枯草芽孢菌B_4菌株基础生物学特性及抗菌物质的研究

通过B_4菌生物学特性及抗菌物质的研究得出:B_4菌最适培养条件为YSP培养基、28℃、PH7和充分供氧,48hr生长量达最大。培养液中抗菌物质活性随培养时间的延长而增高,培养48～72h后达最高。     

枯草芽孢杆菌BS-06抗真菌物质的特性研究

枯草芽孢杆菌BS-06能够产生抗真菌物质.本实验主要研究该菌株所产的抗真菌物质的部分特性.发现产生的抗真菌物质对热稳定性不佳,在酸性条件下容易失活,而在中性偏碱(pH 6～10)的条件下抑菌活性较高.此抗真菌物质对乙酸乙酯敏感,对石油醚和正己烷不敏感,不能被石油醚、正己烷抽提到有机相.甲醇、乙醇和丙酮会使抗真菌物质发生变性沉淀.     

枯草芽孢杆菌WL17产抗菌物质的分离、分析及其抗菌特性研究

用盐酸沉淀枯草芽孢杆菌WL17发酵液,用甲醇抽提得粗提物。采用Sephadex LH-20柱分离粗提物,经HPLC分析,抗菌物质可能为1组由多种分子质量组成的肽类物质。该抗菌物质对鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等食品病原菌有显著的抑菌作用;对pH、温度以及胃蛋白酶、胰蛋白酶不敏感,但在高温、强酸或强碱共同作用下,抗菌物质的抑菌能力显著降低;抗菌物质在不同时间的脉冲强光照射下,稳定性未发生显著变化。     

枯草芽孢杆菌C3产抗菌物质发酵培养基的优化

该文利用对黑曲霉孢子萌发有抑制作用的枯草芽孢杆菌C3,研究优化产抗菌物质的发酵培养基组分.在碳源、氮源、C/N单因素多水平试验结果的基础上,设计Na+、Mg2+、K+度3因素3水平L9(33)正交试验,研究无机盐离子对枯草芽孢杆菌产抗菌物质的影响.结果表明,碳源为1％葡萄糖,氮源为蛋白胨和酵母浸粉各1.5％,碳氮比为1∶3,NaCl为0.5％,KH2PO4为0.1％,MgSO4·7H2O为0.15％时,枯草芽孢杆菌产抗菌物质的抑菌效果明显,对霉菌孢子萌发的抑制率提高了118.64％.     

枯草芽孢杆菌C3产抗菌物质发酵条件优化

利用筛选的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)C3研究提高产抗菌物质的发酵条件。通过测定枯草芽孢杆菌C3抗菌物质对黑曲霉孢子萌发的抑制率,设计6因素3水平正交试验得到优化的发酵条件为:种子液的菌龄12h,种子液接种量2%,发酵培养基装液量75mL/250mL,发酵培养基初始pH 7.0,发酵温度37℃,发酵时间48h。在优化发酵条件下,枯草芽孢杆菌C3产抗菌物质的抑菌活性比优化前提高了26.52%。     

枯草芽孢杆菌fmbR抗菌物质稳定性研究

枯草芽孢杆菌fmbR能够产生抗菌物质,对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌具显著的抑菌效果。本文研究了该抗菌物质对温度、pH和三种蛋白酶(胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶)的稳定性。研究结果表明:抗菌物质在pH7.0下,在20～120℃的范围内,抑菌活性不发生变化;此外在室温下,pH处理在2.0～12.0范围内抗菌物质保持稳定,抑菌活性不受影响。结果还表明:抗菌物质对胃蛋白酶的作用表现出很高的稳定性,而胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶能够在一定条件下将抗菌物质降解。     

