产壳聚糖酶微生物的筛选及产酶条件的优化

目的 从土壤中筛选能降解壳聚糖的微生物,并优化其产酶条件。方法利用平板筛选法对采集的土壤中的微生物进行富集培养、初筛和复筛,得到能降解壳聚糖的菌株,并对降解壳聚糖能力最强的菌株进行发酵培养,优化产酶条件。结果筛选出3株产壳聚糖酶菌株,编号为C-01、C-02和C-03,其中,C-01、C-02为细菌,C-03为霉菌。C-01菌株产酶能力最强,其最适产酶条件为:以1%粉末壳聚糖+0.1%葡萄糖为碳源,0.5%(NH4)2SO4+0.5%蛋白胨为氮源,培养基初始pH值8.0,培养温度30℃,菌株接种量2.0%,培养时间48 h。在最适条件下,壳聚糖酶活力可达7.78 U/ml。结论已筛选出1株高产壳聚糖酶的菌株,并优化了其产酶条件,为壳寡糖的生产及应用奠定了基础。     

土壤中产壳聚糖酶霉菌的筛选及产酶条件优化

为筛选壳聚糖酶的高产菌株,利用壳聚糖水解圈作为筛选模型,从沈阳化工学院附近农田土壤中筛选得到了产壳聚糖酶能力较高的霉菌M19。对其产酶条件进行优化,最终得到培养基中最佳碳源为1．0％壳聚糖胶体,最佳氮源为1．0％（NH4）2SO4加1．0％蛋白胨,最适初始pH为6．0,最适溶氧量为50mL摇瓶装20mL培养基,最适接种量为7．5％,且发酵72h时该菌产酶能力最强。该方法简便、直观,很适合大量、快速筛选。     

产脂肪酶菌株的筛选、鉴定及其发酵条件优化

通过维多利亚蓝显色培养基筛选从平顶山当地土样和食堂油污中筛选获得一株产脂肪酶菌株BA-4,经形态学观察及16S rDNA分子鉴定,初步确定该菌株属于不动杆菌属。对其产酶条件的研究显示,该菌株最适发酵培养基初始pH为7.5,发酵温度35℃,转速200 r/min,培养时间48 h。     

响应面法优化壳聚糖酶产生菌Mitsuaria sp.K1的产酶发酵条件

壳聚糖（chitosan）及其降解产物因具有优良的物理特性和生物活性而被广泛关注。通过平板透明圈初筛、摇瓶复筛方法,从青岛海岸土壤中分离筛选到1株产壳聚糖酶活性较高的细菌Mitsuaria sp.K1,并对其产酶发酵条件进行了单因素试验和响应面优化分析试验。结果表明：在最适培养基组成（1%粉末壳聚糖、0.5%硝酸钾、0.22%KH2PO4、0.1%Na2HPO4、0.15%KCl、0.05%MgSO4?7H2O）和最佳培养条件（培养温度25.2 ℃,培养时间25.4 h,起始pH值6.5,接种量3%,装液量100 mL/500 mL摇瓶,160 r/min）下,Mitsuaria sp.K1的发酵粗酶液最高酶活平均达11.56 U/mL,比优化前的2.17 U/mL提高了4.32倍。与前人研究结果相比,该菌发酵产酶温度降低了5～10 ℃,产酶周期缩短了23～47 h,因此具有工业发酵应用价值。     

卷枝毛霉发酵产壳聚糖酶的条件优化

以壳聚糖为诱导物,诱导卷枝毛霉产生壳聚1糖酶,并对产酶备件进行了优化。通过单因素实验确定最佳产酶条件为：壳聚糖浓度0．8g·L-1、培养温度40℃、培养基pH值5．5、培养时间84h、摇床转速180r·min-1。     

壳聚糖酶解的随机进攻动力学模型

在假设里氏林霉ATCC56764产生的壳聚糖酶水解壳聚糖是以唯一内切方式随机进攻β-1,4糖苷键的基础上,结合终产物非竞争性抑制的M-M动力学,建立了壳聚糖降解的数学模型,并用四阶Runge-Kutta方法结合Powell优化方法对模型中各个动力学参数进行了优化。模型计算结果与实验数据的比较表明,建立的数学模型能够合理地描述和解释壳聚糖降解的动力学过程,有助于加深对壳聚糖酶法降解机理的认识,对生产特定聚合度的壳聚糖具有指导意义。     

