枯草芽孢杆菌液体发酵培养基成分优化研究

通过实验对枯草芽孢杆菌产孢培养基成分中的碳源、氮源、无机盐、生长因子等成分进行筛选与优化,以确定适合枯草芽孢杆菌产芽孢的最佳培养基配方。多次试验的结果表明,通过优化培养基配方,芽孢产率得到提高。通过对碳源、氮源以及无机盐的筛选与优化,实验最终确定枯草芽孢杆菌的最佳产孢培养基的配方为:蛋白胨10 g,硫酸铵2.5 g,牛肉浸出粉3 g,氯化钠5 g,磷酸氢二钾2 g,聚乙烯醇5 g,蒸馏水1000 m L。     

生孢梭菌半固体培养基菌落计数方法的研究

目的 :建立使用半固体培养基进行生孢梭菌菌落计数的方法,使菌落计数结果能够接近最大活菌数。方法 :接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐培养基中,30~35℃培养18~24小时,用0.9%无菌氯化钠溶液稀释生孢梭菌菌液至与标准比浊管相同的浓度,用10倍稀释法分别稀释至1×10-6、1×10-7、1×10-8三个稀释级备用。分别配制琼脂浓度为0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%的6种硫乙醇酸盐培养基,分别取三个稀释级的菌液1m L接种至配制好的上述6种硫乙醇酸盐培养基中,同时在胰酪大豆胨琼脂培养基上接种等量菌液,并放入厌氧袋中,将接种好的上述培养基至35℃培养18~24小时,进行菌落计数并比较结果。结果 :半固体培养基计数法比厌氧袋计数法效果好,使用琼脂浓度为0.5%的硫乙醇酸盐培养基,30~35℃培养18小时,菌落计数最多,最接近最大活菌数。结论 :生孢梭菌半固体培养基计数法适用于生孢梭菌计数。     

枯草芽孢杆菌BS18腐植酸钠型菌粉在猪养殖中的应用

以腐植酸钠为载体将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BS18制成枯草芽孢杆菌BS18腐植酸钠型菌粉,研究日粮中拌料添加(0.2%和0.5%添加量)对猪生长性能的影响。结果表明:不同阶段猪的平均每头日增重比对照显著提高3.65%~9.73%;不同阶段猪的料重比比对照降低2.49%~6.05%,在保育猪阶段呈显著差异;保育猪和小猪的腹泻指数降低,成活率提高;从平均每头日增重和料重比看,保育猪阶段日粮添加0.2%较优,小猪、中猪、育肥猪阶段日粮添加0.5%较优。综上可知,该菌粉在猪不同阶段均可不同程度提高猪生长性能,应用前景广阔。     

枯草芽孢杆菌HG-02聚谷氨酸发酵条件优化

筛选得到了一株高产γ-聚谷氨酸的枯草芽孢杆菌HG-02。通过单因素试验和正交实验对发酵培养基和培养条件进行了优化,小试发酵验证结果显示,优化后γ-聚谷氨酸的发酵质量浓度达35.9 g/L。优化后的发酵培养基为：蔗糖4%,蛋白胨3.5%,谷氨酸钠6%,硫酸镁0.1%,氯化钠0.5%,氯化钙0.01%,磷酸氢二钾0.05%,硫酸锰0.02%,消泡剂1%。优化后的培养条件为：初始pH7.0,装液量40%,接种量6%,摇床转速为220 r/min, 37℃恒温培养48 h。     

三种中药成方制剂的微生物限度检查方法研究

目的建立心宝丸、心力丸和活心丸微生物限度检查方法;研究活心丸在不同浓度2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)琼脂平板上细菌数测定的影响。方法测定心宝丸、心力丸、活心丸对5种试验菌的回收率;活心丸分别在0.0005%、0.001%、0.002%、0.003%TTC浓度营养琼脂平板测定细菌数,选用适宜TTC浓度营养琼脂平板测定活心丸对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的回收率;并对控制菌(大肠埃希菌、大肠菌群、沙门菌)检查方法进行验证。结果心宝丸、心力丸对5种菌的回收率均大于70%,活心丸对白色念珠菌、黑曲霉的回收率也均大于70%,无抑菌作用,可采用常规方法进行微生物限度检查;活心丸使用0.001%TTC营养琼脂平板测出细菌数(控制菌落蔓延生长),测回收率均大于70%,可采用该方法对该药品进行微生物限度检查;其它均符合要求。结论确立了三种中药成方制剂微生物限度检查方法。     

