FSH β亚基基因多态性研究

目前关于FSH β亚基基因作为动物繁殖性状候选基因之一已有许多报道，其中FSH β亚基基因Alu I插入片断多态性是研究者关注的热点之一。关于猪、牛、羊和鸡等家畜家禽以及牦牛和东北虎等保护动物的繁殖力特性研究表明，FSH β亚基基因具有一定的多态性水平，并且与动物繁殖性状有一定的关联性，所以，FSH β亚基基因是理想的提高动物繁殖性状的主效基因之一。本文综述了FSH β亚基基因Alu I插入片断多态性及FSH β亚基基因在猪、牛、羊、鸡、牦牛和东北虎等动物中的研究进展，为今后以FSH β亚基基因作为候选基因对动物繁殖性状的改良提供参考。     

SURF FORFUN

鼠、牛、虎、兔、龙、蛇、马、羊、猴、鸡,狗、猪这十二个生肖,会让你联想到什么？会不会是近期闹哄哄的圆明园流失文物？再者让你想起战争的各种后遗症？     

口蹄疫三价重组鸡痘病毒疫苗分子设计及其构建

针对我国口蹄疫(FMD)流行情况,利用计算机软件模拟分析,构建了口蹄疫病毒(FMDV)复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT.该表达盒以O型、A型FMDV结构蛋白VP1全基因和AsiaI型FMDV 2个基因拓扑型的结构蛋白VP1基因上的5个抗原表位基因(其中2个抗原表位来源于FMDVIND63/7株,该毒株与我国新疆分离株属于同一基因拓扑型,其余3个抗原表位来源于FMDVYNBS/58株)作为主要免疫原基因,以非结构蛋白上的2个Th2细胞表位基因及结构蛋白上的1个Th2细胞表位基因作为辅助基因.将构建好的表达盒OAAT和猪IL-18基因分别插入到鸡痘病毒(FPV)表达载体pUTA-16-LacZ复合启动子(ATI-P7.5×20)和单一启动子(P7.5)下游,构建了携带OAAT表达金和猪IL-18基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL-OAAT-IL18.应用脂质体转染法,将重组鸡痘病毒转移载体质粒与282E4株FPV共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),经BrdU进行3次加压蚀斑筛选后,以不同代次的细胞mRNA为模板,利用FMDV VP1基因和猪IL-18基因特异引物进行RT-PCR和IFA检测,筛选出OAAT和猪IL-18基因共表达的重组鸡痘病毒rF-PV-OAAT-IL18,该重组鸡痘病毒的构建为新型FMDV活载体疫苗的研究奠定了基础.     

共表达H5、H7亚型AIV HA基因与鸡IL-18基因的重组鸡痘病毒构建

以鸡痘病毒(FPV)疫苗株为载体,将H5和H7亚型禽流感病毒血凝素(AIV HA)基因串联后(拥有同一个阅读框)和鸡白细胞介素-18(IL-18)基因分别插入到鸡痘病毒表达载体pUTA-16-LacZ复合启动子(ATI-P7.5×20)和单一启动子1(P7.5)下游,构建了携带AIV HA基因和鸡白细胞介素-18基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL-H5-H7-IL18;用相同的方法构建重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL-H5-IL18;将H5亚型AIV HA基因插入到鸡痘病毒表达载体pUTA2复合启动子(ATI-P7.5×20)下游,构建了携带H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTA2-H5.应用脂质体转染法,将重组鸡痘病毒转移载体质粒与282E4株鸡痘病毒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),经BrdU进行三次加压蚀斑筛选后,以不同代次的细胞mRNA为模板,利用H5亚型AIV HA基因、H7亚型AIV HA基因和鸡IL-18基因特异引物进行RT-PCR和蛋白印迹检测,筛选出H5HA-H7HA融合蛋白基因和鸡IL-18基因共表达的重组鸡痘病毒rFPV-H5HA-H7HA-IL18,H5亚型AIV HA基因和鸡IL-18基因共表达的重组鸡痘病毒rFPV-H5HA-IL18以及单独表达H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒rFPV-H5HA.这些重组鸡痘病毒的构建为AIV活载体疫苗的研制奠定了基础.     

