青蒿素对脑胶质瘤U251细胞的辐射增敏作用

为探讨青蒿素(Artemisinin)对脑胶质瘤细胞辐射敏感性的影响及其机制,采用甲基四唑蓝(MTT)法检测青蒿素对胶质瘤U251细胞增殖的抑制作用;Hoechst 33258荧光染色观察凋亡小体;单丹磺酞尸胺(MDC)染色和Western blotting检测U251细胞的自噬活性的改变;用克隆形成实验测定自噬抑制剂3-MA对U251细胞的增殖抑制作用。结果显示:青蒿素对U251细胞增殖有抑制作用;青蒿素和X射线联合处理组细胞凋亡增加,并出现大量自噬泡且LC3-Ⅱ表达量值增大(p<0.01);3-MA、青蒿素和X射线三联处理组细胞克隆形成率较联合处理组显著降低(p<0.01)。研究表明,青蒿素可能主要通过诱导细胞凋亡来增强U251细胞对X射线的辐射敏感性,同时青青蒿素也能增强辐射诱导U251细胞的自噬活性,但自噬机制在此过程中可能起到细胞保护作用。     

自噬活性调节胶质瘤起始细胞辐射敏感性的体内实验研究

为探讨自噬调节对胶质瘤起始细胞移植瘤辐射敏感性的影响,建立裸小鼠皮下移植瘤模型,测量肿瘤体积大小,比较抑瘤率检测雷帕霉素对移植瘤的辐射增敏作用;建立裸小鼠颅内移植瘤模型,观察裸小鼠生存期,HE染色观察移植瘤的生长。取两种模型中各组肿瘤组织做Western blot,分析自噬相关蛋白LC3表达。结果显示,裸小鼠皮下移植瘤模型中,联合治疗组的肿瘤体积明显小于阴性对照组和单纯辐照组(P>0.05),抑瘤率明显增加(P>0.05);在裸小鼠颅内原位移植瘤模型中,联合治疗组的裸小鼠生存期较阴性对照组和单纯辐照组明显延长,HE染色中可见联合治疗组肿瘤生长局限,与周围正常脑组织界限清楚。Western blot结果显示,两种模型中,联合治疗组中的比值LC3II/LC3I显著增加。研究表明,自噬激动剂雷帕霉素通过激活胶质瘤起始细胞的自噬活性,增加胶质瘤的辐射敏感性。     

槲皮素促进电离辐射引起的衰老细胞发生凋亡

研究槲皮素对10 Gy的X射线及碳离子束辐照后衰老的人眼基底脉络膜黑色素瘤细胞系92-1凋亡发生及相关蛋白表达水平的影响。采用流式细胞术及衰老相关半乳糖苷酶检测试剂盒检测92-1细胞经10 Gy的X射线及碳离子束辐照后细胞凋亡及衰老情况。通过Cell counting kit-8(CCK8)法检测槲皮素对92-1细胞增殖活力的影响并结合细胞凋亡检测筛选槲皮素作用浓度。采用Annexin V-FITC/PI双染法检测不同处理后92-1细胞的凋亡比例。采用蛋白免疫印迹法检测细胞凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3的表达水平。结果表明,92-1细胞经10 Gy的X射线或碳离子束辐照后3 d,细胞出现明显的衰老表型,凋亡发生率较低。CCK8法结合细胞凋亡筛选出50μmol/L作为后续处理浓度。辐照后立即或3 d后给予槲皮素处理能诱导细胞发生明显的凋亡,且Cleaved caspase-3表达水平显著上调。因此,槲皮素可促使辐照(10 Gy)后衰老的92-1细胞发生凋亡。     

