两歧双歧杆菌耐氧耐酸优良菌株的选育

两歧双歧杆菌通过逐渐增加培养基中氧气分压的方法进行多次耐氧驯化,每次耐氧驯化后进行挑选耐氧的两歧双歧杆菌单菌落,然后将经过耐氧驯化的两歧双歧杆菌菌株再通过降低培养基pH值的方法来进行多次耐酸驯化,每次耐酸驯化后进行挑选两歧双歧杆菌单菌落,以确定所获得的两歧双歧杆菌为纯的耐酸菌株.最终得到了1株对氧和酸的耐受能力有较大提高的两歧双歧杆菌菌株,且耐氧耐酸驯化后的菌株没有发生变异.这有利于两歧双歧杆菌产品的开发和保持两歧双岐杆菌制品有较高的活菌量,具有较好的实际应用价值.     

双歧酸牛奶的研制

本文通过对双歧杆菌进行耐氧驯化,选育出耐氧菌株,并且通过正交试验,活菌计数,确定适合工业化生产双歧酸牛奶的工艺及技术参数,该产品在6℃冰箱保存5天后,其双歧杆菌活菌数仍≥10^5efu／ml。     

青春双歧杆菌耐氧驯化及培养条件的响应面法优化

对一株青春双歧杆菌进行耐氧驯化,通过有氧、无氧交替驯化法对出发菌株进行耐氧驯化,得到耐氧能力较强的青春双歧杆菌菌株,在有氧静止培养条件下活菌数可达到4.31×1011cfu/mL。对该耐氧菌株通过响应面法进行培养条件优化,确定培养耐氧青春双歧杆菌的最佳条件:接种量5%,玉米糖化液浓度12.1°Bx,初始pH6.48,培养温度37℃,发酵时间24h。在此条件下菌液最大OD值为1.819,此条件下培养的活菌数为3.05×1012cfu/mL。     

长双歧杆菌多因素连续驯化的研究

双歧杆菌因对外界环境的耐受性较差,限制了其规模化生产和实际应用。通过对长双歧杆菌进行连续的耐氧、耐酸以及耐胆盐的驯化,使长双歧杆菌对氧、酸以及胆盐的耐受性有了一定的提高,活菌数和产酸性能都有所提高。耐氧驯化时,通过逐渐增加培养基中的氧分压的方法进行;耐酸驯化时,通过逐渐降低培养基的初始pH的方法进行;耐胆盐驯化时,通过逐渐增加培养基初始胆盐含量的方法进行。实验结果表明,耐氧耐酸驯化后的菌株活菌数能达到9.4×108 cfu/mL,为初始菌的1.92倍;耐胆盐驯化后的菌株在胆盐浓度为0.3%时培养也能保持一定的活菌数,而初始菌株不能存活。     

耐氧性双歧杆菌的驯化及其培养条件的研究

通过对一株青春双歧杆菌的耐氧驯化,获得了具一定耐氧能力的双歧杆菌ad,该菌株可在含有一定空气容积的密闭容器中良好生长。并探讨了以大豆为主要原料发酵培养青春双歧杆菌ad的工艺条件,其最佳培养基配方为:豆浆浓度3BX,葡萄糖1%,自制乳肽0.5%,番茄汁2.5%,胡萝卜汁2.5%;pH7.0;接种量2%;培养温度37℃;厌氧培养24～48h。发酵液活菌数可达6.9×109cfu/mL。青春双歧杆菌ad发酵液原液直接冷冻干燥,无须添加其他保护剂;双歧杆菌ad冻干前增加温度前处理环节,可提高菌体成活率;双歧杆菌ad含水冻干粉活菌数达1.0×1010cfu/g;绝干样品活菌数达1.1×1010cfu/g。     

双歧杆菌酸奶制造的中间试验

应用筛选获得的双歧杆菌耐氧菌株发酵制造酸牛奶的工艺进行了中间试验。结果表明:采用双歧杆菌耐氧菌株进行有氧奶质发酵制造酸牛奶是完全可行的。适当添加一些生长促进物质,可使发酵剂制备时间减少到8小时以内。采用由双歧杆菌和其它辅助菌混合而成的组合发酵剂制造酸奶,发酵周期可缩短到5小时;此种酸奶在保质期内双歧杆菌活菌数含量能保持在10~7个/g以上。应用此工艺,只需采用普通酸奶的生产设备即可进行双歧杆菌酸奶的制造。     

