酶解反应与膜分离耦合连续制备紫菜降血压肽

采用酶解反应与膜分离耦合连续制备紫菜降血压肽.研究反应过程中膜通量、蛋白转化率、截留液蛋白浓度的变化.测定连续补料酶膜耦合反应制备紫菜降血压肽的酶解效果和动力学参数,并与传统酶解反应的酶解效果和动力学参数进行比较.结果证明酶膜耦合反应通过消除产物抑制效应,较好地强化了反应过程;通过产物在线分离,有效地避免多肽的过度降解,有助于产物活性的提高;通过酶的循环利用,显著提高单位酶的产肽量.连续酶膜耦合反应为酶法制备紫菜降血压肽提供一种更有效的方法.     

酶法制备米糠蛋白ACEI活性肽

用8种不同的商业化蛋白酶酶解米糠蛋白,以对ACE的抑制率为试验控制指标,筛选出较优的蛋白酶D。选用酶解时间、底物浓度、酶底比、pH值、温度5个因素为试验控制参数,以酶解液对ACE的抑制率为考察指标,进行正交和验证试验,得出D酶酶解的最优工艺条件：时让200min,底物浓度0．05g／mL,酶底比0．05g／g,pH值为7．0,温度55％,此时抑制率和水解度分别为88．8％和4、76％。     

酶法制备米糠蛋白ACEI活性肽

用8种不同的商业化蛋白酶酶解米糠蛋白,以对ACE的抑制率为试验控制指标,筛选出较优的蛋白酶D。选用酶解时间、底物浓度、酶底比、pH值、温度5个因素为试验控制参数,以酶解液对ACE的抑制率为考察指标,进行正交和验证试验,得出D酶酶解的最优工艺条件：时让200min,底物浓度0．05g／mL,酶底比0．05g／g,pH值为7．0,温度55％,此时抑制率和水解度分别为88．8％和4、76％。     

条斑紫菜活性肽的制备及其功能性质研究

采用木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶水解紫菜蛋白制备活性肽,以水解度为评价指标,优化酶水解条件;研究条斑紫菜活性肽的溶解性、乳化性与乳化稳定性、起泡性与泡沫稳定性等功能性质.结果表明,3种酶解物都具有良好的溶解性且在等电点附近不沉淀,乳化性及其稳定性不如紫菜蛋白且随着pH升高而增强,酸性条件下起泡性较好,胰蛋白酶解物起泡性最强.     

条斑紫菜活性肽的抗氧化作用

以条斑紫菜为原料,使用木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶水解紫菜蛋白制备活性肽,采用还原能力、清除羟自由基和二苯代苦味酰基自由基作为抗氧化性评价指标,研究紫菜活性肽的体外抗氧化活性,并测定其分子质量分布。结果表明：3种蛋白酶对紫菜蛋白具有较好的酶解效果,酶解产物具有一定的还原能力;自由基清除率和底物浓度之间具有正相关关系,木瓜蛋白酶酶解活性肽清除羟自由基活性最强,半数清除率质量浓度为0.397mg/mL;胃蛋白酶酶解活性肽清除二苯代苦味酰基自由基活性最强,半数清除率质量浓度为0.261mg/mL;经测定,具有抗氧化活性的小分子肽分子质量分布在148～1963u之间。     

条斑紫菜蛋白提取与抗氧化活性

以条斑紫菜为原料,探讨超声波辅助提取紫菜蛋白的超声时间、温度、料液比3个因素对提取率的影响,用响应面法优化后的紫菜蛋白提取工艺条件为超声时间10min、温度50℃、料液比10:1(mg/mL),在此条件下的实际提取率为37.6%。采用Superdex 200凝胶过滤层析和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法,分离纯化紫菜蛋白并测定其分子质量和抗氧化活性。结果表明:紫菜蛋白由3类分子质量分别为55、22、17ku的蛋白质(亚基)组成,这3类分子质量蛋白质都有明显的抗氧化活性,抗氧化活性随分子质量的降低而增大;实验测得紫菜蛋白清除羟自由基的IC50为1.481mg/mL,清除DPPH自由基的IC50为0.452mg/mL,紫菜蛋白具有较强的抗氧化活性。     