产壳聚糖酶菌株ncps116发酵条件优化及其酶学性质

通过形态学观察、生理生化实验及16S r DNA序列分析鉴定产壳聚糖酶菌株ncps116为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)。通过单因素和正交实验对该菌株发酵产酶条件进行了优化。结果表明其最适产酶条件为:粉末壳聚糖15g/L,硫酸铵30g/L,初始p H 6.0,温度32℃,发酵时间72h,500m L三角瓶装液量120m L,接种量4%,在此条件下该菌株产壳聚糖酶活力达43.89U/m L。经硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析对菌株发酵液中的壳聚糖酶进行了纯化,并对其酶学性质进行了初步研究。结果表明,壳聚糖酶经SDS-PAGE分析,其分子量为4.37万。该酶酶促反应最适p H和最适反应温度分别为5.6和50℃,在低于40℃、p H 3.6~5.6范围内较为稳定,5mmol/L的Mn~(2+)对该酶酶活力有明显的增强作用,Cu~(2+)、Ni~(2+)、Fe~(3+)、Ag~+对该酶酶活力有不同程度的抑制作用。壳聚糖酶酶促反应的米氏常数(K_m)为11.10mg/m L,最大反应速率(V_(max))为1.38μmol/(min·m L),对底物表现出较强的专一性。此外,该酶能够抑制黑曲霉(Aspergillus niger)菌丝的生长。     

一株产普鲁兰酶芽孢杆菌的筛选鉴定及发酵条件优化

从甘肃定西某淀粉加工厂附近土壤中分离得到一株产普鲁兰酶酶源菌AI-1,通过形态学、生理生化试验及16S rRNA序列鉴定并对其进行系统发育分析,鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),对其发酵培养基成分和发酵条件进行了优化。优化后的发酵培养基成分为:可溶性淀粉1.5%,酵母膏1%,蛋白胨1%,NaCl0.5%,K2HPO40.1%,MgSO4·7H2O 0.05%;最佳发酵条件为:培养温度36℃,发酵培养基初始pH 7.0,接种量8%(V/V),摇床转速150 r/min,发酵周期72 h。在此优化条件下,菌株AI-1发酵所产普鲁兰酶的酶活由最初的2.45 U/m L提高到了4.52 U/m L。     

一株产普鲁兰酶芽孢杆菌的筛选鉴定及发酵条件优化

从甘肃定西某淀粉加工厂附近土壤中分离得到一株产普鲁兰酶酶源菌AI-1,通过形态学、生理生化试验及16S rRNA序列鉴定并对其进行系统发育分析,鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),对其发酵培养基成分和发酵条件进行了优化。优化后的发酵培养基成分为:可溶性淀粉1.5%,酵母膏1%,蛋白胨1%,NaCl0.5%,K2HPO40.1%,MgSO4·7H2O 0.05%;最佳发酵条件为:培养温度36℃,发酵培养基初始pH 7.0,接种量8%(V/V),摇床转速150 r/min,发酵周期72 h。在此优化条件下,菌株AI-1发酵所产普鲁兰酶的酶活由最初的2.45 U/m L提高到了4.52 U/m L。     

普鲁兰酶产生菌的筛选、鉴定及其发酵条件优化

从土壤中分离出一株产普鲁兰酶活性较高的菌株Z1,初步鉴定为盐球菌（Halococcus sp．）。研究了其产酶最适条件,确定产酶最适碳源为糯米淀粉、最适氮源为酵母膏＋蛋白胨,优化的培养条件如下：发酵初始pH值为6．0,接种量为14％,500mL摇瓶装液量为150mL,转速为180r·min^-1,培养温度为30℃,培养时间为52h。在优化条件下产酶量达到最高峰,酶活力可达5．06U·mL^-1。     

丙酮-丁醇发酵生产菌的快速筛选方法

建立了高效丙酮-丁醇生产菌的快速筛选方法,采用氮离子注入诱变技术选育丙酮-丁醇发酵生产菌,以2-脱氧-D-葡萄糖作为抗代谢阻遏物,筛选高淀粉酶活性的突变株. 首次根据丙酮-丁醇发酵代谢途径中先产酸后产溶剂及高活力厌氧发酵细胞具有较强还原力的特点,设计了溴甲酚绿和刃天青2种筛选平板,所筛突变株经发酵验证丁醇和总溶剂产生能力均有显著提高,I4-28突变菌株总溶剂产量和丁醇产量分别较出发菌株提高了27.96%和40.66%,丁醇/总溶剂比由63.39%提高到71.94%,突变菌株具有较好的传代稳定性.     