关于《化妆品卫生规范》（2007年版）中菌落总数测定方法的探讨

参考《中国药典》微生物检验的验证方法,以金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和大肠埃希菌三株菌为验证菌株,分别采用营养琼脂培养基和卵磷脂、吐温80一营养琼脂培养基,对7个化妆品进行了菌落总数检验方法的验证。结果表明,卵磷脂和吐温8U可以作为中和剂部分消除化妆品中防腐剂的抑菌作用。只有2个样品适用于目前《化妆品卫生规范》2007年版的菌落总数检验方法。对于另外5个样品,分别建立了适合于它们的菌落总数检验方法。     

枯草芽孢杆菌AS1-296产絮凝剂条件的优化

探讨了不同碳源、氮源、培养时间、温度、初始pH和谷氨酸钠添加量对枯草芽孢杆菌AS1-296产絮凝剂条件的研究,并通过数据拟合,创建了相应的数学模型,通过求解得出最佳的培养条件。枯草芽孢杆菌AS1-296产絮凝剂的最佳培养条件为:以蔗糖为碳源,添加量为2.25%;酵母膏为氮源,添加量为0.64%;谷氨酸钠4.50%、初始pH7.1、培养温度33℃。以此条件培养枯草芽孢杆菌AS1-296产絮凝剂的絮凝率为75%以上。     

原油降解菌的筛选及降油率比较

经牛肉膏蛋白胨液体培养基驯化、固体培养基分离纯化,从长庆油田措施废液集中处理后残渣中筛选出了5株具有较强降解石油能力的微生物菌株,将其分别编号为D1、D2、D3、D4、D5。通过形态学和生理生化实验对分离得到的纯种菌株进行鉴定,结果表明D1属于芽孢杆菌属(Bacillus sp.),D2属于链球菌属(Streptococcus sp.),D3属于黄杆菌属(Flavobacterium Bergey sp.),D4属于微球菌属(Micrococcus Cohn sp.),D5属于产碱菌属(Alcaligenes sp.)。将得到的5株纯菌株在牛肉膏蛋白胨液体培养基中培养3 d,分别按单株菌株5 mL、2种菌株以1:1的比例各5 mL、3种菌株以1:1:1的比例各5 mL的接种量,分别接种到原油液体培养基中培养,7 d后,按照《CJ/T 57-1999》标准测定原油降解率。比较原油降油率,得到2种菌株组合接种的降油率高于3种菌株组合高于单菌菌株。其中D1、D4按照1:1比例,各5 mL的接种量接种到原油液体培养基中得到的降油率最高,为89.39%。     

植物乳酸菌高密度发酵培养基优化

主要探索了如何提高植物乳杆菌高密度发酵活菌数,研究了培养基成分、pH值等发酵条件。结果表明:植物乳酸菌生长最适碳源是淀粉、葡萄糖,最适氮源是酵母浸粉;二价锰离子和无机盐对菌体的生长有促进作用;最适培养基组成:酵母浸粉3%,醋酸钠0.5%,柠檬酸三铵0.2%,磷酸氢二钾0.3%,氯化钠0.2%,吐温80 0.1%,硫酸锰0.3‰,硫酸镁0.2‰,无水葡萄糖2.2%,碳酸钙0.5%,淀粉4.4%。在5 L半自动发酵罐中,发酵16h左右,活菌数为8.9×1011 CFU/mL,发酵液保存周期较长,在75d跟踪检测中活菌数无数量级变化。     

夫西地酸生产菌复合诱变育种及发酵培养基的优化研究

利用常压室温等离子体射流诱变和紫外照射对夫西地酸生产菌株进行复合诱变,得到3株产量明显提高的突变菌株,3株菌的平均发酵效价较出发菌株提高14%;然后,采用均匀设计实验对其中发酵效价提高最多的AU-37菌株的发酵培养基碳、氮源进行了优化,得到适合该菌株的发酵培养基优化配方为:糊精1.86%、花生饼粉2.5%、蛋白胨0.3%、氯化铵0.5%、七水合硫酸镁0.3%、硫酸钾0.6%、碳酸钙1%、pH值7.2,在优化的发酵培养基中,AU-37菌株摇瓶发酵效价较出发菌株提高33.8%,为工业化生产奠定了基础。     

