蛋清源活性肽抗氧化及抗炎活性

食源性抗氧化肽安全性高,抗氧化能力较好,近年来成为多肽研究领域的热点。本实验以蛋清源抗 氧化肽WNWAD（Trp-Asn-Trp-Ala-Asp）,及其拆分肽WNW（Trp-Asn-Trp）、WAD（Trp-Ala-Asp）、WN （Trp-Asn）、AD（Ala-Asp）为研究对象,首先采用2’-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（2,2’-azino-bis(3- ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS）体外抗氧化评价方法,对5 条肽的抗氧化活性进行了评价,建立H2O2 诱导的人胚肾细胞（HEK293）氧化损伤模型,利用HEK293细胞模型评价5 条肽的抗氧化活性,然后检测抗氧化 肽WNWAD对细胞氧化型谷胱甘肽（oxidized glutathione,GSSG）含量的影响,最后利用酶联免疫吸附测定试剂盒 检测了炎症因子人白细胞介素-8及人肿瘤坏死因子的含量。结果表明：活性肽浓度为40 μmol/L时,WNWAD清除 ABTS＋?能力最强,Trolox抗氧化当量（Trolox equivalent antioxidant capacity,TEAC）为（98.411±0.020）μmol TE/L, 其次为WN、WNW、WAD,其TEAC分别为（96.629±0.008）、（94.978±0.003）、（88.807±0.003）μmol TE/L, AD没有ABTS＋?清除能力。在H2O2浓度为400 μmol/L时,细胞相对存活率为（50.240±0.505）%,有高度显著性差 异（P＜0.001）,不同浓度的蛋清源活性肽对H2O2诱导的HEK293细胞氧化损伤均有保护作用,且随着各条肽浓度 升高保护作用呈增强趋势,其中WNWAD的保护作用最强,浓度为30 μmol/L时,细胞存活率已高达99.12%。并且 WNWAD可明显降低细胞中GSSG含量,降低炎症因子人白细胞介素-8和人肿瘤坏死因子的含量。以上研究结果显 示蛋清源活性肽对降低HEK293细胞氧化应激水平、提高细胞抗氧化能力、抗炎能力等有重要作用。     

蛋清源活性肽对过氧化氢诱导的HEK293细胞抗氧化酶活力及白细胞介素8分泌的影响

食源性抗氧化肽由于抗氧化能力较好、安全性高,逐渐成为多肽研究领域的热点。本实验以H2O2诱导HEK293细胞损伤建立氧化损伤模型,研究了蛋清源活性肽WNWAD（Trp-Asn-Trp-Ala-Asp）及其结构改造肽WNW（Trp-Asn-Trp）、WAD（Trp-Ala-Asp）、WN（Trp-Asn）对H2O2诱导损伤的HEK293细胞的存活率、活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平、抗氧化酶活力及细胞因子白介素8（interleukin-8,IL-8）分泌的影响。结果表明：蛋清源活性肽对HEK293细胞存活率的影响极显著（P＜0.01）,不同浓度蛋清源活性肽WNWAD、WNW、WAD、WN作用于氧化损伤的HEK293细胞后,其存活率明显提高,呈现浓度依赖性;其中1.0 μmol/L蛋清源活性肽WNWAD、WNW、WAD、WN处理细胞后,存活率从损伤组的（48.0±2.4）%分别提高到（99.7±1.8）%、（69.4±3.2）%、（78.9±5.1）%、（72.1±3.6）%,与损伤组有极显著性差异（P＜0.01）;H2O2诱导HEK293细胞内ROS的产生,经过活性肽预处理后细胞内ROS的水平极显著降低（P＜0.01）;随着蛋清源活性肽WNWAD、WNW、WAD、WN浓度的升高,总超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶3 种酶的活力均有所提高,呈现浓度依赖型关系。最后利用酶联免疫吸附测定试剂盒测定了HEK293细胞中IL-8的分泌量,经过H2O2处理的HEK293细胞上清液中IL-8含量极显著升高（P＜0.01）,加入WNWAD、WNW、WN、WAD后,细胞中的IL-8含量均有所降低,其中WNWAD和WN影响显著（P＜0.05）。以上结果显示蛋清源活性肽对降低HEK293细胞氧化应激水平和提高细胞抗氧化能力有积极的影响。     