DNA-PKcs基因组不稳定性和辐射超敏感性

本研究旨在揭示DNA-PKcs(DNA损伤修复的关键酶之一)与基因组不稳定性、辐射超敏感性的关系。以人神经胶质瘤细胞系M059K(DNA-PKcs野生型)和M059J(DNA-PKcs缺陷型)为实验模型,用常规克隆形成法测定细胞存活率、cytochalasin-B(细胞松弛素B)阻断-微核法跟踪克隆形成过程中基因组不稳定性变化。实验结果表明,存在辐射超敏感性的DNA-PKcs野生型细胞M059K在0.2Gy辐照后随着培养时间的延长基因组不稳定性与0.6Gy辐照水平一致;不存在辐射超敏感性的DNA-PKcs缺失型细胞M059J经0.6Gy辐照后,基因组不稳定性水平明显高于0.2Gy辐照。这些结果提示,DNA-PKcs可能是导致辐射超敏感性的关键因素之一。     

U251细胞受X射线照射后的自噬现象

为探讨自噬在X射线对U251细胞增殖抑制的作用及机制,用X射线处理人胶质瘤细胞系U251细胞,采用WST-1法测定X射线对U251细胞增殖的抑制作用,MDC荧光染色和LC3免疫组化观察辐照后自噬的发生;WST-1法检测3-MA对辐照诱导的U251细胞毒性的影响。WST-1法显示,X射线对U251细胞生长有显著的抑制作用,且此作用呈明显的时间、剂量依赖性;MDC荧光染色和LC3免疫组化。结果表明,X射线可诱导U251细胞发生自噬;X射线照射前阻断自噬使细胞毒性增强。X射线照射能明显抑制U251细胞的生长,并诱导其发生自噬,但自噬对U251细胞可能起到一定的保护作用。     

人成纤维细胞株辐射诱导凋亡与辐射敏感性相关性研究

为探讨不同放射敏感性人成纤维细胞株经辐射诱导后的凋亡情况,应用Ｔｕｎｅｌ法及流式细胞术（ＦＣＭ）检测细胞凋亡,以＾６０Ｃｏγ射线处理细胞。结果表明（１）＾６０Ｃｏγ射线照射后,集落形成实验表明,６号细胞株辐射敏感性高于８号细胞株。（２）Ｔｕｎｅｌ法和流式细胞术检测结果表明,凋亡率与辐射敏感性成正比,同样反映出６号细胞株辐射敏感性高于８号细胞株。（３）检测还发现,凋亡率与辐射剂量和辐射后时间成正比。     

曲古菌素A增强食管癌细胞系EC9706对X射线的辐射敏感性

利用流式细胞仪及荧光定量PCR技术,分别检测细胞凋亡率和DNA损伤修复相关基因mRNA表达变化,以探讨曲古菌素A（Trichostatin A,TSA）能否在体外增强食管癌细胞对X射线的敏感性。结果显示,辐射前TSA的处理显著提高了X射线引起的细胞凋亡率（P〈0．05）;X射线的单独处理显著上调了基因ATM、XRCC2和Lig4（8Gy除外）的mRNA水平（P〈0．05）,TSA单独和TSA联合X射线都下调了ATM、XRCC2和Lig4的mRNA水平。提示TSA很可能通过下调ATM、Lig4和XRCC2mRNA水平使食管癌细胞对X射线敏感。     

电离辐射促进神经胶质瘤细胞初级纤毛发生

研究电离辐射对人类神经胶质瘤细胞初级纤毛发生及初级纤毛对细胞辐射敏感性的影响.对两种神经胶质瘤细胞系(M059K和M059J)进行不同剂量的X射线或碳离子束照射,通过免疫荧光法检测电离辐射后细胞初级纤毛的发生率和长度的变化,通过细胞克隆存活实验检测siRNA(siIFT88)干扰IFT88基因抑制初级纤毛发生对细胞辐射...     