丙酸高产菌株的选育及发酵培养基优化

通过环境压力筛选获得了一株耐受30 g/L丙酸的产酸丙酸杆菌菌株(Propionibacterium acidipropionici WY320),降低了发酵过程中丙酸的反馈抑制作用,采用正交实验设计优化了发酵培养基. 结果表明,发酵培养基最适的玉米浆、酵母膏和(NH4)2SO4浓度分别为60, 10和7.5 g/L. 该条件下,摇瓶培养耐酸菌株的发酵周期为240 h,丙酸产量为49.35 g/L,较优化前提高72.98%,产率为0.21 g/(L×h); 5 L发酵罐培养的发酵周期为168 h,丙酸产量达51.96 g/L,产率为0.31 g/(L×h),较摇瓶培养提高47.62%,优于文献报道水平.     

烟酸羟基化酶产生菌的快速筛选及催化条件

建立了一种基于紫外显影法快速筛选烟酸羟基化酶产生菌的方法,用96孔板培养菌后,将菌液点样到滤纸上,利用6-羟基烟酸在紫外光照射(300nm)下显影的特性,可以快速、方便地筛选出烟酸羟基化酶产生菌.对筛选出的最高酶活菌株BKC4进行了研究,菌株为杆状,革兰氏染色呈阴性,通过16SrRNA序列分析鉴定为恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida).利用BKC4菌株催化烟酸合成6-羟基烟酸,结果表明,BKC4菌株烟酸羟基化酶的最适催化条件为:底物浓度10g/L,温度37℃,pH6.5,摇床转速200r/min,酶在低于30℃及pH6.0～6.5范围内较稳定.     

产脱卤酶菌株的筛选及其应用

以氯乙酸作为唯一碳源,从土壤样本中筛选获得了高产脱卤酶菌株17#,具有将β-溴对硝基苯乙醇转化为对硝基环氧苯乙烯的活性,优化了发酵培养基和转化条件。确定最适培养基组成(g.L-1)为:乳糖8,胰蛋白6,氯乙酸4,Na2HPO43.2,KH2PO41.5,MgSO498 mg,CaCl210 mg,FeSO41 mg,ZnSO40.1 mg,pH值6.50;最适培养条件为30℃培养35 h。最佳转化条件为35℃下转化β-溴对硝基苯乙醇12 h。菌株17#在最适培养条件下,酶活力达到最高值132.80 U.mg-1,在最佳转化条件下的转化率为90.6%。菌株17#可以高效地将β-溴对硝基苯乙醇转化为对硝基环氧苯乙烯。     

微生物絮凝剂产生菌的筛选及其对含油废水的处理研究

采用吡啶筛选法得到微生物絮凝剂产生菌株B-6-1,其絮凝率达到92.5%;将其用于含油废水的处理,对微生物絮凝剂投加量、废水pH值、废水温度及辅助金属离子的类型等影响因素进行了研究。确定微生物絮凝剂的最佳絮凝条件为:微生物絮凝剂投加量0.33 mL.L-1,废水pH值9.0、废水温度35℃、添加辅助金属离子Ca2+。     

一株微生物絮凝剂产生菌产絮凝剂的条件及其发酵生理研究

通过正交实验研究了絮凝剂产生菌F00产絮凝剂的条件及其发酵生理.结果表明,F00产絮凝剂的最佳条件为:初始pH值为6.5,培养温度为30℃,通气量为80 r·min-1,C/N为10;培养72 h絮凝剂活性最高达到72%.F00发酵过程中,絮凝剂生物合成最多是处于菌体快速生长之后、菌丝停止生长到开始进入繁殖阶段大量产生分生孢子的时期,因此可在此时收获絮凝剂.     

蛋白酶产生菌的筛选及发酵条件的优化

筛选了植物蛋白加工用蛋白酶产生菌,为酶的分子改造和植物蛋白加工提供材料基础。通过不同菌株筛选,获得了一株蛋白酶的高产菌株枯草芽孢杆菌X12。经过单因子实验,确立了产酶的最适培养基配方:蔗糖7.5 g/L,黄豆粉6.0 g/L,MnSO40.04 g/L,初始pH=7.0,装液量75 mL/250 mL。结论:按照所优化的产酶条件于37℃,180 r/min,经60 h培养,发酵液最终酶活达1 868.4 u/mL。