刺参低聚肽的质量评价和抗疲劳作用研究

研究p H渐变条件下采用碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶分步酶解猪皮得到的不同分子量胶原蛋白肽的体内外抗氧化活性。猪皮预处理后,采用碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶分步进行酶解,酶解液经超滤得到M1 k Da、1 kDaM3 kDa、M3 kDa 3个不同分子量肽段,以福林酚比色法测定各组分肽含量,通过测定各组分肽段对DPPH自由基、ABTS+自由基、O2-自由基及OH自由基的清除实验评价各组分肽的体外抗氧化活性,再以不同分子量肽段酶解液对小鼠进行灌胃,以试剂盒测定小鼠灌胃后血清的总超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶的活性、总抗氧化能力和微量丙二醛含量评价各组分肽的体内抗氧化活性。综合体内外抗氧化实验数据,各组分肽的抗氧化能力强弱顺序为:小于1 kDa组分1 k Da～3 kDa组分大于3 kDa组分。pH渐变条件下采用碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶分步酶解的各组分猪皮胶原蛋白肽在体内外均有不同程度的抗氧化能力,且分子量越小,抗氧化活性越强,可对机体起到保护作用。     

海地瓜多肽分离及抗氧化活性研究

本文检测评价海地瓜体壁干粉及多肽氨基酸组成,通过超滤膜分级过滤技术及层析色谱分离技术分级分离海地瓜酶解多肽,采用生化水平及细胞水平抗氧化活性分析方法研究海地瓜多肽抗氧化活性特征。研究显示,海地瓜体壁干粉及酶解多肽氨基酸含量丰富,检测的19种氨基酸总量分别占样品干重的63.06%及82.90%;其中,必需氨基酸含量分别为10.87%及15.60%。海地瓜酶解多肽小分子肽(3 kDa)含量最高,达到43.9%;其次是分子量为3 k~10 kDa的多肽,含量为36.8%;而10 kDa的多肽含量最低,仅为19.3%。三种海地瓜多肽中,小分子多肽(3 kDa)抗氧化活性最高,ABTS法及FRAP法检测的TEAC值分别为0.61±0.03 mmol Trolox/g及0.32±0.02 mmol Trolox/g。海地瓜多肽明显增强HepG-2及HEK293细胞抗H2O2氧化损伤能力,且小分子多肽(3 kDa)活性高于其他组分;G-25层析分离海地瓜小分子多肽(3 kDa),形成6个主要吸收峰,对其样品抗氧化分析结果显示第5峰多肽样品抗氧化活性最高。     

海参肽的提取分离及其体外抗氧化活性

以水解度为指标,试验研究了复合蛋白酶、木瓜蛋白酶、水产蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶和碱性蛋白酶对海参蛋白的水解能力,确定以复合蛋白酶为最佳用酶。以料液比、加酶量、酶解时间为试验因素,水解度为响应值,通过响应面法对提取工艺进行优化,结果表明该酶最佳酶解条件为:加酶量0.79%、料液比1︰5.35 (g/mL)、酶解时间3.93 h。在此条件下,海参蛋白水解度为21.38%。分别用截留分子量3 kDa和1 kDa超滤膜对海参肽进行分级分离,得到分子量大于3 kDa, 1～3 kDa和小于1 kDa 3种海参肽,将不同分子量海参肽分别在ABTS+·清除活性、还原力、DPPH·清除活性、O_2~-·清除活性4种体系下比较三者体外抗氧化能力。结果显示:分子量小于1 kDa海参肽对ABTS+·、O_2~-·清除活性最强, 1～3 kDa海参肽次之,大于3 kDa海参肽最弱;分子量大于3 kDa海参肽还原力以及对DPPH清除活性最强。     

巫山神茶对H2O2诱导293T细胞氧化损伤的改善作用

以巫山神茶为研究对象,通过DPPH、ABTS、OH及O₂^-自由基清除实验考察其体外抗氧化活性。采用MTT法测定巫山神茶对293T细胞氧化损伤的细胞存活率,并使用试剂盒比色法和实时荧光定量PCR法测定MDA、SOD、CAT、GSH、GSH-Px含量及相关基因的表达。另外,以HPLC法分析了巫山神茶的主要活性成分。结果表明,巫山神茶对DPPH、ABTS、羟基及超氧阴离子自由基有显著的清除效果,且呈现浓度-效应依赖性。不同浓度巫山神茶(40、100、160 μg/mL)处理后的293T细胞存活率均超过93%,说明无明显的毒性作用。对比正常组,过氧化氢(0.3 mmol/L)可显著(P<0.05)导致293T细胞氧化应激损伤,经巫山神茶处理后受损细胞的存活率提高,其中高浓度(160 μg/mL)处理下的细胞的存活率达75.6%。同时,巫山神茶处理还能显著(P<0.05)降低MDA含量,提高CAT、SOD、GSH及GSH-Px含量。实时荧光定量PCR检测相关抗氧化基因也提示巫山神茶能上调CAT、SOD、GSH及GSH-Px的mRNA表达量。此外,通过HPLC分析,从巫山神茶中检测到以下9种生物活性成分:绿原酸、表儿茶素没食子酸酯、对香豆酸、异槲皮苷、二氢槲皮素、槲皮苷、黄芩苷、槲皮素、根皮素。总之,巫山神茶具有较好的体外抗氧化能力,能够改善由H₂O₂诱导的293T细胞氧化损伤且效果显著,其药理价值可考虑进一步深入研究。     