家兔的习性与饲养技术

家畜行为的研究目前大多集中于牛、猪、羊、鸡等,而对家兔行为的报道很少,因此本文结合实际,针对家兔的生活习性及饲养技术进行了论述。     

玉米C型细胞质雄性不育特异片段的分离及验证

对一套玉米同核异质不育系及保持系(包括N48-2、T48-2、C48-2、S48-2)的线粒体DNA进行了扩增片断长度多态性(AFLP)分析比较.从选择性扩增产物中筛选到了一条C48-2所特有的差异条带C48-223.对C48-223进行克隆、测序分析表明,它是玉米C型细胞质雄性不育线粒体atp6基因编码序列的一部分.Southern、Northern杂交分析证实了C48-223在C48-2线粒体上的特异性.这说明该差异片段有可能同C型细胞质雄性不育性状的表现有关.     

牙鲆GH基因外显子多态性与生长性状关系的初步研究

以一个牙鲆养殖群体中的100个个体为实验材料,根据其生长激素(GH)基因的五个外显子序列设计引物,进行PCR扩增,通过SSCP分析技术对其进行检测,结果表明该群体生长激素基因的第四个外显子存在多态性.共检测到两种基因型,其中AA型个体占88%,AB型个体占12%;DNA测序结果表明,AB型在第1763位发生碱基突变,c→t,与AA型同源性达到99%,同时发现不同基因型的个体在体重和头长上表现出显著的差异(P＜0.05).上述结果表明利用PCR-SSCP技术可以检测到牙鲆生长激素基因外显子部分存在序列遗传多态性,且该多态性与其生长的某些性状具有一定的连锁关系,为将来进行标记辅助选育奠定了基础.     

重金属超标有可能引发食源性中毒

为了促进禽畜的生长和预防某些疾病，某些饲养户或饲养场在饲养牛．羊、猪、鸡等禽畜时。经常在饲料中添加某种或某几种重金属元素。有关专家指出人在食用这类肉食品后。如——     

重组质粒pcDNKCpG在动物体内分布、残留及水平传播检测

通过肌肉注射的途径将重组质粒pcDNKCpG导入到鸡和猪体内,提取不同时间段的动物组织DNA,特异性的PCR扩增结果提示重组质粒pcDNKCpG主要分布在鸡和猪的血液和注射部位肌肉中,残留时间分别不超过16天和8天;凝胶电泳回收的组织DNA经过酶切、电泳和转膜后的Southern检测表明,重组质粒pcDNKCpG没有整合到鸡和猪的任何组织DNA中去;地高辛标记的CpG核酸探针的Southern检测结果显示重组质粒pcDNKCpG没有整合入宿主的基因组中;特异性的PCR扩增结果证实重组质粒pcDNKCpG没有转移到其他的环境微生物中去.因此,重组质粒pcDNKCpG具有良好的生物安全性.     

cpcB与CT融合蛋白表达质粒在大肠杆菌中的表达和纯化

将人和鲑鱼嵌合型降钙素基因与藻蓝蛋白的β亚基基因相连,插入融合表达载体pGEX-4T-3中,转化大肠杆菌BL21。融合蛋白cpcB-CT基因在IPTG诱导下获得高效表达。超声破碎后,经SDS-PAGE分析,在48kD处有新增条,灰度扫描测定,过表达蛋白量占50％～60％,85％为包涵体。包涵体经变性、复性,过Glutathion-Sepharose-4B亲和吸附柱,获含有GST。的融合蛋白,该蛋白经凝血酶消化和截留分离,获得纯化的融合蛋白cpcBCT。Western blotting分析表明,产物具有与合成人降钙素相似的抗原决定簇部分;ELISA-受体法和大鼠降血钙试验表明,其具有降血钙作用。提示该融合蛋白可能具有良好的应用前景。     

莴苣1-FFT基因的克隆及其功能分析

利用反转录PCR技术和cDNA末端快速扩增(RACE)技术从莴苣中分离出1-FFT(果聚糖:果聚糖1-果糖基转移酶)候选全长cDNA,序列分析表明该基因的开放阅读框中具有β-果糖苷酶单元(蔗糖结合框)、RDP域和EC域三个活性中心域.Southern杂交分析表明该基因在莴苣基因组中以单拷贝形式存在.利用农杆菌介导的叶盘转化法将该基因转入无1-FFT基因的烟草细胞,获得了转基因植株.体外酶反应证实转基因叶片提取物中具有1-FFT活性,该基因编码1-FFT.     

