花椒果皮基因组DNA提取: 不同试剂盒性能评估与比较研究

摘 要: 目的 通过比较不同植物试剂盒在花椒果皮DNA提取中的差异, 探究适用于花椒果皮的基于离心柱法的DNA提取试剂盒。方法 选取8种不同品种的花椒, 利用TIANGEN DNAsecure新型植物基因组DNA提取试剂盒(Tiangen-Ⅰ)、DNeasy Plant Mini Kit (DNeasy)、多糖多酚植物基因组DNA提取试剂盒(Tiangen-Ⅱ)、Nucleospin ? Food kit (Nucleospin) 4种基于离心柱法的试剂盒提取花椒果皮基因组DNA, 通过对比提取到的DNA浓度、纯度、聚合酶链式反应扩增能力, 以及提取过程中的成本、耗时等因素, 基于简单加权(simple additive weighting, SAW)分析对比不同试剂盒对于花椒果皮DNA的提取的效果, 并进行综合评分。结果 不同试剂盒各有优缺点, 最终Tiangen-Ⅰ试剂盒得分1.64, 排名第一, 综合考虑价格、所用时间与提取得到的DNA质量, Tiangen-Ⅰ试剂盒是更适用于花椒果皮DNA提取的试剂盒; 同时, Nucleospin试剂盒在提取得到的花椒DNA质量方面有着较好的表现。结论 本研究以花椒为例探究干扰组分较多植物的基因组DNA试剂盒提取方案, 通过比较Tiangen-Ⅰ试剂盒被推荐作为最佳选择, 本研究为花椒果皮及其他相似植物的基因组DNA提取提供了参考方案。     

花椒果皮的研究进展

综述了国内外对花椒果皮的研究成果以及产品的开发应用,为我国花椒资源的综合利用提供依据。     

花椒风味物质不同提取方法的比较

研究了花椒风味的索氏提取法、水蒸气蒸馏法和同时蒸馏法三种提取方法.对比了花椒油树脂得率、提取时间、试剂用量和感官品质,结果表明:同时蒸馏萃取法是最好的提取方法.     

花椒香气成分提取方法的研究现状

本文简单地介绍了花椒所合成分的作用,主要叙述了蒸馏法、萃取法、蒸馏-萃取联用等提取方法,及其提取花椒香气成分的研究应用进展,并提出花椒产业中存在的一些问题和看法。     

从花椒中提取花椒精油的实验研究

探讨从花椒果实中萃取花椒精油的影响因素,讨论了影响萃取率的实验条件：即用无水乙醇作溶剂,采用回流方法,控制在４ｈ提取效果较好,产率１１．８４％,产品既能保持花椒的原有风味,又有延长保质期和不含森质纤维且使用方便。     

超声波提取花椒皮总黄酮工艺及其抗氧化性研究

以花椒为原料,采用超声波辅助法提取花椒果皮中的总黄酮,在单因素试验基础上设计正交试验研究提取最佳工艺条件。结果表明:花椒果皮总黄酮超声提取的最佳工艺条件为料液比1:30(g/mL)、提取时间50min、乙醇体积分数45%。采用紫外分光光度法测定其总黄酮含量,得率可达到3.56%。花椒皮总黄酮清除DPPH自由基和.OH的IC50分别为0.855μg/mL和132.18μg/mL;同时可以看出花椒皮总黄酮也具有很强的还原能力,且高于BHT。     

基于磁珠法的肉制品DNA快速提取方法研究

本研究建立了一种基于磁珠法的肉类DNA快速提取技术。该技术以十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）为裂解液,70%乙醇为漂洗液,羟基磁性微球为DNA吸附介质,从裂解液浓度、裂解时间、漂洗次数3方面进行优化。研究发现裂解液为2%CTAB、裂解时间10 min,漂洗次数2次时,基因组DNA提取效果最优。本研究建立的磁珠法肉类DNA提取技术可作为基层实验室自建肉类DNA提取方案,用于肉类DNA的快速提取,为肉类食品安全检测提供技术保障。     