核桃粕固态发酵酱油的制备及抗氧化性分析

目的：以米曲霉为菌种制备核桃酱油,开发功能性酱油。方法：制备酱油基础上,利用高效液相色谱仪、全自动氨基酸分析仪和气相色谱仪测定酱油营养成分,使用超滤对10 kDa以下组分进行分离,然后测定核桃酱油组分中多肽含量、ABTS自由基清除能力、羟自由基清除能力及DPPH自由基清除能力。结果：核桃酱油中16种氨基酸总含量为4.86 g/100 g,不饱和脂肪酸含量占脂肪酸总量的82.84%。核桃酱油组分中多肽含量为6.804 g/100 mL,当多肽质量浓度为3.6 mg/mL时,核桃酱油组分ABTS自由基清除能力达到95.13%、羟自由基清除能力达到28.20%、DPPH自由基清除能力达到20.08%。结论：核桃酱油组分具有较高的抗氧化性,且其抗氧化能力与多肽含量有关。     

Osborne法分级提取五味子蛋白及抗氧化活性比较

目的:采用Osborne法提取五味子各组分蛋白,并对其体外抗氧化活性比较研究。方法:用Osborne方法分级提取五味子中的蛋白质,得到四种组分蛋白:清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白,对其进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶（sodium lauryl sulfate-polyacrylamide gel,SDS-PAGE）电泳分析,并对不同组分蛋白和总蛋白的体外抗氧化活性进行对比研究。结果:分级提取得到的四种蛋白质,清蛋白亚基分子量分布在15~25 kDa和40~55 kDa,球蛋白分子量大致分布在15~25 kDa和35~55 kDa,谷蛋白亚基分子量在15~20 kDa和30~40 kDa。以五味子总蛋白为参照物,体外抗氧化试验结果表明,总蛋白对羟基自由基和DPPH自由基的清除能力强于各分级蛋白;四种分级蛋白对Fe3+的还原能力强于总蛋白;在ABTS自由基清除试验中含量最高的谷蛋白效果最佳,其清除效果在一定的浓度下与Vc接近,同时,其在羟基、DPPH自由基与Fe3+还原能力的试验中抗氧化活性良好,表明五味子组分蛋白中谷蛋白可作为一种良好的抗氧化潜在物质。     

小米抗氧化肽的纯化及其抑制H2O2诱导损伤的胰岛素瘤细胞氧化应激作用

本研究利用Sephadex G-25和DEAE-32对小米抗氧化肽进行纯化,利用醋酸纤维素薄膜电泳法测定小米抗氧化肽的纯度,以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、超氧阴离子自由基、羟自由基清除实验考察纯化的小米抗氧化肽对自由基的清除能力。在细胞水平研究小米抗氧化肽对胰岛细胞的保护作用,利用H2O2进行大鼠胰岛素瘤细胞（INS-1）氧化应激造模,采用2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯荧光探针法检测细胞内活性氧（reactive oxygenspecies,ROS）水平,3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐法检测细胞活力,采用流式细胞技术检测细胞凋亡率,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测抗氧化酶的表达水平。结果表明：经过Sephadex G-25和DEAE-32两次层析,小米抗氧化肽达到了电泳纯;50 μg/mL小米抗氧化肽对超氧阴离子自由基、羟自由基和DPPH自由基的清除率分别为（62.71±3.86）%、（73.56±4.51）%和（82.62±5.25）%;小米抗氧化肽能显著提升H2O2损伤后细胞活力,降低细胞内ROS水平,抑制H2O2诱导损伤的INS-1细胞的凋亡（P＜0.05）,其可能的机制与超氧化物歧化酶1、过氧化氢酶、谷胱甘肽巯基转移酶、醌氧化还原酶1等抗氧化酶系的表达上调有关。结论：小米抗氧化肽对H2O2诱导损伤的INS-1细胞氧化应激具有一定的保护作用。     