利用Cre/lox重组系统在转基因动物中筛选高效表达外源基因的"友好"基因座

本实验的目的是利用Cre／lox重组系统进行“友好”基因座的筛选,即利用一个两端带有lox位点的标记基因去转染动物细胞或生产转基因动物,获得可以高效表达外源基因的“友好”基因座。一旦筛选到好的基因座,就建成了一个可以在动物体稳定地高效表达外源基因的技术平台。为此,利用野生型loxP位点和含有一个点突变的lox511位点分别构建两个载体pSL-loxGFP和pSL-loxIFN。首先将含有GFP和新霉素基因的质粒pSL-loxGFP DNA转染牛胎儿成纤维细胞,并用G418筛选,挑选出发绿色荧光的细胞克隆。经增殖培养之后,再将含有鸡γ-干扰素基因的质粒pSL-loxIFN和含有Cre重组酶基因的质粒pBS185 DNA共转染发荧光的细胞克隆,筛选出发生重组后不再发光的细胞克隆。用PCR法检测了两个不发荧光的细胞克隆及发荧光的细胞克隆,并使用质粒pSL-loxIFN、质粒pSL-loxGFP及牛基因组作为对照。检测结果显示,在Cre重组酶的作用下,两个不发荧光的细胞克隆中,一个发生了基因置换,另一个发生了基因删除。以上实验表明,巧妙地用Cm／lox重组系统,可以构建一套使外源基因在动物体内定点地高效表达的技术体系。     

采用AFLP分析齐口裂腹鱼DNA指纹的技术探讨

AFLP(选择性扩增片断长度多态性)指纹技术被认为是当今最有效的DNA指纹分析技术之一,但是由于该技术操作流程较长,对模板DNA质量要求较高以及PCR反应成分等变数条件的影响,要获得高清晰的DNA指纹图谱比较困难.文中以齐口裂腹鱼为研究对象,对AFLP的分析条件作了一定的探索.结果表明:基因组DNA必须是高纯度、高分子量;酶切充分;PCR反应最佳条件为:引物E-XYZ,M-XYZ在体系中的浓度分别为1 ng/mL,5ng/mL;dNTPs浓度为0.2mmol/L;MgCl2浓度为1.9mmol/L.银染时在NaOH条件下显色比在传统银染法中的Na2CO3条件下显色,图谱背景更干净,条带更清晰.     

牛至精油β环糊精微胶囊的制备及其抑菌效果研究

目的制备牛至精油β环糊精(β-CD)微胶囊,并研究其抑菌效果。方法首先,选用β-CD包埋牛至精油,通过扫描电镜观察该包埋物的外部形貌特征。其次,通过薄层色谱、红外光谱等2种方法考察是否已成功制备牛至精油β环糊精的微胶囊。然后,通过紫外分光光度计测定该包埋物的吸光度,按照一定的方法计算其包埋率。最后,选用大肠杆菌、米曲霉菌作为供试菌株,研究该包埋物的抑菌效果。结果牛至精油β环糊精微胶囊得到成功制备,其包埋率为73%,并且该包埋物具有较好的抑菌效果。结论实验达到了预期目的,即在保留牛至精油抑菌性能的同时,也使得液体的牛至精油固体粉末化。     

实时心肌造影在基因转染细胞移植治疗慢性缺血心肌的研究应用

目的用实时心肌声学造影(RTMCE)研究基因转染骨髓基质干细胞移植治疗慢性缺血心肌的效果.方法实验动物(猪)分4组,建立慢性心肌缺血模型4周后,组Ⅰ注射编码血管生长素(ANG)基因的腺病毒转染的自体骨髓基质干细胞,组Ⅱ注射编码ANG基因的腺病毒液,组Ⅲ注射单纯自体骨髓基质干细胞;组Ⅳ(对照组)注射空腺病毒磷酸盐缓冲液.再4周后取心肌组织进行病理学检查.分别于正常状态、慢性缺血心肌模型建立4周和注射后4周开胸时进行RTMCE,选取左室乳头肌水平短轴切面,用闪烁显像观察局部心肌灌注显影情况.实时动态图像存入磁光盘,然后用MCE定量分析软件(CUSQ1.4)分析各阶段心肌灌注图像.结果RTMCE较满意显示了猪慢性缺血心肌基因治疗前后心肌运动和血流灌注状况.经定量软件对闪烁显像心肌再灌注分析,发现慢性缺血心肌模型各组左室侧后壁A值和β值均较正常心肌明显降低(P<0.01),组间比较无明显差异(P>0.05);注射4周后,组Ⅰ、组Ⅱ、组Ⅲ的A值和β值均增高,其中组Ⅰ增高最显著(P<0.01),组Ⅱ和组Ⅲ较对照组亦明显增加(P<0.05),对照组的A值和β值与缺血心肌无明显变化(P>0.05).结论RTMCE及其定量分析软件可对不同血供状态下的心肌灌注进行分析,评价基因治疗慢性缺血心肌的效果.     

