枯草芽孢杆菌菌株B_3抗菌肽的分离纯化与鉴定

针对1株分离自甘肃河西盐碱土壤的具有产抗菌肽潜质的枯草芽孢杆菌B_3菌株(Bacillus subtilis B_3),拟构建一种有效的抗菌肽分离纯化方法,旨在为获得该抗菌肽纯品及其结构信息,并为抗菌肽制备及其制品检测提供方法参考。采用由阳离子交换层析、疏水层析和尺寸排阻层析单元组成的串联柱层析系统对B_3菌株液态发酵产物进行初步分离,对不同时段的收集液做抑菌实验,比较评价分步层析效果;再通过反相HPLC进一步分离纯化后用质谱分析检测,以获得具有抑菌活性多肽的分子质量及结构信息。经串联层析法分离的具有抑菌活物质是一种小分子富脯氨酸抗菌肽,其氨基酸序列Pro-Tyr-Ile-Pro-Gln-Pro-Arg-Pro-Pro-His-Pro-Arg-Leu,分子质量为1 567.86 Da,等电点为10.84。经美国国立生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)数据库比对,发现其为一种未报道的多肽。经抑菌活性检测表明,该抗菌肽对大肠杆菌(Escherichia coli)和沙门氏杆菌(Salmonella enterica subsp.enterica)均有抑菌作用,其最小抑菌质量浓度均为0.020 312μg/mL。同时,该抗菌肽表现出较强的耐热性、耐酸碱性和光照稳定性,是一种对供试靶标菌具有抑菌活性的新抗菌肽。     

产抗菌肽乳源乳酸菌的筛选及定向培养

为了获得乳酸菌高效表达抗菌肽的代谢调控方法,对德氏乳杆菌保加利亚亚种等7种乳酸菌进行了产抗菌肽能力的筛选和定向培养。筛选出具有较高抑菌活性的菌株嗜酸乳杆菌和干酪乳杆菌,它们产生的抑菌物质经排除酸、过氧化氢后,仍具有抑菌活性,然而经蛋白酶处理后其抑菌活性明显下降。结果表明,两种菌发酵上清液对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有抑制作用。经一系列定向培养嗜酸乳杆菌抑菌直径达到(23.53±0.06)mm,与未经定向培养的抑菌直径(11.63±0.15)mm相比抑菌活性提高了102%;经定向培养的干酪乳杆菌抑菌直径达到(21.27±0.25)mm,与未经定向培养的抑菌直径(12.50±0.10)mm相比抑菌活性提高了70.2%。     

戊糖乳杆菌素C50-6的纯化及特性研究

对分离自四川传统肉制品的戊糖乳杆菌C50-6产生的戊糖乳杆菌素进行了纯化,研究其理化性质和生物学活性,结果表明:发酵液经(NH4)2SO4盐析和Toyopearl SP-650M阳离子交换层析纯化后,细菌素的回收率为21.76%,纯化倍数为39.15倍;经Tricine-SDS-PAGE和电泳条带抑菌试验测得该乳杆菌素分子质量约2 500u;该细菌素对酸和热稳定,对木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和蛋白酶K敏感;对供试的革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和少数真菌具有较强抑制作用,对多数乳酸菌无抑制作用。     

核桃谷蛋白抗菌肽的分离纯化及抑菌稳定性分析

目的：以核桃粕谷蛋白为原料生产抗菌肽,研发一种新型抗生素的替代品。方法：通过菌酶协同固态发酵法（枯草芽孢杆菌和碱性蛋白酶协同）从核桃粕谷蛋白中制备抗菌肽,通过超滤、凝胶层析过滤、液相色谱-串联质谱（liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）和分子对接对核桃粕谷蛋白抗菌肽（walnut glutelin antimicrobialpeptide,WGP）进行分离、纯化和筛选。以对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌性保持率为指标,研究抗菌肽的抑菌稳定性。结果：经超滤、凝胶层析分离后,WGP-ⅢA和WGP-ⅢC组分均具有较强抗菌活性;LC-MS/MS结合虚拟筛选,从2种组分中共鉴定得到6条多肽,分子对接筛选得到3个肽段,分别为WGP-ⅢA组分的LAEAYNIPDTIARRL和WGP-ⅢC组分的SHSVIYVIR、APQLLYIVK;分子对接结果显示,WGP-ⅢC组分的抑菌活性更强;抑菌稳定性分析表明,核桃谷蛋白抗菌肽在高温热处理、紫外线、不同pH值下和不同蛋白酶处理后均表现出较好的稳定性。结论：核桃粕谷蛋白抗菌肽在食品抑菌防腐...     

