畜血及蔗糖废蜜作微生物蛋白酶发酵培养基的试验研究

本研究利用畜血和蔗糖废蜜作为芽孢杆菌蛋白酶生产物培养基，最适的畜血；糖蜜比例为３％：３％。在５Ｌ发酵罐中分批发酵，１８小时后细菌部数和蛋白酶的活力分别达到１０６１０／ｍｌ和８２６２单位／ｍｌ以上。在蔗糖废蜜培养基中补料发酵时，３５小时后细菌数量和蛋白酶活力分别达到１０＾１０／ｍｌ和１３７７０单位／ｍｌ。     

黑曲霉HU53菌株产酸性蛋白酶的条件和酶学性质

本文报道了黑曲霉（Aspergillus niger)HU53菌株产酸性蛋白酶的固体发酵条件优化和酶学特性的研究结果。适合该菌株的最佳固体发酵培养基为麦麸38．8％，豆粕9．7％，NH4NO31．5％和水50．0％，最佳起始pH5．5。在28℃下发酵50h后酸性蛋白酶的比活力达到93．8U／g，且在52h发酵期内基本不产孢子。该酸性蛋白酶的最佳反应酸碱度为pH3．0，最佳反应温度为50℃，对酪蛋白的Km为2．8016mg／ml，在40℃下保温180min后相对酶活力为93．50％。2．0mmol／L的Cu^2 和Mn^2 对该酸性蛋白酶具有极其显著的激活作用，相对酶活力分别为对照的171．9％和121．1％；而相同浓度的Fe^3 和Ca^2 则对其表现出强烈的抑制作用，相对酶活力分别仅为对照的62．5％和44．6％。     

大豆凝乳菌株筛选及其蛋白酶性质的研究

从我国南方白腐乳样品中分离出2株具有豆乳凝乳作用的耐盐菌株DH1和JS3，镜检及生理生化实验测定初步判断为短杆菌属，在40℃及近中性的条件下，2菌株均可在4.5h内凝固豆乳。DH1在添加豆浆的改良肉汤培养基中培养60h后生物量可达1.2g／L，而JS3的生物量在75h时达到1.9g／L，进一步研究表明在适宜的发酵条件下，DH1生长到60h时蛋白酶活力为250U／mL，而JS3生长到65h时蛋白酶活力达到192U／mL。2株菌所产蛋白酶的适宜作用pH范围为7.0左右，温度范围为35～45℃，表明其所产蛋白酶属于中性蛋白酶的范畴。     

豆腐废水发酵生产白地霉的研究

利用豆腐废水从酸浆中分离筛选出的白地霉FL44菌株进行了摇瓶培养研究，通过正交试验确定了FL44生产单细胞蛋白的最适发酵条件，并对其发酵过程作了动态分析。结果表明：培养基组成、初始pH值、摇瓶装量与培养时间均对该菌株细胞生物量有影响。优化培养基组成为：废糖蜜5％，(NH4)2HPO4 1％；培养条件为：培养基初始pH5．5，摇瓶装量40ml／250mL，摇瓶转速为220rpm，30℃培养48h；菌体生物量可达到15．08g／L。     

中性蛋白酶芽孢杆菌BX-4产酶条件及部分酶学性质

采用稀释平板分离法从土壤中分离到一株产中性蛋白酶芽孢杆菌BX-4．通过单因素碳、氮源以及正交试验确定了最佳产酶培养基配方，同时还研究了起始pH值、金属离子、接种量对产酶的影响以及温度、pH值、金属离子以及表面活性剂对酶稳定性的影响；以最佳培养基为发酵培养基，于37℃、160r／min振荡培养48h，酶活达2519．35U／mL；该酶最适作用温度为55℃，最适作用PH值为7．5，在pH7．5缓冲体系中，55℃反应60min后仍有50％的酶活力，Ca^2＋和表面活性剂对酶有一定的激活作用，但激活作用不明显。     