蛋清源抗氧化肽对HEK293细胞氧化应激损伤的抑制作用及机制

食源性抗氧化肽以其安全性高,抗氧化能力好,逐渐成为多肽研究领域的热点。本文以蛋清卵黏蛋白胃蛋白酶水解产物为原料,以蛋清源五肽作为研究对象,首先,采用基于不同机理的体外抗氧化活性化学测定方法,对8条蛋清源五肽的抗氧化活性进行评价。DPPH自由基清除活性最强的为五肽CFDVF,浓度为1.0 mmol/L时,其自由基清除率为50.14%±2.1%;ABTS+·自由基清除能力最强的为五肽VYQFL,浓度为100μmol/L时,TEAC值为(94.66±0.37)μmol/L TE/100μmol/L;ORAC活性最强的为五肽WNWAD,TEAC值为(2.53±0.18)μmol/L TE/μmol/L。接着,利用HEK293细胞氧化损伤模型评价8条五肽的抗氧化活性,其中五肽WNWAD(Trp-Asn-Trp-Ala-Asp)的氧化应激抑制活性最强。同时,细胞毒性试验证明,五肽本身对细胞无毒副作用,也无促进增殖作用。最后,综合体外化学和细胞试验结果,筛选出WNWAD进行蛋清肽氧化应激抑制机制研究。首先采用试剂盒方法检测细胞内LDH活性和MDA含量,以及抗氧化酶CAT、T-SOD和GSH-PX的活性,结果表明H2O2可导致细胞LDH释放率上升,MDA含量增高,而WNWAD可以抑制脂质过氧化进程,维持细胞膜完整性,提高细胞内LDH活性,降低MDA含量;H2O2可以抑制细胞内抗氧化酶CAT、T-SOD和GSH-PX的活性,而经过WNWAD预处理,可以显著增强其活性;随着肽浓度的升高,3种酶的活性均有所提高,呈浓度依赖型关系,尤其在肽的浓度为1.0μmol/L时,过氧化氢酶(CAT)活力为(20.63±0.51) U/mg蛋白、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力为(179.39±5.73)U/mg蛋白,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)为(33.97±5.02)个活力单位,较对应损伤组的酶活性均有显著性提高(P0.01);最后,利用蛋白质免疫印迹技术检测细胞内抗氧化酶相关蛋白表达水平,结果表明:WNWAD预处理可在一定程度上恢复H2O2诱导损伤的HEK293细胞中抗氧化酶CAT、SOD和GSH-PX的蛋白表达水平。     

过氧化氢强化两段氧脱木素

研究表明,在两段氧脱木素过程加入过氧化氢会提高脱木素效果,且加在氧脱木素的第二段比加在第一段时的脱木素率和选择性指数(脱木素率与黏度损失率的比值)好;综合考虑,建议过氧化氢的用量控制在2～3kg/t;螯合处理对脱木素率与选择性指数也有影响,建议采用Q-O-OP处理程序,且螯合处理在酸性条件下的效果较好。     

分光光度-低压离子色谱法测定Cu2+、Ni2+、Zn2+、Pb2+、Fe2+和Mn2+

建立了分光光度-低压离子色谱法测定Cu2+、Ni2+、Zn2+、Pb2+、Fe2+和Mn2+6种重金属离子的分析方法.选用柠檬酸-草酸混合液作为洗脱体系进行梯度洗脱,将6种金属离子完全分离,柱后采用1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚(PAN)进行衍生反应,于波长560 nm处进行检测.6种离子的检出限分别为0.006、0.012、0.005、0.125、0.070、0.020 mg/L.该方法用于环境水样测定,结果与原子吸收法所测值基本吻合,分析结果令人满意.     

乙炔敏感元件的研制

以ＳｎＯ２为基质材料，掺杂微量的Ｐｄ，Ａｕ等元素制成了对乙炔敏感的气体传感器，研究了器件的灵敏度、响应、恢复特性、长期稳定性等敏感特性。结果表明该传感器具有一定的实用价值．     

构皮过氧化氢草酸盐法制浆初探

本论文研究了蒸煮最高温度、蒸煮液的酸碱度、保温时间、草酸钠及过氧化氢用量对构皮过氧化氢草酸盐法制浆的影响。研究表明：蒸煮液的酸碱度对木素脱除影响较显著，中性偏弱酸性条件有利于木素的去除，较佳的构成过氧化氢草酸盐法蒸煮工艺条件为：草酸钠用量20％，碳酸钠0.5%，过氧化氢10％，最高温度90℃，保温时间1h，液比1∶10,pH值4.82-8.71。蒸煮结果为：粗浆得率71.22%，卡伯值36.12。     