氨基甲酸乙酯水解酶在枯草芽孢杆菌中的表达及发酵优化

将来源于赖氨酸芽孢杆菌SC02的氨基甲酸乙酯水解酶(UH)基因在枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis WB600中进行克隆和表达,在枯草芽孢杆菌中实现了UH活性表达,在摇瓶水平通过单因素考察和响应面分析实验对氨基甲酸乙酯水解酶发酵进行优化. 结表明,酶活最高可达到14.20 U/mL,产酶最佳培养基成分为：淀粉10 g/L、磷酸氢二钾9 g/L、麦芽浸膏25 g/L、硫酸镁1 g/L、胰蛋白胨55 g/L,最适发酵温度为37℃,最佳接种量4%. 在3 L发酵罐中采用最优发酵条件,酶活在16 h达到18.03 U/mL.     

12件化妆品的菌落计数方法学验证的初步考察

参考《中国药典》2010年版微生物限度检验法,以金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和大肠埃希菌为试验菌株,对12件化妆品进行菌落计数方法学验证。结果发现,采用法定方法,只有5件化妆品满足药典的要求(回收率大于70%);采用稀释法,仍有4件化妆品的一个或三个试验菌株的回收率小于70%,其中发用类化妆品的抑菌作用最强。在孟加拉红培养基中添加卵磷脂和吐温80能起到一定的中和效果,建议对相关内容进行修订。     

损伤菌对大肠菌群检测不确定度评价的影响

文章通过对比热损伤与正常大肠菌检测不确定度的大小,探讨损伤菌对大肠菌群检测工作的影响。大肠菌群计数方法参照GB4789.3-2010第二法,正常大肠菌和损伤菌分别采用结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)、胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)进行计数。结果表明:正常大肠菌在TSA平板、VRBA平板上计数结果差异不明显,损伤大肠菌在TSA平板上的菌落数明显高于VRBA平板上的菌落数;对正常大肠菌和热损伤大肠菌进行多次检验的扩展不确定度(P=95%,k=2.145)分别为0.035和0.065。由于损伤菌能在适宜的条件下进行修复生长,这将是对食品安全的一个潜在危险。因此食品中损伤菌的存在对微生物检测提出了新的要求,必须引起检验工作者的足够重视。     

一株产普鲁兰酶芽孢杆菌的筛选鉴定及发酵条件优化

从甘肃定西某淀粉加工厂附近土壤中分离得到一株产普鲁兰酶酶源菌AI-1,通过形态学、生理生化试验及16S rRNA序列鉴定并对其进行系统发育分析,鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),对其发酵培养基成分和发酵条件进行了优化。优化后的发酵培养基成分为:可溶性淀粉1.5%,酵母膏1%,蛋白胨1%,NaCl0.5%,K2HPO40.1%,MgSO4·7H2O 0.05%;最佳发酵条件为:培养温度36℃,发酵培养基初始pH 7.0,接种量8%(V/V),摇床转速150 r/min,发酵周期72 h。在此优化条件下,菌株AI-1发酵所产普鲁兰酶的酶活由最初的2.45 U/m L提高到了4.52 U/m L。     

一株产普鲁兰酶芽孢杆菌的筛选鉴定及发酵条件优化

从甘肃定西某淀粉加工厂附近土壤中分离得到一株产普鲁兰酶酶源菌AI-1,通过形态学、生理生化试验及16S rRNA序列鉴定并对其进行系统发育分析,鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),对其发酵培养基成分和发酵条件进行了优化。优化后的发酵培养基成分为:可溶性淀粉1.5%,酵母膏1%,蛋白胨1%,NaCl0.5%,K2HPO40.1%,MgSO4·7H2O 0.05%;最佳发酵条件为:培养温度36℃,发酵培养基初始pH 7.0,接种量8%(V/V),摇床转速150 r/min,发酵周期72 h。在此优化条件下,菌株AI-1发酵所产普鲁兰酶的酶活由最初的2.45 U/m L提高到了4.52 U/m L。     

细菌产β-葡萄糖苷酶发酵优化

从栀子果中分离到一株在较高温度下产β-葡萄糖苷酶的地衣芽孢杆菌,对其产酶条件进行了优化.通过单因素实验和正交实验确定该菌株产酶的最佳培养条件为:碳源(甘蔗渣粉∶麸皮=3∶1)5%,牛肉膏 0.5%,栀子甙 0.2%,KH2PO4 0.4%,MnSO4 0.04%,pH值9.0,装液量20 mL/250 mL,种子液接种量10%,45℃发酵24 h.优化条件下发酵液中的酶活可达到93.48 U·mL-1.     