高产蛋白酶菌株的分离、鉴定及酶学性质研究

该研究旨在从非传统环境（磷矿）中分离、筛选高产胞外蛋白酶菌株，对菌株进行形态学观察、生理生化和分子生物学鉴定，并研究其蛋白酶的酶学性质。结果表明，分离筛选到一株蛋白酶高产菌株，编号为PB5，该菌株被鉴定为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis），该菌株产胞外蛋白酶活力为562.3 U/mL，胞外蛋白酶的最适pH值为10，在pH 7～10有较好的pH稳定性；最适温度为60 ℃，20～50 ℃时有较好的稳定性；Na+、Mg2+、Mn2+、K+对蛋白酶活力有明显的促进作用；Fe2+、Ag+、乙二胺四乙酸（EDTA）、苯甲基磺酰氟（PMSF）、十二烷基硫酸钠（SDS）对蛋白酶活力有明显抑制效果。     

枯草芽孢杆菌发酵产碱性蛋白酶的研究

对枯草芽孢杆菌发酵产碱性蛋白酶的培养基成分及培养条件进行优化。在单因素试验的基础上通过正交试验确定发酵培养基各成分最适宜配比。采用此优化培养基对发酵菌株的培养条件进行单因素试验。结果表明最佳的发酵培养基成分为：酵母浸粉2%、蔗糖1.0%、吐温-80 0.5%、硫酸镁0.02%;发酵条件为：接种量4%(V/V)、起始pH9,在150ml 的三角瓶中,装液量为25ml,发酵36h。在最佳培养条件下,碱性蛋白酶粗酶活力可达1670U/ml。     

一株产耐高温碱性蛋白酶菌株的筛选

通过形态观察和 16SrDNA序列同源性比较 ,将一株产耐高温碱性蛋白酶菌株GXD990 1初步鉴定为枯草芽胞杆菌 (Bacillussubtilis)。对GXD990 1菌株产蛋白酶的培养条件进行分析表明 ,最佳产酶培养基为 :麦芽糖 3%、NH4 H2 PO4 0 3%、MnCl2 0 0 5%、KCl0 0 5%、Fe2 (SO4 ) 30 0 0 1%、K2 HPO4 0 1% ,pH11 2。在 37℃培养 6 0h后 ,蛋白酶活力达到546 5U/mL发酵液     

氨肽酶高产菌M80-10-7固态发酵工艺的研究

以米曲霉为出发菌株诱变获得的氨肽酶高产菌M80-10-7，经固态发酵条件初步试验，其培养基最佳配方为：麸皮100g，蔗糖1．5％，玉米浆1．5％，硫酸铵0．5％（以麸皮计），加水比为1：1.4。曲盘发酵结果表明：在起始pH6．8，35℃发酵78h，最高产酶活力达5241．9μ／mL。     

酱香型大曲中蛋白酶产生菌的分离鉴定及产酶条件研究

对酱香型大曲中蛋白酶产生菌进行分离鉴定,并对其最适产酶条件进行研究.采用酪素培养基,从大曲中分离出3株蛋白酶产生菌,筛选出酶活力最高的菌株,经16S rRNA同源序列分析并结合其形态学特征鉴定为枯草孢杆菌(Bacillus Subfilis).以小麦为固体培养基,从温度、初始pH值、培养基水分含量、环境湿度等方面研究其最适发酵条件.最终结果为在培养温度为45℃、初始pH值为5.0、培养基内水分的含量为55％、环境湿度为80％条件下培养72h,其酶活力可达1717.5U/g.     

浓酱兼香型酒醅中产酱香芽孢杆菌的筛选及发酵风味成分分析

该研究从兼香型白酒不同轮次酒醅中筛选到两株碱性蛋白酶活较高并对乙醇具有较好耐受性的菌株,分别为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）LS9和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）S10,其液态发酵产碱性蛋白酶活性分别可达（163.82±15.85） U/mL和（241.69±20.07） U/mL,二者均能在含体积分数6%乙醇的培养基中生长良好。菌株LS9和S10均能产生典型的酱香风味。气质分析结果表明,菌株LS9和S10发酵后代谢产生了5-甲基糠醛、β-苯乙醇、苯乙酸、α-亚麻酸等新的风味成分。菌株LS9和S10在小麦固体培养基中均具有一定的发酵产乙偶姻能力,在28 ℃恒温条件下乙偶姻产量分别为（65.15±6.15） mg/L和（41.33±4.82） mg/L,35 ℃→45 ℃→55 ℃升温培养条件下的乙偶姻产量分别为（41.21±3.27） mg/L和（26.91±2.97） mg/L。     