动物双歧杆菌乳亚种BZ11的耐氧驯化及降胆固醇性能的研究

为了提高动物双歧杆菌乳亚种BZ11对有氧环境的耐受性,采用逐渐增加培养基中的氧分压和有氧、厌氧条件下交替培养两种方案对其进行了耐氧驯化。通过对驯化前后菌株的生长特性进行分析得出逐渐增加培养基中的氧分压的驯化方案取得了更好的效果。经最优方案驯化后的菌株在有氧条件下培养20 h后,活菌数可达到6.30×10~8CFU/m L,是初始菌株的2.24倍。驯化后菌株的降胆固醇率为27.31%±0.80%,与初始菌株相比没有显著性差异(P0.05)。通过鉴定得出,动物双歧杆菌乳亚种BZ11在耐氧驯化前后保持了相似的形态及生理生化特征。因此,驯化后的菌株有望作为1株潜在益生菌被开发利用。     

除氧剂及益生元对双歧杆菌BB01和BB28微胶囊化的影响

以双歧杆菌BB01和BB28为试验菌株,通过单因素试验研究不同浓度的除氧剂及益生元对其微胶囊效果的影响。结果表明:在双歧杆菌BB01微胶囊化的过程中,除氧剂半胱氨酸盐酸盐及异抗坏血酸钠的影响效果更佳,最适加入量分别为0.05%,0.09%,半胱氨酸盐酸盐对应的微胶囊活菌数及包埋率分别为2.2×109 CFU/mL,54%,异抗坏血酸钠对应的分别为2.9×109 CFU/mL,82%。益生元菊糖及低聚果糖对其微胶囊化的过程影响效果更佳,最适加入量分别为3%,5%,菊糖所对应的分别为4.6×109 CFU/mL,80%,低聚果糖所对应的分别为1.7×109 CFU/mL,80%;在双歧杆菌BB28微胶囊化的过程中,除氧剂抗坏血酸钠及异抗坏血酸钠对双歧杆菌的影响效果更佳,最适加入量分别为0.05%,0.03%,抗坏血酸钠所对应的分别为3.9×109 CFU/mL,77%,异抗坏血酸钠所对应的的微胶囊活菌数及包埋率分别为1.7×109 CFU/mL,66%。益生元低聚木糖及低聚果糖对其微胶囊化的包埋效果影响更佳,二者最适加入量均为7%,低聚木糖对应的微胶囊活菌数及包埋率分别为4.9×109 CFU/mL,60%,低聚果糖所对应的微胶囊活菌数及包埋率分别为4.3×109 CFU/mL,80%。     

胡萝卜汁双歧杆菌酸乳发酵培养基优化研究

本文以从健康人体中选育出2株发酵活力高、耐氧性和抗逆性强的优良发酵菌株两歧双歧杆菌Bbm和长双歧杆菌Blm作为试验菌株,研究了胡萝卜汁和蔗糖在牛乳中的添加量对双歧杆菌在牛乳中发酵的凝乳时间、凝乳时活菌数及pH值、产品感官风味的影响,确定了发酵培养基中胡萝卜汁和蔗糖的最适添加量分别为20%～30%和5%～6%,完成了以胡萝卜汁乳作为双歧杆菌最佳载体的初步探索,为功能性益生菌乳制品的研制和开发提供了必要条件.     

母乳来源益生菌的筛选及潜在益生特性研究

益生菌能够维护肠道健康,为宿主提供多种健康益处。为了筛选出具有益生特性的优良菌株,该研究从母乳中分离筛选出22株乳杆菌和3株双歧杆菌。通过耐酸耐胆盐能力测试,筛选出7株菌株,并对其进行抗生素耐药性和致病菌抑制能力的测定。结果显示,除菌株M33外其余菌株都有较好的耐酸能力;鼠李糖乳杆菌M53和M60,副干酪乳杆菌M71,植物乳杆菌M113和3株双歧杆菌耐胆盐能力较好,其中M53和短双歧杆菌grx05耐胆盐能力较高,达到45.72%和75.54%;菌株M71和grx05对8种抗生素敏感,菌株M53,M118和S18对6种抗生素敏感,具有较高的安全性;菌株M53对3株革兰氏阳性菌和2株革兰氏阴性菌有明显的抑制效果,菌株grx05对3株革兰氏阳性菌和1株革兰氏阴性菌有明显的抑制效果。综合分析,鼠李糖乳杆菌M53和短双歧杆菌grx05有希望作为具有益生特性的菌株应用到发酵食品或益生菌制剂开发。     