超声辅助双水相体系提取花椒果皮总生物碱研究

目的:优化超声辅助双水相体系提取花椒果皮总生物碱工艺。方法:以酸性染料比色法分析,使用超声辅助正丙醇-磷酸氢二钾双水相体系提取花椒果皮总生物碱,以提取时间、超声功率和液固比为因素,以得率为响应值,以Box-Benhnken原理探索最佳工艺。结果:最佳提取工艺为:提取时间46min,超声功率250W,液固比22∶1,此条件下总生物碱得率为18.87mg/g,比回流提取法总生物碱得率高38.75%,纯度高39.64%。结论:优化出一条全新的花椒果皮总生物碱最佳提取工艺过程,为花椒果皮总生物碱的进一步开发奠定了良好的基础。     

快速提取鸭血基因组DNA方法的研究

目的:以鸭血为原料,筛选出高质量、高效率的DNA提取方法。方法:选用4种不同方法提取样品DNA,并建立实时荧光PCR实验,以此鉴别掺假伪劣产品。通过研究DNA质量浓度、提取时间和扩增效果,选取高质量、高效率的提取方法。结果:苯酚/氯仿抽提法提取浓度高、成本低,但步骤烦琐、耗时长,易接触有毒有害试剂;试剂盒法提取DNA纯度较高,但价格昂贵,不适用于大批量样品;核酸提取仪操作简便,但前处理耗时长,适用于大批量产品的检验检测;细胞裂解法操作简单、快速、成本低,因未经后续纯化,所得到的DNA纯度相对较低,但同样满足PCR扩增的检测要求,适用于大批量监督抽查任务。结论:对于大批量的鸭血源性成分检测推荐使用细胞裂解法,但一旦出现阳性样品需要进行复测则需要使用不同的提取方法,以确保实验的准确性。     

奶粉中DNA提取方法的比较

为选择适合奶粉DNA的提取方法,文章以市售奶粉为材料,采用异硫氰胍提取法、滤膜法和磁珠法3种方法提取奶粉DNA。再利用DNA浓度测试、琼脂糖凝胶电泳及PCR扩增3种手段比较DNA提取的效果。结果显示:磁珠法提取的奶粉中DNA质量较好,适合用于提取奶粉DNA,而异硫氰胍法的杂质含量高、重现度低,滤膜法的提取量少。但3种方法提取的基因组DNA均达到PCR实验的要求。     

超临界CO2萃取花椒果皮总黄酮的工艺

以七年生花椒果皮为原料,进行超临界CO2萃取分离花椒总黄酮的工艺研究,采用硝酸铝-亚硝酸钠法对萃取物中的总黄酮含量进行了定量测定,重点考察了萃取温度、萃取压力、萃取时间以及夹带剂用量对总黄酮得率的影响。正交实验结果表明,各种因素对花椒萃取率的影响的程度从高到低依次为:萃取温度>萃取压力>萃取时间>夹带剂用量。超临界CO2流体萃取花椒黄酮的优化条件为:萃取温度为50℃,萃取压力35MPa,萃取时间150min,夹带剂用量4mL/g,此时花椒总黄酮提取率为19.574%。      

花椒油和花椒籽油提取技术研究进展

花椒作为一种传统的药食同源经济作物,在我国具有悠久的栽培和使用历史。近年来,消费者对花椒精深加工产品的需求逐步趋于多样化。为了促进花椒系列产品的开发,对花椒油和花椒籽油的定义、分类和主要提取方法进行了总结。花椒油和花椒籽油分别是以花椒果皮和花椒籽为原料制备的产品,花椒油根据制备方式不同分为花椒调味油、花椒精油和花椒油树脂。花椒籽油的主要制备方式为压榨法和溶剂浸提法。综合创新花椒中脂肪的精深加工技术,拓宽花椒食用、药用等范围,是实现花椒资源增值的有效途径。     

花椒精油亚临界流体萃取工艺优化及GC-MS分析

以甘肃武都大红袍花椒为原料,采用水蒸气蒸馏萃取法（SDE）及亚临界流体萃取法（SFE）提取花椒精油。以花椒精油得率为评价指标,采用单因素试验和正交试验优化SFE萃取工艺,并采用气质联用法（GC-MS）对比分析SDE和SFE花椒精油的香气成分。结果表明,最佳萃取工艺为：萃取3次、萃取温度40℃、萃取时间40 min、料液比1.0∶2.0(g∶mL)。在此优化条件下,SFE花椒精油得率为15.11%,为SDE精油得率的3.7倍。GC-MS分析结果表明,共检测出48种挥发性物质,包括烯烃类20种、酯类8种、醇类8种、醛类3种、芳香烃类2种、呋喃类2种、酮类2种、萜类1种、酸类1种和萘类1种。SDE和SFE分别检出37种、40种挥发性物质,两种提取方法所得精油的组成相似,SFE精油得率较SDE高且留香型持久,是提取花椒精油的有效提取方法。     