产细菌素益生菌——枯草芽孢杆菌HJD.A32生物学特性研究

采用酶学方法、分光光度法和牛津杯法对分离自山西老陈醋新鲜醋醅的产细菌素枯草芽孢杆菌HJD.A32的产酶特性及其环境耐受性进行研究,结果表明:枯草芽孢杆菌HJD.A32具有产液化酶、糖化酶和蛋白酶的能力,固态培养产酶性能比液态培养产酶性能好,糖化酶、液化酶和蛋白酶活力分别达1874.23,4.43 U/g和181.91 U/g;枯草芽孢杆菌HJD.A32对NaCl和胆盐有一定的耐受性,最高耐NaCl、胆盐质量分数分别为6%,1%;对表面活性剂或乳化剂(SDS、LAS、AES、吐温20、吐温80)具有一定的耐受性;对热具有耐受性,经100℃处理5 min后仍可生长繁殖;对模拟人工胃液和肠液具有一定的耐受性,随着培养时间的延长,可以适应人工胃液和肠液环境并生长繁殖;对多种抗生素敏感;枯草芽孢杆菌HJD.A32与醋酸菌能共生。本研究结果为枯草芽孢杆菌HJD.A32作为益生菌微生态制剂的开发和利用奠定理论与应用基础。     

抗瓜果腐霉芽孢杆菌优良菌株的筛选及生物学特性

为获得具有高效抗菌活性的芽孢杆菌用于生物防治与果蔬保鲜,从柠檬、葡萄、红枣、酸奶、腐乳、豆瓣酱、哈尔滨红肠等26种食品样品中分离获得204株芽孢杆菌,通过对峙培养法,初筛得到62株抗瓜果腐霉(P.aphanidermatum)的菌株,选取其中抑菌效果明显的4株菌株,采用牛津杯扩散法经复筛得到1株显著抗瓜果腐霉的芽孢杆菌L-NM62,其发酵上清液对瓜果腐霉的抑菌圈直径达到(24.54±0.13)mm。菌株L-NM62经形态学、生理生化和16S rDNA序列分析,被鉴定为枯草芽孢杆菌L-NM62(Bacillus subtilis L-NM62)。进一步研究枯草芽孢杆菌L-NM62的生物学特性,发现该菌株的最适生长温度37℃,最适pH值7.5,最适接种量1.0%,并测定了该条件下枯草芽孢杆菌L-NM62的生长曲线。在此基础上,考察枯草芽孢杆菌L-NM62的抗菌谱,结果表明,枯草芽孢杆菌L-NM62具有广谱的抗菌活性,尤其对霉菌具有高效广谱的抗菌效果,显示出了很好的潜在开发应用前景。     

枯草芽孢杆菌WL17产抗菌物质对鱼丸的保鲜作用

为了研究抗微生物肽在水产制品保鲜方面的应用,该文探讨了枯草芽孢杆菌WL17产抗菌肽对鱼丸贮藏过程中菌落数、硫代巴比妥酸值（Thiobarbituric acid,TBA）、挥发性盐基氮值（Total volatile basic nitrogen,TVB-N）、硬度、弹性和咀嚼性的影响。结果表明:当抗菌物质添加浓度为2mg/g时,可使鱼丸的菌落数下降1.23个数量级,TBA值和TVB-N处于较低水平,而其质构特性没有大的变化,且与乳酸链菌肽（Nisin）的保鲜效果相当。结果表明枯草芽孢杆菌WL17产抗菌物质对鱼丸具有较好的保鲜效果。      

枯草芽孢杆菌淀粉酶高产菌株的复合诱变研究

该研究以实验室保存的枯草芽孢杆菌为出发菌株,利用紫外和硫酸二乙酯（DES）复合诱变的方法,从大量突变菌株中获取可高效发酵生产淀粉酶的菌株。又通过连续传代实验,确定了该突变菌株突变性状能稳定遗传。结果表明,菌株D-2具有较高的的淀粉酶活力,其淀粉酶活力可达N6．599U／mL,较出发菌株提高到4倍。并在连续培养5代后,仍具有较好的遗传稳定性。该文探讨了一种高效的发酵生产淀粉酶菌株的选育方法,为下一步菌种生长条件优化打下了基础。     

