25,体积比)为流动相,以Agilent Carbohydrate分析型色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)分离,采用大气压化学电离源负离子模式检测。结果表明,葡萄糖、果糖、蔗糖及山梨醇的检出限为0.1～1.0 mg·L~(-1),回收率为89.9%～105.2%,相对标准偏差RSD为2.7%～8.7%。该方法具有样品前处理简便、灵敏度高、线性范围宽等优点。     

从液相培养米曲霉体中提取氨基酰化酶

液相培养米曲霉茵体具有生长速度快;茵体和培养基易分离等优点,培养得到的氨基酰化酶主要存在于细胞内,而α-淀粉酶则主要存在于发酵液中.通过细胞破碎、抽提和(NH4)2SO4分步盐析,再经聚乙二醇浓缩后得到的氨基酰化酶液的酶活为1 067 U·ml-1,纯化了1.99倍,总收率为77.86%;用丙酮沉淀法从发酵液中沉淀分离得到的口α-淀粉酶粉的酶活可达1 195.3U·g-1,纯化了2.6倍,最终收率为89.8%.从米曲霉的液相培养发酵物中同时提取两种工业用酶,工艺简单,酶活收率高,无需复杂的精制过程.     

季铵盐催化合成7,7-二氯双环[4.1.0]庚烷

研究了季铵盐A-1催化二氯卡宾与环己烯的加成反应,考察了不同相转移催化剂的催化活性、反应温度、催化剂用量、反应时间对产物7,7-二氯双环[4.1.0]庚烷收率的影响.在优化反应条件(即反应温度为50C,反应时间为5 h)下,以季铵盐A-1为相转移催化剂,产率可达94.0%.实验证明,季铵盐A-1的催化活性要优于其他短碳链的季铵盐和聚乙二醇,并且在分离过程中不乳化,使产物易于分离纯化.