中温浸提法制备食用花椒调味油及其成分分析

采用中温浸提法制备食用花椒调味油。应用单因素试验法,以柠檬烯、芳樟醇和感官评分为指标,考察了花椒颗粒度、浸提温度、料液比、浸提时间对花椒调味油品质的影响,并通过正交试验进行了中温制备工艺条件的优化。同时利用气相色谱-质谱(GC-MS)联用仪对中温制备的花椒调味油进行分析鉴定。结果表明:最佳工艺条件为浸提温度95℃、浸提时间40min、料液比1∶8、颗粒度60目,在此条件下柠檬烯的得率为3.046 5mg/g、芳樟醇的得率为2.738 7mg/g;中温制备的花椒调味油其香气成分主要为萜烯类化合物和其衍生物,含量较高的为:α-苧烯、桧烯、月桂烯、柠檬烯、反-罗勒烯、γ-萜品烯、芳樟醇、乙酸芳樟酯等。     

微波辅助提取"转心乌"洋芋皮红色素的研究

采用单因素和正交试验设计,应用微波辅助溶剂浸提法提取转心乌洋芋皮天然红色素,对影响色素收率的微波功率、微波时间、提取料液比等主要因素进行了优化组合试验,以确定最佳提取条件。通过试验比较了色素收率结果表明:在微波功率、微波时间、提取料液比三因素中,微波功率对色素收率影响最大,其次是微波时间,提取料液比的影响较小。单因素和正交试验结果确定的最佳工艺组合为:1%HCl水溶液为提取溶剂,微波功率400W,微波时间15min,提取料液比为1:10(g/mL)。在此试验条件下,平行试验3次,转心乌洋芋皮红色素平均收率可达86.79%,与传统溶剂浸提法相比,红色素收率可提高15.85%,微波辅助溶剂浸提法能高效提取转心乌洋芋皮中天然红色素。     

花椒果皮与种子营养类化学成分分析与资源价值评价

本研究基于中药资源化学的研究理念,以发现及创新花椒资源价值、构建多途径利用产业链为目的,分别采用硫酸-苯酚比色法、液相色谱法、凯氏定氮法、液相色谱-质谱联用法等对花椒果实及种子中可溶性多糖类、单糖及寡糖类、蛋白质及氨基酸类、核苷类等营养类物质进行了分析。结果显示,花椒果皮富含可溶性多糖类（96.33 mg/g）及蛋白质类（92.32 mg/g）营养物质,且其蛋白氨基酸组成比例与人体必需氨基酸较为接近,营养价值较高。花椒种子中糖类、蛋白质及氨基酸类营养物质含量相对较低,但核苷类营养物质含量相对较为丰富（3.94 mg/g）。在此基础上,基于花椒果实营养类物质组成及分布,提出了花椒果实精细化利用策略。本研究阐明了花椒果实中各类型营养成分的分布、组成及含量,为促进我国花椒资源产业的提质增效和健康发展提供了支撑。      

水蒸汽蒸馏、溶剂萃取、同时蒸馏萃取法提取花椒挥发油的效果比较

对水蒸气蒸馏法、溶剂萃取法以及同时蒸馏萃取发提取花椒挥发油的效果进行了比较,并通过气相色谱质谱法对3种方法的提取物种类进行了比较。结果显示水蒸气蒸馏法虽然花椒挥发油提取物种类达到了30种,但对挥发油的提取率只有6.66%;溶剂萃取法使得花椒挥发油的提取率达到了8.37%,但提取物种类只有17种;采用同时蒸馏萃取法提取花椒挥发油时,其提取率达到了11.6%,提取物的种类达到了77种,该方法提取花椒挥发油的效果理想,对于花椒挥发油的成分分析以及定量检测也十分有助。该比较结果将为花椒挥发油的提取以及对挥发油的成分分析和定量检测提供实验依据。