青春双歧杆菌的耐氧驯化及不同低聚糖对其增殖效果的影响

为改善青春双歧杆菌在发酵产品中活菌数低、菌种功效弱的情况,对厌氧青春双歧杆菌进行耐氧驯化,采用无氧有氧交替驯化法,在驯化过程中逐渐增加青春双歧杆菌培养液的氧分压,测定青春双歧杆菌驯化前后生理特性,并对比大豆低聚糖、低聚木糖、低聚麦芽糖对青春双歧杆菌增殖的影响。结果表明,青春双歧杆菌在耐氧驯化后对氧气的敏感程度下降,有氧条件下生长能力达标,产酸能力得到提升,菌体驯化前后形态基本一致,耐氧青春双歧杆菌代谢产生的乙酸与乳酸比值较厌氧青春双歧杆菌更适宜发酵,在3种低聚糖中,低聚木糖对青春双歧杆菌增殖作用明显,可作为青春双歧杆菌良好的双歧因子。耐氧驯化后的青春双歧杆菌有着优良的生理特性,能够作为潜在的益生菌菌种深入研究其功能并可应用于发酵食品中。     

两歧双歧杆菌耐氧耐酸耐胆盐优良菌株的选育

通过反复驯化的培养方法将两歧双歧杆菌驯化成耐氧耐酸耐胆盐的优良菌株。实验结果表明，在牛乳培养基中耐氧驯化后的双歧杆菌的增殖比例为41000％，而原始菌的增殖比例仅为8233％，且前者的凝乳时间为后者的2／3；经过耐酸驯化的菌株在低pH值条件下的产酸性能也大为提高，且耐酸性明显优于未经驯化的菌株；胆盐驯化的菌株经胆盐浓度为0．5％的培养后也有较高的活菌数，其对胆盐的忍耐力明显增强。     

双歧杆菌的分离鉴定与耐氧驯化

本研究从鸡盲肠内容物中分离出单菌落,经菌落菌体形态观察和生理生化鉴定为双歧杆菌.采用逐级增加氧气含量的方法对筛选出的双歧杆菌进行耐氧驯化,以改善双歧杆菌时氧气的耐受力,经过多次驯化,优选出对氧气有一定耐受力、凝乳能力较好,且在贮藏过程中活菌数能够达到保健功能要求的菌株B05.经二次鉴定该菌株保持了双歧杆菌的形态和生理特征.     

采用微型包囊技术研制活性双歧联菌微囊微生态制剂

针对双歧杆菌活菌制剂在口服时,不耐受强胃酸,活性菌在有氧条件下容易失活,常温下保存期短等存在问题,将微型包囊技术应用于微生态制剂中,并已研制成活性双歧联菌株耐酸肠溶微囊微生态制剂, 获得较理想的效果.本文介绍了双歧联菌株混合培养工艺条件的优化研究, 活性双歧杆菌冻干保护剂和冻干条件的确定, 微型包囊复合囊材配方的优化研究, 最佳微型包囊方法的确定及微囊化条件的研究, 含活性菌微囊的耐酸肠溶试验, 含活性菌微囊的保存稳定性试验, 50升发酵罐中试结果,以及活性双歧联菌株微囊微生态制剂的研制等.     