木聚糖酶产生菌的筛选、发酵及酶学性质

该研究对木论自然保护区土壤中高产木聚糖酶的菌株进行了分离,经菌落形态观察、ITS基因序列分析对菌株进行了鉴定,并通过单因素固态发酵实验确定最佳产酶条件。结果表明,筛选到1株高产木聚糖酶菌株,并鉴定为黑曲霉（Aspergillus niger）。其最佳产酶培养基配方：玉米芯与麸皮质量比为1∶7、氮源为硫酸铵（添加量1.4 g/L）、初始pH值为5.0、料水比为1∶3.5（g∶mL）,接种量为7.5%。在此优化条件下,木聚糖酶酶活最高可达10 801.3 IU/g。酶学性质研究表明,木聚糖酶的最适作用pH值为5.5、最适作用温度为37 ℃。     

浓香型白酒产糖化酶菌株筛选及产酶条件研究

利用透明圈法从浓香型白酒曲房空气中筛选得到1株产糖化酶能力较强的菌株（J8M．53）,液体培养96h后,糖化酶活性可以达到887u／mL。研究发酵条件对该菌株产糖化酶能力影响,结果表明：虽然该菌株产糖化酶的最适初始pH值、培养温度和最佳碳源分别为5℃、30℃和可溶性淀粉,但在pH值为4,培养温度为40℃时酶活依然保持在较高的水平,且菌株对其他各碳源都有一定的利用。该菌株属于好氧菌或者兼性厌氧菌,对氧的需求量较大。另外,该菌株对酒精有一定的依赖性,并具有较强的耐酒精能力,当培养液中酒精浓度6％vol时,菌株的糖化酶活性最高,酒精浓度为12％vol时的糖化酶活性是最大值的74％。     

罗汉果内生菌中产环糊精葡萄糖基转移酶菌株的筛选及产酶条件优化

从罗汉果内生菌中筛选高产环糊精葡萄糖基转移酶（CGTase）的菌株进行菌种鉴定,并对其产酶条件进行优化。利用CGTase快速筛选法从罗汉果内生菌中筛选获得一株高产CGTase的菌株,编号为ND-6,经形态学和分子生物学鉴定其为一株解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。通过单因素和正交试验优化得到其产CGTase条件为1.0%环糊精作碳源,1.0%蛋白胨作氮源,初始pH值为8.0,装液量70 mL/250 mL,发酵温度40 ℃。在此优化条件下,菌株所产CGTase酶活达到9 753 U/mL,是优化前的1.43倍。     

高产酸乳酸菌的筛选、鉴定和生长特性研究

为了获得高品质的乳酸菌用于工业生产,从本实验室保存的8株乳酸菌中筛选出3株产酸量高、生长良好的乳酸菌,并对筛选出的三株菌进行了分析鉴定和生长特性研究。结果表明,鉴定的3株菌中,菌ST1和菌ST3均为副干酪乳杆菌,菌ST6为鼠李糖乳杆菌。菌株ST1和ST3的最适生长温度为31～37℃,ST6的最适生长温度为37～43℃。菌株ST1的最适初始pH为5～7,菌株ST3和ST6的最适初始pH均为6～7。盐度>14%会对菌株的生长产生明显抑制。      

木薯粉与糖蜜混合发酵柠檬酸的研究

利用木薯粉进行柠檬酸发酵,研究了发酵温度、起始糖浓度、起始pH值、摇瓶发酵的装液体积对柠檬酸发酵的影响,确定了柠檬酸批式发酵的优化条件,即:35℃的发酵温度,50ml的摇瓶发酵装液体积,5.0的发酵起始pH值,12%的起始糖浓度。在此优化条件下进行了木薯粉与糖蜜混合配比的发酵实验,最终确定了木薯粉与糖蜜混合的最佳配比为9:1。     

真菌木聚糖酶产生菌的筛选及酶学性质研究

本实验通过土壤稀释涂布法,经过初筛、复筛,筛选出了两株酶活力较高真菌菌株C4 和G1,在此基础上对它们生长的最佳碳源选择、酶学性质进行了研究。结果表明：菌株C4 产酶的最佳碳源为玉米芯－麸皮,培养24h 就可以达到产酶高峰,其酶活力达6582.29U/ml。此酶反应最适温度为40℃,在50℃以下比较稳定,最适反应pH 值为5.0,并且pH 稳定性比较好;菌株G1 产酶的最佳碳源为玉米芯,培养96h 就可以达到产酶高峰,其酶活力到达6301.04U/ml。此酶反应的最适温度是40℃,在40℃以下比较稳定,最适反应pH 值为5.0,但pH 值稳定性不如菌株C4。     