江西省科协科普救灾服务迅速有效受欢迎获肯定

<正>自6月27日江西省科协科普救灾服务队急赴抚州灾区开展"情系洪水灾区,科普服务群众"主题科普救灾服务以来,服务队的专家们和工作人员不辞劳苦积极为灾区群众开展了医疗、卫生、心理等咨询服务,农作物灾后自救技术咨询服务,共发放水灾疾病防治,灾后卫生防疫,蔬菜、水稻种植,鸡、鸭、猪、牛养殖等相关科普教材近2万余册,发放科普挂图、画册5000余套,并在灾民安置点     

茭白品种间基因组ISSR多态性分析

对浙江、湖北、江苏等省3个野生茭白材料17个不同品种的茭白种质资源进行了收集,利用ISSR方法对茭白植株进行了基因组多态性分析.结果表明,野生茭白与栽培茭白品种间具有明显的多态性,不同来源的栽培茭白品种间也具有一定的多态性,多态性比例分布在12%~25%之间.利用DPS软件对茭白植株的多态性位点进行的系统聚类分析发现,野生茭白与栽培茭白间距离较远,茭白地域分布及栽培特性与种质资源多样性相关.     

硝化菌在恢复生化污泥活性中的应用

针对兴化集团乙醇污水生化污泥活性低、处理能力不足的问题,向SBR池投加一定比例的硝化菌,配合工艺调整,改善活性污泥性状。研究结果表明：投加硝化菌进行调试运行后,出水氨氮、COD保持稳定的前提下,处理水量得到大幅度提升;系统抗冲击负荷能力提高;污泥沉降性变好,污泥镜检可发现原后生动物数量增多、种类丰富,出现较多楯纤虫、钟虫、独缩虫、盖纤虫和腔轮虫等指示性原后生动物,污泥性状改善明显。     

磷灰石-硅灰石/β-磷酸三钙复合多孔支架材料的制备和表征

以磷灰石-硅灰石玻璃陶瓷(AW)粉和β-磷酸三钙(β-TCP)粉为原料. 以硬脂酸为致孔剂. 经模压成型、1170℃烧结制备磷灰石-硅灰石/β-磷酸三钙复合多孔支架材料(AW/βTCP). 采用X射线衍射(XRD)、扫描电镜(SEM)、能谱(EDS)、诱导耦合等离子体原子发射光谱(ICP-AES)等方法分析支架的晶相组成、显微结构、物理性能、生物活性和降解性. 将大鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs)与支架体外复合培养评价支架的生物相容性. 结果表明: 所制备的AW/β-TCP支架材料的抗压强度达14.3MPa. 孔隙率达66.9%. 孔径为100～700μm. 具有良好的生物相容性、生物活性和降解性. 可作为骨组织工程支架的候选材料.     

外来入侵生物福寿螺β-actin基因片段的克隆及表达分析

采用RT-PCR的方法首次对入侵我国福寿螺的β-actin基因片段进行扩增、克隆和序列测定,并通过氨基酸序列分析推导与其他相关物种的亲缘关系.结果表明,获得的福寿螺β-actin基因cDNA片段大小为840bp,核酸编码有280个氨基酸序列,与其他物种具有高度的同源性.通过邻接法(NJ)构建的系统发育树显示,福寿螺首先与软体动物聚为一簇,然后与节肢动物聚为一簇,再与脊椎动物聚为一簇.此外,RT-PCR结果显示,β-actin基因在福寿螺的鳃、消化腺、肾和足部肌肉等4个组织内的表达基本一致,具有良好的稳定性.