食品蛋白降血压肽及其酶法制备(一)

血管紧张素转换酶在血压调节中扮演重要角色。降血压肽通过抑制血管紧张素Ⅰ向血管紧张素Ⅱ的转化以及阻止ACE使激肽失活而起降血压的作用。利用某些蛋白酶对食品蛋白质的定位水解而可产生具有降血压活性的短肽。降血压肽的分离提取是降血压肽生产的难点所在。综述降血压肽的作用机制及其酶法制备和分离提取的研究进展。     

酶法水解苦荞麸皮蛋白生产降血压肽

苦荞具有很高的营养价值和保健功能,这已被许多的动物学实验、临床实验、流行病学调查结果所证实,本文试图通过酶法水解苦荞麸皮蛋白研究其降血压作用,从而为降血压功能提供科学的证据。     

蛋清蛋白质降压肽纯化及分子量测定

蛋清蛋白质Alcalase 2.4L酶解产物经交联葡聚糖凝胶Sephadex G-25纯化,去离子水洗脱,采用体外检测方法筛选具有血管紧张素转化酶抑制作用的高活性组分.利用高效凝胶过滤色谱(GPC)方法测定纯化高活性组分的分子量分布,根据马尿酸、Gly-Gly-Gly、Gly-Gly-Tyr-Arg和杆菌肽四种标准品的分子量对数与出峰时间的关系,运用GPC软件,绘制标准分子量分布的标准曲线.结果表明:纯化的各个组分中,洗脱时间在180～190min的组分抑制率最高(83.18%),高活性组分的IC50=0.18mg/mL,经GPC测定其分子量分布为241.2198～509.6793Da.     

蛋清蛋白质降压肽纯化及分子量测定

蛋清蛋白质Alcalase2·4L酶解产物经交联葡聚糖凝胶Sephadex G-25纯化,去离子水洗脱,采用体外检测方法筛选具有血管紧张素转化酶抑制作用的高活性组分。利用高效凝胶过滤色谱（GPC）方法测定纯化高活性组分的分子量分布,根据马尿酸、Gly-Gly-Gly、Gly-Gly-Tyr-Arg和杆菌肽四种标准品的分子量对数与出峰时间的关系,运用GPC软件,绘制标准分子量分布的标准曲线。结果表明:纯化的各个组分中,洗脱时间在180¹90min的组分抑制率最高（83·18%）,高活性组分的IC50=0·18mg/mL,经GPC测定其分子量分布为241·2198⁵09·6793Da·      

条斑紫菜酶解多肽的保健功能作用

通过体外观察条斑紫菜酶解多肽(Peptides from Porphyrayezoensis,PPY)在大鼠主动脉环上拮抗去氧肾上腺素(PE)、KCl和血管紧张素I(AngI)的收缩血管作用,研究PPY的血管舒张作用及机制。结果表明:PPY可显著舒张PE、KCl和Ang I收缩的内皮完整的血管环及张PE预收缩的内皮去除的血管环,且一氧化氮合酶抑制剂L-NAME不能抑制PPY的舒血管作用。因此,PPY的舒血管作用可能是非内皮依赖性的,可能既有抑制血管平滑肌细胞受体操纵性钙通道又有抑制电压依赖性钙通道的作用。     

酶法水解紫菜蛋白动力学研究

为阐明酶法水解紫菜蛋白的动力学特性,研究了酶解时间、初始pH值、温度、酶浓度、底物浓度对紫菜蛋白水解度的影响,建立紫菜蛋白水解动力学方程.结果表明:酶解温度50℃、初始pH 9.0为最适水解条件.紫菜蛋白的水解度随着酶浓度的升高而增强,随底物浓度的增加而减弱.在此条件下,碱性蛋白酶水解紫菜蛋白的动力学方程:X=3.597ln[1+(82.788E0/S0-3.058)t],总水解速率方程:am=297.8×(E0-11S0/297.8)×exp(-0.278x),为合理确定酶解反应实验的各种参数提供理论依据.     