枯草芽孢杆菌发酵对豆类中酚类物质及抗氧化活性的影响

多酚是豆类的主要活性成分,对该类食品的抗氧化功能具有重要影响。本研究利用枯草芽孢杆菌ATCC 6051发酵8种豆类,分析发酵对豆类食品中酚类物质含量和抗氧化活性的影响。发酵红豆、菜豆、蚕豆、绿豆、大豆、扁豆和豌豆的总酚含量分别增加了24.19%,57.89%,123.78%,172.90%,225.32%,300.00%,343.17%。对发酵前、后8种豆类中19种酚类化合物含量的比较发现,发酵影响儿茶素、表儿茶素、水杨酸和芥子酸的含量。发酵绿豆、大豆、豌豆和扁豆提取物的DPPH自由基清除率、ABTS+自由基清除活性以及铁离子还原能力均提高。总酚含量与DPPH自由基清除活性、ABTS+自由基清除活性以及铁离子还原能力均极显著相关(P<0.01),儿茶素、水杨酸和芥子酸与DPPH极显著相关(P<0.01),表儿茶素与DPPH显著相关(P<0.05)。研究表明,绿豆、大豆、豌豆和扁豆是利用枯草芽孢杆菌发酵制备富含酚类和高抗氧化活性产品的理想食品原料,适用于发酵豆类功能食品的开发。     

枯草芽孢杆菌WL17产抗菌物质的发酵条件优化研究

采用Plackett-Burman设计法,对影响枯草芽孢杆菌抗菌WL17活性物质的6个因素进行筛选,分析结果表明,初始pH、装液量、碳氮比为影响抑菌圈大小的3个关键因子.运用最陡爬坡试验法逼近最佳响应面区域,在此基础上,采用响应曲面法对其3个显著因子的最佳水平范围进行研究,确定上述3个因子的最佳水平为初始pH 6.91、装液量47.59 mL/250 mL、碳氮比2.22.拟合试验模型结果显示,抗菌活性类物质抑菌圈直径的大小从未优化前的16.8mm提高到23.14 mm,抑菌圈大小增加37.7％.     

脯氨酸氨肽酶枯草芽孢杆菌分泌表达及特性表征

构建重组枯草芽孢杆菌大量分泌米曲霉脯氨酸氨肽酶,纯化后对其基本酶学性质进行表征。将脯氨酸氨肽酶cDNA序列从载体pMD19-pap上克隆后连接到载体pMA5上得到重组质粒,转化枯草芽孢杆菌WB600后进行分泌表达。通过在培养基中加入5%D-山梨醇和2 mmol/L CaCl2,胞外酶活由7.5 U/mL提高到36 U/mL。通过硫酸铵盐析、Hitrap Q和SuperdexTM75对重组脯氨酸氨肽酶进行了纯化,纯化后的比酶活为247.3 U/mg,纯化倍数达到8.8倍。该酶最适温度为50℃,最适pH为7.5,米氏常数Km和最大反应速率Vmax分别为0.171 mmol/L和55.99μmol/(L·min)。     

柿提取物对枯草芽孢杆菌的抑制作用

对经不同极性提取剂处理的柿子提取物进行抑菌活性分析、耐药性实验,并对其有效成分进行了初步鉴定。结果表明,柿子皮、蒂的抑菌活性高于果肉;脂溶性提取物具有良好的抗菌效果,其中正丁醇,乙酸乙酯部位有较好的抗菌效果;柿浆石油醚提液抑制枯草芽孢杆菌表现出了耐药性,但耐药性并不稳定。有效成分鉴定揭示柿子提取物中含有黄酮类、三萜类和可水解单宁。     

柿提取物对枯草芽孢杆菌的抑制作用

对经不同极性提取剂处理的柿子提取物进行抑菌活性分析、耐药性实验,并对其有效成分进行了初步鉴定。结果表明,柿子皮、蒂的抑菌活性高于果肉;脂溶性提取物具有良好的抗菌效果,其中正丁醇,乙酸乙酯部位有较好的抗菌效果;柿浆石油醚提液抑制枯草芽孢杆菌表现出了耐药性,但耐药性并不稳定。有效成分鉴定揭示柿子提取物中含有黄酮类、三萜类和可水解单宁。      