混合型苦瓜保健酒的发酵工艺优化及其抗氧化活性研究

以苦瓜汁与苹果菠萝混合果汁为原料,选用酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）及植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）作为发酵菌种定向发酵苦瓜保健酒。以酒精度、感官评价及苦瓜皂苷产率为评价指标,采用Box-Behnken中心组合试验优化发酵条件,同时以维生素C作为阳性对照,采用清除羟自由基和Fe3+还原能力分析苦瓜保健酒的抗氧化活性。结果表明,苦瓜保健酒的最佳发酵工艺条件为苹果菠萝混合果汁∶苦瓜汁=1.5∶1、发酵时间10 d、酵母添加量为1 mL/L、乳酸菌添加量6 mL/L、发酵温度26 ℃的条件下可生产出质量最佳的苦瓜保健酒。此条件下成品果酒的品质最佳,皂苷含量达到2.78%,酒精度为11.2%vol。抗氧化试验结果表明,苦瓜保健酒有一定的抗氧化活性,0.1 mg/mL的苦瓜保健酒对羟自由基的清除率达到25%以上,对Fe3+也有一定还原能力,且其抗氧化化性与皂苷质量浓度呈正相关。     

Biochemical and kinetic characterization of the digestive trypsin-like activity of the lesser grain borer Rhyzopertha dominica (F.) (Coleoptera: Bostrichidae)

The digestive trypsin-like activity of the lesser grain borer Rhyzopertha dominica was characterized in some of its biochemical and kinetic properties. The enzyme activity from insect midguts was isolated using hydrophobic interaction chromatography with phenyl-sepharose CL-4B. Eight bands (identified from A through H) with caseinolytic activity and molecular weights in the range of 22–51.3 kDa were detected by zymography in casein-polyacrylamide gels. The strongest bands were D, G, and H, and showed estimated molecular weights of 33.6, 25.4, and 22 kDa, respectively. In-gel inhibition of caseinolytic activity showed that the serine protease inhibitors TLCK and SBTI inhibited all the proteases, except E. In-vitro inhibitory assays showed that SBTI and TLCK suppressed the BApNAase activity by 92.3% and 79.2%, respectively, indicating the presence of serine proteases. Wheat hexaploid albumin extracts were highly effective in inhibiting all the proteolytic activity. The chymotrypsin inhibitor TPCK did not affect the BApNAase activity, indicating that the proteolytic activity in R. dominica belongs to the trypsin-like type. With BApNA as the substrate, the proteolytic activity was high across a broad pH range of 6–11 with two peaks of maximum activity at pH 8 and 10 with an optimum temperature of 50 °C. SBTI inhibited the BApNAase activity with IC₅₀ and K_i values of 0.02 μM and 1.17 × 10⁻⁸ M, respectively. The kinetic constants K_m and V_max were 0.07 mM and 2.8 mM/min, respectively. The activation energy (E_a) for BApNA hydrolysis was 33.5 kJ/mol. The results of this study confirm that R. dominica rely on serine protease activity for food digestion.     

高产脂肪酶菌株的分离筛选与培养基优化

实验进行了高产脂肪酶菌株的分离筛选与发酵条件优化的研究。通过对35份富含油脂等样品的富集培养、分离筛选,获得320株产脂肪酶的细菌、酵母菌和霉菌,其中细菌X-13产酶活力最高,约为3.5U/mL;X-13发酵产脂肪酶的最佳碳源和氮源分别为可溶性淀粉、牛肉膏,Mg2+、Ca2+、Co2+对X-13菌株产酶有促进作用,Fe2+、Mn2+、Cu2+抑制菌株产酶;正交试验设计优化的培养基成分为：可溶性淀粉6g/L、牛肉膏4g/L、酵母粉0.5g/L、MgSO4 0.2g/L、聚乙二醇（PEG400）0.6mL/L、K2HPO4 1g/L、橄榄油乳化液20mL/L、pH值为7.0。在此优化培养条件下,细菌X-13培养72h的产脂肪酶活力达到9.28U/mL,较优化前提高2.65倍。