酸性鞘磷脂酶活化在微波辐照致神经细胞凋亡中的作用研究

为阐明微波辐照致神经细胞酸性鞘磷脂酶（Acid Sphingomyelinase，ASM）活化的规律，揭示ASM活化在微波辐照致神经细胞凋亡中的作用，以原代培养神经元细胞，采用30W／era2微波辐照10min，采用Hoechst33342荧光染色观察细胞凋亡，以ASM活性测定试剂盒测定ASM活性，RT-PCR、western blot分别检测ASM基因和蛋白表达的变化。用ASM活性抑制剂米帕明预处理，观察微波辐照后神经细胞凋亡情况。研究发现，微波辐照引起海马神经元细胞发生凋亡，神经元ASMmRNA和蛋白表达上调，ASM酶活性增高，给予ASM活性抑制剂米帕明预处理后，可部分拮抗微波辐照引起的神经细胞凋亡率增加。结果提示，微波辐照引起神经细胞ASM活化及表达上升，ASM活化在微波辐照所致的神经细胞凋亡中起重要作用。     

不同LET辐射对HepG2肝癌细胞的辐射敏感性与周期阻滞的影响

本工作研究不同LET射线辐照对HepG2肝癌细胞辐射敏感性、周期进程和凋亡的影响,为重离子治疗癌症的临床应用积累基础数据.以0、0.5、1、2、4、8Gy剂量的12C6 离子及X射线分别照射处于指数生长期的HepG2细胞,用克隆形成率测定细胞辐射敏感性,通过流式细胞术测定细胞DNA含量以确定各时相细胞的比例及细胞凋亡情况.实验结果显示,12C6 离子辐照所致的HepG2细胞存活率明显低于X射线.随着吸收剂量的增加和修复时间的延长,12C6 离子能导致更显著的细胞S期阻滞、G2/M期阻滞延迟和细胞凋亡.说明与X射线相比,12C6 离子辐照能更有效地杀伤HepG2肝癌细胞并诱导其凋亡.     

硫酸镁对大鼠神经干细胞辐射所致凋亡的影响

探讨硫酸镁对大鼠神经干细胞辐射损伤的保护作用。取新生大鼠神经干细胞进行培养,用免疫荧光法进行神经干细胞的鉴定后用含有不同浓度硫酸镁的培养基培养神经干细胞,选择出硫酸镁的合适浓度为0．00125g／mL。将神经干细胞分为空白对照组、实验对照组（照射）和实验组（照射＋硫酸镁）。分别用2和4Gy ^10Coγ射线对实验对照组和实验组进行照射,分别于照射后24、48和72h用流式细胞仪对各组神经干细胞凋亡率进行检测,同时采用透射电镜对神经干细胞凋亡形态进行观察。与空白对照组比较,实验对照组各时间点神经干细胞的凋亡率明显升高,（t（2Gy,72h）=30．60,t（4Gy,72h1=31．85,p〈0．05）,细胞呈现出明显的凋亡形态,并可见凋亡小体。与实验对照组比较,实验组各时间点神经干细胞的凋亡率明显降低,（t（Gy,72h）=9．08,t（4Gy,72h1p〈0．05）,且细胞形态损伤明显减轻。硫酸镁能降低电离辐射对神经干细胞的凋亡率,减轻电离辐射所致神经干细胞核损伤的形态。     