纳豆杆菌营养体及其芽孢的生物学特性比较研究

目的研究纳豆杆菌营养体和芽孢之间的生物学特性.方法营养消耗法制备纳豆杆菌芽孢悬液,以涂平板计数菌落法比较不同的温度、pH值、盐含量、体外模拟动物胃肠道环境对纳豆杆菌营养体及其芽孢的影响,并采用药敏试纸法检测两者的药物敏感性.结果纳豆杆菌呈二次生长,其芽孢对温度、酸碱、盐和模拟胃肠道环境等不利环境的耐受性均明显强于营养体,但对抗菌药物(除杆菌肽外)较营养体敏感.结论纳豆杆菌芽孢对不利因素的耐受性明显强于营养体,但对药物的敏感性较营养体强.     

枯草芽孢杆菌Tpb55抗菌蛋白纯化特性分析

枯草芽孢杆菌Tpb55分离自烟草叶围,对烟草赤星病菌具有较强的拮抗能力。除去菌体培养液以90%饱和度硫酸铵沉淀所得的拮抗粗提液对热稳定,在pH为5.0～10.0范围内较稳定,对木瓜蛋白酶,蛋白酶K,胃蛋白酶不敏感。粗提液经DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析和Sephadex G-75(1.6 cm×80 cm)凝胶层析,纯化出一种抗菌蛋白,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对蛋白分子量测定,该抑菌蛋白分子量约为47.8 kD,自动Edman降解法从Bst1N端测得的氨基酸序列为:Met-Glu-Ile-Phe-Lys-Tyr-Met-Glu-Thr-Tyr-Asp-Tyr-Glu-Gln-Leu-Val-Phe-Cys-。     

高产碱性蛋白酶枯草芽孢杆菌菌株选育及其水解条件的研究

通过对三种枯草芽孢杆菌的比较分析,以其中酶活力最高的一株作为出发菌株,用15W紫外灯于30cm处照射120s,获得菌株UV-12-3,酶活力为4238.6u/mL。通过正交实验,确定其最适水解条件为:pH6.5、温度32℃、水解42h、接种量为8%。在此条件下水解度可达到46.7%。     

枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶的特性及补料研究

采用分离纯化的枯草芽孢杆菌进行产中性蛋白酶的研究,结果表明:适宜的碳源和氮源分别为玉米粉和豆粕粉;磷酸盐能提高酶产量;未添加Na2HPO4和KH2PO4的情况下,Ca2+和Mg2+对产酶都有抑制作用;Na2HPO4和KH2PO4存在时,1 mmol/L的Ca2+和Mg2+能使酶产量分别提高12%和8%,随着离子浓度的增加,产酶受到抑制;采用在11 h、18 h和24 h分别补加10 g/L玉米粉和7.5 g/L豆粕粉的补加策略,产量提高了96%,生产强度提高了112%。     

枯草芽孢杆菌MX-6产纳豆激酶特性分析

分离鉴定溶栓酶高产菌株,对其所产溶栓酶的类型、相对分子质量及发酵曲线进行特性分析。从中国豆豉中分离一株纤溶酶高产菌株MX-6,经个体形态、菌落形态及16S r DNA基因同源性比对,确定该菌株为枯草芽孢杆菌。应用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)克隆到1 473 bp的纤溶酶编码基因apr N,根据推测氨基酸序列与同源序列的多序列比对及系统进化树结果显示该纤溶酶为纳豆激酶。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-polyacrylamide gels electrophoresis,SDS-PAGE)确定枯草芽孢杆菌MX-6所产纳豆激酶的相对分子质量约28 ku,与预测的相对分子质量27 712. 72 u相吻合。枯草芽孢杆菌MX-6所产纳豆激酶的发酵曲线结果显示在72 h达到纳豆激酶最大合成量,在纤维蛋白平板上的溶圈直径高达21. 60 mm。为更好地实现纳豆激酶的开发及应用提供一定的理论依据和方法参考。