西藏干酪源植物乳杆菌产细菌素的分离纯化及特性研究

从西藏干酪中分离筛选出1株能够产生抑菌活性物质的乳酸菌,该菌的发酵上清液在排除有机酸、过氧化氢的影响后仍有显著抑菌活性,然而,用胃蛋白酶、蛋白酶K和胰蛋白酶处理后抑菌活性丧失,说明该菌的代谢产物中起抑菌作用的物质具有蛋白质性质,初步确定是一种细菌素。结合形态学观察、生理生化分析及16S rDNA鉴定结果,确定该菌为植物乳杆菌,命名为ZFM804。细菌素经大孔树脂(XAD-16)层析、强阳离子交换层析、RP-HPLC三步法初步纯化。经SDS-PAGE分析该细菌素分子质量约为15 ku。理化性质分析表明该细菌素具有良好的酸碱稳定性:在pH 3~11范围内都具有抑菌活性;良好的热稳定性:100 ℃处理30 min仍有明显抑菌活性,同时可被人体内蛋白酶降解。抑菌谱测定结果表明,ZFM804植物乳杆菌素对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有抑制作用,是一种广谱细菌素。     

大头金蝇幼虫抗菌肽提取纯化及抑菌活性研究

目的:从大头金蝇幼虫中分离纯化天然抗菌肽,并检测抗菌肽的抑菌活性。方法:提取大头金蝇幼虫抗菌肽,粗提物经凝胶过滤色谱、阳离子交换树脂、反相色谱纯化,纯化产物检测其抑菌活性并利用GFC-HPLC测定其分子量。结果:最终纯化出一个活性组分,该组分对铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度为20.40μg/m L,对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为2.04 mg/m L,对大肠杆菌的最小抑菌浓度为0.17 mg/m L;该活性组分分子量大小为2570 u。结论:该抗菌肽组分对铜绿假单胞菌有较强抑菌活性,有较好的开发利用价值。     

黄酒米浆水中抗菌乳酸菌的筛选及特性分析

为了筛选黄酒米浆水中具有抗菌特性的乳酸菌,通过初筛和复筛实验分离、纯化了具有抗菌特性的乳酸菌,通过形态学观察、生理生化反应对菌株进行分类,通过有机酸干扰排除试验对所产抑菌物质进行初步分析。结果表明,从黄酒米浆水中筛选出36株对蜡样芽孢杆菌和大肠杆菌具有抑菌作用的乳杆菌,根据生理生化特征初步判断为植物乳杆菌、微小乳杆菌、鸟乳杆菌不解棉籽糖亚种乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、马乳酒样乳杆菌、卷曲乳杆菌、嗜酸乳杆菌等。这些乳酸菌产生的抑菌物质非乳酸菌发酵产生的乳酸、乙酸和盐酸。本研究结果为黄酒米浆水中抑菌物质的开发及研究提供了基础。     

鸭肠道内产蛋白酶乳杆菌的分离筛选

分离筛选鸭肠道内产蛋白酶乳杆菌。利用脱脂乳培养基,从鸭消化道中分离筛选出两株产蛋白酶的乳酸菌,对菌体形态、染色反应、培养性状、生理生化性状进行系统研究,结合16S rRNA 序列分析鉴定出筛选的乳酸菌为干酪乳杆菌鼠李糖亚种和干酪乳杆菌干酪亚种。     

传统浆水中乳酸菌的筛选及抑菌性能分析

以甘肃传统发酵浆水为材料,采用平板划线法分离纯化其中的乳酸菌,并对纯化后的菌株进行形态学观察及生物学特性分析,筛选出其中具有抑菌活性的菌株,分别研究它们的抑菌能力以及抑菌物质的成分。结果表明:6株乳酸杆菌中,菌株SJ-1、SJ-2的发酵代谢产物对指示菌具有较高的抑菌活性。排除酸抑制作用和过氧化氢抑制作用后代谢产物仍具抑菌活性,且显示出良好的热稳定性。使用不同的蛋白酶对代谢产物进行处理后,其抑菌能力产生了程度不等的降低,表明抑菌物质具蛋白酶敏感性,因此判断抑菌物质中含有蛋白类抑菌成分。经鉴定发现菌株SJ-1为发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum),SJ-2为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。     