电离辐射联合顺铂对人肺癌细胞中BTG3基因表达的影响

加速器产生的6-MV X-射线一次性照射体外培养的人肺腺癌细胞株A549和SPCA-1,细胞的吸收剂量分别设置为0、1、3、5和8 Gy,细胞照射后24 h及单次接受5 Gy照射后6、12和24 h后取样;X-射线联合顺铂对BTG3表达的影响研究设立单纯照射组(5 Gy)、顺铂处理组(20μmol·L-1顺铂)和联合处理组(5 Gy+20μmol·L-1顺铂),上述实验均以未给予任何处理的细胞为对照组;采用Western blot及RT-PCR法检测受到不同剂量电离辐射及照射后不同时间肿瘤细胞中BTG3表达水平。Western blot与PCR检测结果均显示,A549和SPCA-1细胞在受到不同剂量的X-射线照射后24 h,其BTG3蛋白及mRNA表达量均明显增加,并随电离辐射剂量的增加而增加,与对照组比较有统计学差异(t=5.25-15.75,p0.05);照射后不同时间检测结果显示,细胞在X-射线照射4 h后BTG3蛋白及mRNA的表达量即开始上升,并持续到照射后24 h,与照射前相比有统计学差异(t=7.52-11.18,p0.05);联合处理组BTG3的表达量均明显高于单纯照射组、顺铂处理组和对照组(t=7.02-15.86,p0.05)。电离辐射联合顺铂可以上调肺癌细胞株中BTG3的表达,BTG3基因有可能作为肺癌放化疗的靶基因。     

2450MHz微波与γ射线联合辐射对大鼠神经胶质细胞的影响

探讨微波及微波联合γ射线照射对大鼠神经胶质细胞凋亡率、线粒体膜电位(MMP)、胞内游离Ca2+和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性的影响。将原代神经胶质细胞分为对照组(C)、微波组(M)、电离组(I)和联合组(IM)。M和IM组接受4mW/cm2的微波辐射3d,2h/d;第4天,I和IM组接受5Gy1Gy/min)的γ射线照射。采用Ca2+-Mg2+-ATP酶测试盒检测胞内Ca2+-Mg2+-ATP酶;流式细胞术检测细胞凋亡和MMP;流式细胞术和共聚焦激光扫描显微镜检测胞内游离Ca2+变化。结果发现,与C组相比,I和IM组细胞的凋亡率显著升高,各组细胞MMP未见明显变化;M、I和IM组胞内游离Ca2+明显升高,Ca2+-Mg2+-ATP酶活性显著降低,差异均有统计学意义(p0.05)。结果提示,在本试验条件下,2450MHz微波可使胞内Ca2+显著上升,Ca2+-Mg2+-ATP酶活性显著降低;未观察到微波与γ射线照射大鼠神经胶质细胞的联合作用。     

水溶性低分子量壳聚糖辐射保护作用的研究

为研究水溶性低分子量壳聚糖(β-1,4-2-氨基-2-脱氧-D-葡聚糖;Chitosan,CTS)的辐射保护作用,通过强碱洗脱法和乙酸-H2O2氧化降解法制备水溶性低分子量壳聚糖,采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法和流式细胞分析法分别检测低分子量壳聚糖对60Coγ射线照射后大鼠正常肝细胞(BRL)的存活率、细胞凋亡和细胞周期的影响,评价水溶性低分子量壳聚糖的辐射保护作用。结果表明,成功地制备了水溶性低分子量壳聚糖,壳聚糖的脱乙酰度由原来的79.3%提高到94.1%,乙酸-H2O2法降解120min,壳聚糖的分子量由原来的8.50×105下降到3.26×103。低分子量壳聚糖(LMWC)对4Gy60Coγ射线照射后的BRL细胞具有良好的辐射保护作用,表现为照后细胞存活率明显升高,SubG1峰显著降低。50μg/mL的CTS使4Gy60Coγ照射后48hBRL细胞的存活率由66.5%±0.19%提高到了87.5%±0.16%(p0.05);照后24h的SubG1峰由51.9%±2.1%降至16.9%±1.3%(p0.05)。表明制备的水溶性低分子量壳聚糖对BRL细胞有较好的辐射保护作用。     

硫酸镁对人脐静脉血管内皮细胞辐射防护的作用

将对数生长期的人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)分为对照组、照射组和实验组,照射组和实验组均接受γ-射线辐照,实验组于照射前0.5 h加入硫酸镁。采用CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡率,硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)水平。结果显示,6.25mg·mL-1以下浓度的硫酸镁对HUVEC细胞存活率无明显影响;6.25 mg·mL-1的硫酸镁可提高照射后HUVEC细胞的存活率,改善γ-射线诱导的HUVEC细胞G2/M期阻滞,降低HUVEC细胞凋亡率。提示硫酸镁对HUVEC细胞辐射损伤具有一定的防护作用。     