采用微型包囊技术研制活性双歧联菌微囊微生态制剂

针对双歧杆菌活菌制剂在口服时，不耐受强胃酸，活性菌在有氧条件下容易失活，常温下保存期短等存在问题，将微型包囊技术应用于微生态制剂中，并已研制成活性双歧联菌株耐酸肠溶微囊微生态制剂，获得较理想的效果。本文介绍了双歧联菌株混合培养工艺条件的优化研究，活性双歧杆菌冻干保护剂和冻干条件的确定，微型包囊复合囊材配方的优化研究，最佳微型包囊方法的确定及微囊化条件的研究，含活性菌微囊的耐酸肠溶试验，含活性菌微囊的保存稳定性试验，50升发酵罐中试结果，以及活性双歧联菌株微囊微生态制剂的研制等。     

鼠李糖乳杆菌耐酸及胆盐能力研究

本实验对来源于婴儿粪便鼠李糖乳杆菌进行耐酸、耐胆盐能力表征及模拟胃液和模拟肠液实验。结果获得鼠李糖乳杆菌菌株B在pH1.8条件下,维持2h,活菌数达到107CFU/ml以上;在pH值为2.2以上的培养基中生长良好,而且随着时间的延长菌株的数量增加。在胆盐浓度在0.5%以下的MRS-broth培养基中鼠李糖乳杆菌B菌株维持4h,活菌数均达到108CFU/ml以上,而且随着时间的延长活菌数均有所增加。模拟胃液和模拟肠液实验结果表明该菌株能够有效通过胃环境,并能在肠道中繁殖。结果可见,鼠李糖乳杆菌B具有较强的酸的胆盐的耐受能力,符合微生态制剂和乳酸菌发酵功能食品菌种的要求。     

海藻糖在微生态制剂中的应用

主要介绍了海藻糖对微生态制剂的冻干保护作用及机理,以及在双歧杆菌、乳杆菌等活菌制剂中的技术应用,并对其研究和发展趋势进行了探讨。     

双歧杆菌纯种发酵胡萝卜汁牛乳工艺研究

以健康人体中选育出的发酵活力高、耐氧性和抗逆性强的优良发酵菌株--长双歧杆菌(Blm)为试验菌株,研究了接种量、基质起始pH值、发酵温度、氧等因素对Blm在胡萝卜汁牛乳中发酵的凝乳时间、活菌含量、pH值和感官质量的影响;利用正交试验优化并确定了Blm发酵的最佳工艺条件在胡萝卜汁牛乳培养基(添加250 mL/L胡萝卜汁和50 g/L蔗糖的牛乳培养基)中,接种量5×107 cfu/mL,基质起始pH值7.0,发酵温度39℃,有氧发酵.产品凝乳时间在5 h内,双歧杆菌活菌数在1×109 cfu/mL以上,pH值5.0.制备的胡萝卜汁双歧杆菌酸乳呈橙黄色,组织状态致密,无乳清析出,且综合了双歧杆菌、胡萝卜、牛乳的功能特性,集风味、营养、保健功能于一体.     

双歧杆菌发酵胡萝卜汁酸乳贮藏稳定性研究

从健康人体中选育出2株发酵活力高、耐氧性和抗逆性强的双歧杆菌优良发酵菌株两歧双歧杆菌Bbm和长双歧杆菌Blm作为试验菌株,制备了双歧杆菌纯种及双歧杆菌与乳酸菌混种发酵胡萝卜汁酸乳,考察了发酵产品在室温(20~30℃)和冷藏(0~4℃)条件下的贮藏稳定性。试验结果表明:0~4℃冷藏21d,活菌含量仍可达1×109cfu/mL以上,pH值降至4.2~4.3,酸甜适宜。因此,确定发酵产品0~4℃下贮藏期为21d。     

三株乳酸杆菌益生及免疫特性研究

试验以副干酪乳杆菌KLDS1.0351、植物乳杆菌KLDS1.0985及KLDS1.0986为对象,探究其耐人工胃液、肠液、耐胆盐能力及三株菌株对脾淋巴细胞增殖的影响。结果表明,三株菌株耐人工胃液、耐人工肠液和耐胆盐能力良好,副干酪乳杆菌KLDS1.0351强于植物乳杆菌KLDS1.0985和KLDS1.0986。乳酸杆菌对脾淋巴细胞活性的影响随活菌数量的增加而增大。活菌数为107 CFU/m L时,对脾淋巴细胞活性的影响为KLDS1.0986KLDS1.0351KLDS1.0985;KLDS1.0351对脾淋巴细胞的增殖具有较好的促进作用,而KLDS1.0985和KLDS1.0986两株菌株只有活菌数达到107 CFU/m L时才有促进作用。