含抗菌肽基因的天然质粒在枯草杆菌中的表达

侧孢短芽孢杆菌抗菌肽具有高效、广谱、稳定的抗菌活性,该抗菌活性与其内源质粒密切相关。为研究侧孢短芽孢杆菌含抗菌肽基因质粒异源表达的可行性,本研究中将侧孢短芽孢杆菌S62~-9的天然质粒电转枯草芽孢杆菌Wb800受体细胞,筛选阳性转化子并对其表达产物性质进行研究。得到了产生抗菌活性产物菌株Z4,发酵6 h后开始产生抗菌物质,12~20 h产量达到最大,达620.96 AU/m L。Tricine~-十二烷基硫酸钠~-聚丙烯酰胺凝胶电泳看到S62~-9质粒在枯草芽孢杆菌中得到了成功的表达,反相高效液相色谱分析Z4表达产物含有与侧孢短芽孢杆菌抗菌肽相同物质。该物质抑菌谱广,稳定性好:对于G~+、G~-和真菌均有抑菌活性,而且对于G~+菌株的抑菌效果优于G~-菌株和真菌,121℃处理20 min后的效价保留率约为90%,100℃处理60 min后仍有81%的活性保留;p H 2~12的范围内效价保留率基本不发生变化;对蛋白酶较为敏感,胰蛋白酶和蛋白酶K处理后抗菌肽的效价保留率为60%左右,其他3种蛋白酶处理后也有一定程度的降低。本研究获得了抗菌肽的异源表达菌株Z4,为进一步工业生产抗菌肽提供支持,而且为该抗菌肽遗传基因定位于质粒上提供了证明。     

肽类抑菌物质效价的测定

采用琼脂扩散法以Nisin为标准样品,对副干酪乳杆菌(LactobacillusparacaseiHD1.7)产生的肽类抑菌物质效价测定条件进行了研究,结果表明在2号检测培养基中添加0.75%琼脂、以浓度为106cfu/mL枯草芽孢杆菌为指示菌是最佳检测效价的条件,在此条件下测得的肽类抑菌物质的效价为1.6×104IU/g。     

抗菌肽的生物活性及其作用机理

抗菌肽是生物体产生的一种具有抗菌活性的多肽,具有多种生物学活性,如抗微生物活性、细胞毒性、调理素作用等。本文综述了抗菌肽的抗菌、抗病毒、抗真菌和抗癌等生物活性及其作用机理,抗菌肽在天然免疫中的作用和应用前景。     

抗菌肽的生物活性、作用机制及应用研究进展

抗菌肽是具有抗菌活性的一类短肽,广泛存在于生物界,是先天免疫的重要防御物质,具有广谱抗菌活性和抗病毒、抗真菌、抗寄生虫及抗肿瘤等生物活性,且不易产生抗药性,有良好的应用前景。该文对抗菌肽的生物活性、作用机理及应用现状进行了综述,并指出在开发研究抗菌肽中存在的问题,对其发展作了展望。     

Ribosomally synthesized antimicrobial peptides in prokaryotic and eukaryotic organisms

Ribosomally synthesized antimicrobial peptides are found both in prokaryotes and eukaryotes. They possess a low molecular weight and are characterized by compact structures, thermal stability and potent antimicrobial activity. Their typical amphipathic character is responsible for their detergent‐like mode of action. Since these peptides are directly gene‐encoded, it is possible to modify their structure by mutagenesis to produce structure analogues with an expanded spectrum of antimicrobial activity. Furthermore, the production of these peptides in heterologous expression systems could enable yield improvement to make them accessible for industrial application and to reduce the processing costs by using optimized isolation procedures. They might be useful as effective natural food preservatives because of their chemical and physical properties.     

鱼类体表粘液抗菌肽的研究进展

鱼类体表粘液中的抗菌肽是对细菌起直接抑制作用的一类重要物质,是鱼体天然免疫的重要组成部分,它具有抗细菌、真菌、病毒和肿瘤作用,且不易产生抗药性,具有广阔的应用前景。本文综述了鱼类体表粘液抗菌肽的抑菌活性、分离纯化、基因工程、作用机理及其在食品方面的应用前景。