UV+H2O2和UV+H2O2+Fe2+化学氧化处理CEH漂白废水研究

采用UV+H2O2和UV+H2O2+Fe2+二种高级化学氧化工艺处理硫酸盐苇浆CEH漂白废水,研究了氧化剂用量、Fe2+浓度、初始pH值、处理时间等因素与处理效果(以COD和色度为指标)的关系.研究表明,添加Fe2+可大大加速体系对有机污染物氧化降解,H2O2用量对COD和色度的去除影响显著,硫酸盐苇浆CEH漂白混合废水pH值呈较强的酸性,适合于采用UV+H2O2+Fe2+工艺氧化处理.     

添加助剂的过氧化氢漂白

麦草ＮａＯＨＯ２／ＮａＯＨ两段蒸煮纸浆具有良好的可漂性,采用简单的酸处理Ｈ２Ｏ２漂白（ＡＰ）程序,仅用１５%的Ｈ２Ｏ２可使漂白浆的白度达到７４%～７５３%（ＩＳＯ）。为了进一步提高麦草ＮａＯＨＯ２／ＮａＯＨ两段蒸煮纸浆无氯漂白的效果,又进行了添加助剂的Ｈ２Ｏ２漂白试验。１试验部分漂白用浆为麦草ＮａＯＨ预处理Ｏ２／ＮａＯＨ蒸煮的氧碱浆,其白度为５９４%（ＩＳＯ）,卡伯值１０９,粘度８２７ｍｌ／ｇ。漂白采用酸处理Ｈ２Ｏ２漂白（ＡＰ）程序,浆样先用Ｈ２ＳＯ４进行预处理,再进行Ｈ２Ｏ２漂白。酸处理在烧杯中进行,Ｈ２…     

蔗渣化机浆过氧化物漂白及返黄的研究

本文的研究表明,白度为31.1％的蔗渣CMP原浆在H_2O_2消耗约4％时经单段或两段H_2O_2漂白后,白度分别达54.8％和75％;瀑白前后分别用EDTA、草酸等处理能有效地提高白度;H_2O_2总量不变时,提高第二段H_2O_2用量有利于浆料白度的提高。增加漂白段数能有效地减少漂浆返黄。与未漂浆相比,漂白浆的打浆度、成纸紧度、撕裂度和裂断长均有提高,不透明度下降。FI-IR显示用H_2O_2漂白蔗渣CMP浆有一定脱木素作用。     

氯化钙用于高得率浆H2O2漂前预处理

研究了CaCl2用于高得率桦木浆H2O2漂前预处理的效果，并与DTPA、EDTA、H2SO4等预处理剂的预处理效果进行了比较。结果表明，CaCl，是一种优良的预处理剂。CaCl2预处理的适宜条件为：用量0．5％，pH值7，温度40℃，时间25min。     

Antityrosinase and antimicrobial activities of 2-phenylethanol, 2-phenylacetaldehyde and 2-phenylacetic acid

The inhibition kinetics of 2-phenylethanol, 2-phenylacetaldehyde and 2-phenylacetic acid on the enzyme activity of mushroom tyrosinase have been investigated. The results showed that these aromatic compounds can lead to reversible inhibition of the enzyme; furthermore, 2-phenylacetaldehyde and 2-phenylacetic acid are uncompetitive inhibitors and 2-phenylethanol is a mixed-type inhibitor. The inhibition constants have been determined and the inhibiting ability was: 2-phenylacetaldehyde > 2-phenylacetic acid > 2-phenylethanol, indicating that the functional group on the benzene ring group played an important role in the inhibition of the enzyme. In addition, 2-phenylacetic acid and 2-phenylethanol were found to have effective antibacterial activities, and 2-phenylacetic acid was more effective against Escherichia coli and Ralstonia solanacearum than 2-phenylethanol, but 2-phenylacetaldehyde lacked of antibacterial activity.     

纯棉织物酶氧前处理工艺

采用正交试验优化了复合酶退浆煮练一步法-双氧水漂白前处理工艺中的漂白工艺,并讨论了复合酶退浆煮练后水洗工序对织物性能及退浆煮练废水的影响。结果表明,优化的双氧水漂白工艺为:汽蒸时间60 min,双氧水8 g/L,稳定剂HD-181 12 g/L,螯合分散剂HD-128 1 g/L。复合酶退浆煮练后不进行水洗,对织物白度、断裂强度和即时吸水性没有影响,而且简化了工艺,减少了用水量和能耗,还使前处理废水的COD至少降低了20%。