固定化碱性蛋白酶制备麦胚降血压肽研究

采用中空壳聚糖作为载体,通过双功能试剂戊二醛作偶联剂,将碱性蛋白酶连接到中空壳聚糖,制备固定化碱性蛋白酶。研究固定化碱性蛋白酶的部分性质及水解麦胚蛋白质条件。实验结果显示,1.5% 戊二醛溶液活化的壳聚糖偶联1mg 碱性蛋白酶,酶催化相对活性可达90%;固定化酶最适pH 值为9.5,最适反应温度约65℃,催化水解麦胚蛋白质的水解率达16.5% 约需10min;固定化酶与麦胚蛋白质的比达到1:5 时,一次性获取含降血压肽水解物质的得率为15.6%。     

大豆分离蛋白ACE活性抑制肽的研究

研究了预处理条件对大豆分离蛋白水解效果的影响,热处理与微波辅助处理相结合能显著提高蛋白酶的水解效率.比较了6种酶解大豆蛋白产物的ACE抑制活性,选择碱性蛋白酶为最佳水解用酶,并优化了酶解条件.研究了8种大孔树脂对水解产物精制效果,结果表明:经D3520型大孔吸附树脂精制后,水解产物脱盐率89.4%,肽回收率90.6%,ACE抑制活性达84.1%.经HPLC法测定,大豆分离蛋白ACE活性抑制肽混合物分子质量主要分布在200～800 ku之间.     

食物源蛋白酶解制备抗菌肽研究

抗菌肽广泛分布于细菌、病毒和各种动植物体内,是生物天然免疫防御系统的重要组成部分。在耐药菌株不断产生的今天,抗菌肽的研究吸引着国内外学者目光。本文综述了乳源蛋白和非乳源蛋白酶解制备抗菌肽、酶解作用提高抗菌蛋白的抗菌性、酶及酶解条件的选择、抗菌产物目的性修饰提高抗菌性的研究,并展望了食物源蛋白酶解制备抗菌肽的未来研究方向。     

牛乳酪蛋白降血压肽的超滤分离

采用超滤法分离酪蛋白降血压多肽溶液,研究超滤操作压力、温度和溶液浓度对膜渗透通量的影响,结果表明,超滤分离浓度为5%的多肽溶液,压力为0.15MPa,温度为45℃条件下,膜渗透通量相对较高;利用高效凝胶排阻色谱技术分析超滤滤过液的相对分子量分布。结果表明,超滤技术可以实现不同分子量多肽组分的分离;多肽超滤滤过液的ACE抑制活性提高。     

坛紫菜降血压活性肽的分离纯化及分子质量测定

用AS.1398 中性蛋白酶酶解制备坛紫菜(Porphyra haitanesis)ACE 抑制肽,并经超滤膜、Sephadex G-15 凝胶层析和反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离纯化,纯化产物测定其氨基酸组成,并运用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定分子质量。结果显示：坛紫菜酶解液经超滤分离获得分子质量小于2000D 的组分ACE 抑制活性最高,IC50 为0.73mg/mL;该组分进行Sephadex G-15 凝胶层析分离得6 个组分,组分E 的IC50 最小,为0.67mg/mL。组分E 经RP-HPLC 分离得峰6 对ACE 的抑制率最高,达到89.54%;峰6 再次过RP-HPLC,又洗出2 个蛋白峰,说明峰6 并不是单一物质,还需进行多次反复纯化。测定峰6 的氨基酸组成主要含有Tyr、Val 和Phe,同时采用MALDI-TOF-MS 分析发现有8 个主要的质子峰,信号最强的质子峰为m/z 861.17,有4 个峰聚集在m/z 860 左右,说明峰6 平均分子质量大约为860D,推算出紫菜降血压肽含有3 个Val、2 个Phe、1 个Tyr,N 端为Val,可能的排序顺序有18 种。     

食物源降血压肽的制备与功能评价

人工合成的降血压药物产生的副反应给医学界带来很大的困扰。源于食品的降血压肽具有明显的降血压作用和较高的安全性,为治疗和预防高血压疾病带来了新的希望。本文主要阐述了降血压肽常见的制备方法,分离纯化技术及降血压活性的评价方法。