超氧化物歧化酶与阿米福汀对小鼠急性放射损伤预防作用的比较

本研究建立了小鼠全身放疗的损伤模型,以比较预给药超氧化物歧化酶(SOD)和阿米福汀对小鼠放射治疗损伤的防护效果。C57BL/6小鼠用6 Gy X射线进行全身一次性照射,在放射后24 h处死,测定小鼠外周血红、白细胞数量,胸腺指数和脾脏指数,以及肝脏抗氧化活力。结果表明:与放疗对照组相比,放疗前给药SOD组对放疗鼠的外周血白细胞数量和胸腺指数有显著的保护作用,使之分别增加66.7%和19.1%。测得放疗前给药阿米福汀对放射鼠的外周血白细胞数量和脾脏指数有显著的保护作用,使之分别增加106.9%和22.6%。此外,与放疗对照组相比,放疗前给药SOD对放疗鼠的肝脏抗氧化能力也有显著提高,可使肝脏的MDA水平下降12.7%,SOD活力增加10.8%,T-AOC活力增加45.0%,放疗前给药阿米福汀可使放疗鼠肝脏的MDA水平下降22.3%。     

MG132联合X射线对非小细胞肺癌生长转移和凋亡的影响

探讨蛋白酶体抑制剂MG132联合X射线对非小细胞肺癌H1299细胞生长、转移侵袭和细胞凋亡的影响及机制。采用MTT法检测不同MG132浓度不同时间处理后肺癌H1299细胞的增殖;Transwell小室实验测定肺癌细胞的迁移和侵袭能力;流式细胞术测定肺癌细胞的凋亡;Western—blot法测定蛋白表达水平。结果表明,MG132能明显抑制H1299细胞的生长,并呈现剂量-效应和处理时间-效应关系;MG132在无毒性剂量下联合X射线可显著抑制H1299细胞的迁移及侵袭能力,并明显诱导细胞凋亡;MG132能明显降低H1299细胞的基质金属蛋白酶-2、-9的表达水平,降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平,同时增加凋亡蛋白Bax的表达水平。提示MG132可以显著抑制人非小细胞肺癌H1299细胞的生长,且在无毒性剂量下联合X射线可以明显降低癌细胞转移和侵袭能力,能显著加强X射线诱导的细胞凋亡作用。     

线粒体DNA减少在氡及其子体致人支气管上皮细胞凋亡中的作用

使用溴化乙锭(Ethidium bromide,EtBr)诱导方法构建线粒体数目减少支气管上皮细胞(Human bronchia epithelia with mitochondrial DNA knock-down,ρ?HBE)模型并进行长期氡照射,用克隆形成法测定氡照射后HBE细胞的增殖能力,用流式细胞仪进行细胞凋亡和线粒体膜电位的检测。结果发现,氡照射后,与线粒体DNA数量正常的HBE细胞(ρ+HBE)相比较,ρ?HBE细胞存活分数明显增高,虽然早期凋亡率明显低于正常细胞,但是总凋亡率增加,同时线粒体膜电位也显著降低。结果提示,氡照射后引起的线粒体减少HBE细胞增殖能力提高与总凋亡率的减少有关,并且与线粒体膜电位的变化相关。     

60Coγ射线对胃癌细胞STAT3表达的影响研究

为了探讨电离辐射对胃腺癌细胞中STAT3活性及定位的影响,首先利用Western Blot方法检测60Coγ射线照射后胃癌BGC-823细胞内STAT3蛋白含量及活性变化,随后提取60Coγ辐射前后BGC-823细胞核蛋白,检测细胞核内STAT3水平,最后利用免疫荧光染色进一步验证辐射前后STAT3在BGC-823细胞...