肿节风片微生物限度检查法的方法学研究

建立肿节风片的微生物限度检查方法并进行验证,保证检验结果的正确性和可信性.采用平皿菌落计数法对本品的细菌、霉菌及酵母菌计数方法进行验证;采用常规法对大肠埃希菌方法进行验证.通过5种阳性菌的回收率试验,以平板菌落计数法测定肿节风片大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉菌回收率皆在84％以上;控制菌测定中,大肠埃希菌可检出试验菌,阴性菌对照组均无生长.本文所确定的方法可作为肿节风片的微生物限度检查方法学验证的依据.     

谷氨酰转肽酶基因工程菌发酵条件优化的研究

对谷氨酰胺转肽酶基因工程菌进行活化发酵,探究建立最佳的发酵培养基组成成分,最大限度的提高该菌的产量从而提高谷氨酰胺转肽酶的产量。利用光密度大小与液体浑浊度有关对发酵培养基进行优化分析。实验结果表明,发酵培养基最优组分组成是:培养基含0.5%(w/v)的酵母浸粉和1%(w/v)的鱼粉蛋白胨作为氮源,0.5%(w/v)的乳糖作为碳源,0.5%(w/v)的氯化钠作为无机盐,优化后的培养基菌体光密度值大于优化前的发酵培养基菌体光密度值。     

3种生物农药对水稻纹枯病菌的室内毒力及田间防效

[目的]筛选水稻纹枯病绿色防控的药剂。[方法]采用生长速率法和叶面喷雾法分别测定3种生物农药对水稻纹枯病菌的室内毒力和田间防效。[结果]大蒜素和中生菌素对水稻纹枯病菌的室内EC50值分别为29.10、29.03 mg/L,枯草芽孢杆菌EC50值为23.90亿活芽孢/L;6%大蒜素EW 200～1 200 mg a.i./L、3%中生菌素WP 50～300 mg a.i./L和1 000亿活芽孢/g枯草芽孢杆菌WP 400～1 500亿活芽孢/L药后7、14 d对水稻纹枯病的田间防效均在66%以上。[结论]大蒜素、中生菌素和枯草芽孢杆菌适用于水稻纹枯病的防治。     

硫乙醇酸盐流体培养基灵敏度的评价

目的对用于无菌检查的硫乙醇酸盐流体培养基的灵敏度进行评价。方法采用乙型溶血性链球菌(Streptococcus hemdytis-β)、短芽孢杆菌(Bacillus brevis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和生孢梭菌(Clostridium sporogenes)6个质控菌作为评价菌株,对92批国产和进口的硫乙醇酸盐流体培养基脱水商业化成品进行灵敏度评价,以6个菌株检测结果均能达到的灵敏度判定为该培养基对6个菌株的总体灵敏度。结果所有培养基对短芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和生孢梭菌的灵敏度均达到1¹0 cfu水平,有2批培养基对枯草芽孢杆菌的灵敏度未达到110 cfu水平,有2批培养基对枯草芽孢杆菌的灵敏度未达到1¹0 cfu水平;对乙型溶血性链球菌的促生长能力差异较大,灵敏度达到110 cfu水平;对乙型溶血性链球菌的促生长能力差异较大,灵敏度达到1¹0 cfu水平的比例仅为65%;金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌检查92批培养基的灵敏度的差异无统计学意义(P均>0.05);金黄色葡萄球菌与乙型溶血性链球菌检查92批培养基的灵敏度差异有统计学意义(P均<0.05)。结论用乙型溶血性链球菌检测培养基的灵敏度表现出显著差异,部分国产培养基对乙型溶血性链球菌的灵敏度较差,需引起药品检验工作者高度重视。