藏灵菇牦牛酸乳发酵过程中乳酸菌和酵母菌对品质的作用

藏灵菇酸乳是由乳酸菌、酵母菌、醋杆菌和霉菌共同发酵形成的一种发酵乳制品,其品质特征与普通酸乳有显著差异。为研究藏灵菇发酵酸乳中乳酸菌和酵母菌分别发挥的作用,利用放线菌酮和青链霉素分别抑制发酵过程中的酵母菌和乳酸菌,测定并比较正常发酵酸乳、抑制乳酸菌发酵酸乳和抑制酵母菌发酵酸乳的风味、口感和质构等相关指标。实验结果显示抑制酵母菌发酵的酸乳中乙醇含量由1.85g/kg上升为2.77g/kg,VB2含量由168μg/100g下降为157μg/100g,与正常发酵组差异较大;抑制乳酸菌发酵的酸乳中酸度由18°T上升为28°T,氨基酸态氮由65mg/100g下降为53mg/100g,乳酸含量持续2mg/g,乙酸由1mg/g下降为0.7mg/g,VB1含量由20μg/100g下降为18μg/100g,与正常发酵组差异较大。乳酸菌在酸乳发酵过程中,对酸度、氨基酸态氮、质构、乳酸、乙酸与VB1的生成贡献较大;酵母菌对乙醇、VB2的生成贡献较大。     

分离自藏灵菇的乳酸菌的益生特性

从藏灵菇中分离纯化5株乳酸菌,初步鉴定2株为嗜酸乳杆菌,3株为乳酸乳球菌。选取其中2株菌研究其益生特性。结果表明,从藏灵菇中分离出的乳酸菌具有良好的益生特性,2株乳酸菌在pH值为4～6可生长良好;耐热范围为30～60℃;胆盐耐受性为0.1%～0.5%;发酵液对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌等肠道病原菌有抑制作用;对抗生素有不同程度的耐药性。     

从藏灵菇中筛选高抗氧化能力乳酸菌

藏灵菇中含有丰富的乳酸菌种,其发酵乳具有较高的抗氧化能力。为得到具有高抗氧化能力的菌株,从14份藏灵菇样品中分离出了80株乳酸菌,其中包括30株开菲尔乳杆菌、9株植物乳杆菌、7株保加利亚乳杆菌、3株干酪乳杆菌、5株假肠膜明串珠菌、26株耐久肠球菌。该文从中选出了36株乳酸菌进行4种抗氧化活性测定:DPPH自由基的清除能力、超氧阴离子的清除能力、还原能力、抗脂质过氧化能力,发现完整细胞组M23、M31、M14、M22,破碎细胞组M30、M22、M14、M30有较高抗氧化活性,并测定了8株抗氧化能力优良的菌株发酵乳的抗氧化能力,发现完整细胞组抗氧化能力较高的4株菌,其发酵乳抗氧化能力也较高。     

藏灵菇乳中具有优良抗氧化活性乳酸菌的筛选鉴定

为了得到具有抗氧化活性的乳酸菌,采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）法和抑制脂质过氧化法对11 株来源于西藏藏灵菇乳的乳酸菌抗氧化活性进行测定,包括它们的完整细胞和无细胞提取物,发现HN05菌株有较好的抗氧化活性。根据菌株的表型、生理生化特征和基因型的特性,初步将HN05菌株鉴定为清酒乳杆菌清酒亚种（Lactobacillus sakei subsp. sakei）。     

藏灵菇中醋酸菌和酵母菌的分离及初步鉴定

结合藏灵菇扫描电镜结果,从藏灵菇叶中分离出1株醋酸菌和4株酵母菌依据其彤态、培养特征和部分生理牛化研究,初步鉴定醋酸菌为巴氏醋杆菌（Acetobacter pasteurianus）,4株酵母菌分别为酒香酵母属（Brettanomyces）、类酵母属（Saccharomycodes）和酵母属（Saccharomycs）的菌株。     

藏灵菇中高产胞外多糖乳酸菌的筛选及其发酵性能的研究

本研究采用高通量筛选技术和苯酚-硫酸法获得高产胞外多糖的乳酸菌菌株，并对其发酵性能和酸奶品质进行测试。筛选的八株菌均具有高产胞外多糖和良好的发酵性能。其菌种鉴定结果是：菌株KTx、 KL1、J1为干酪乳杆菌（Lactobacillus casei），菌株Tx为嗜热链球菌（Streptococcus thermophilus），菌株KS4、J4、Pl、P5为乳酸乳球菌乳酸亚种（Lactococcus lactis subsp．1actis），其中嗜热链球菌Tx制备发酵剂的粘度最高，凝乳时间最短，感官综合评分最高，可利用此菌株进一步开发研制具有良好稳定性的功能性酸奶。     

“藏灵菇”酸乳中优势乳酸菌的分离鉴定

利用碳酸钙平板法从藏灵菇菌块为发酵剂制备的发酵酸乳中分离到2株产酸细菌,对其进行形态、生理生化测定及16SrRNA序列分析。结果表明,发酵凝乳中的这两株优势乳酸菌是乳酸乳球菌乳酸亚种。本研究结果为开发稳定的优良发酵剂提供菌种资源,并为进一步研究藏灵菇酸奶的保健功能奠定基础。     

藏灵菇增殖条件的优化

采用单因素实验、部分因素实验和中心组合设计对藏灵菇在复合培养基中的增殖条件进行优化。结果表明,培养温度和初始接种量对藏灵菇增殖的影响显著,得到的最优条件为:接种量1.1%、温度23.2℃、初始pH6.48、培养时间22h时下,增殖率的预测极大值为263.04%。验证实验表明,在该条件下藏灵菇增殖率为252.67%±4.54%。      

传统发酵食品中耐胃肠道环境乳酸菌的筛选及其在酸乳发酵中的应用

在前期从民族传统发酵食品中分离得到的乳酸菌中,通过检测在人工胃肠道溶液中存活率筛选胃肠道环境耐受性强的菌株,再通过感官评价、质构测定等对耐受性强的菌株应用于酸乳发酵潜力进行综合性评价。结果显示,58株从民族地区传统食品中分离的乳酸菌中有7株菌于4种人工胃肠道溶液中存活率均在50%以上,其中5株菌的发酵酸乳感官评价得分较高;而菌株"新E6"发酵的酸乳在质构破裂力、最大黏附力、硬度、内聚力、弹性、胶黏性、咀嚼性以及黏度、持水力等指标都较优,分子生物学鉴定结果"新E6"为坚强肠球菌(Enterococcus durans),为后续益生菌的开发奠定基础。     

藏灵菇源克鲁维酵母菌M3调节大鼠肠道菌群平衡的研究

利用从藏灵菇中筛选出的发酵性能优良且产胆盐水解酶的马克斯克鲁维酵母菌M3菌株,制备冻干菌粉作为受试物进行动物实验,探讨其对预防性高胆固醇血症大鼠肠道菌群平衡的作用。采用预防高胆固醇血症大鼠模型,将40 只无特定病原体（specific pathogen free,SPF）级3 周龄的大鼠分为高脂模型组、低剂量、中剂量和高剂量实验组进行实验。实验组分别灌胃低、中、高剂量的受试物,高脂模型组灌胃蒸馏水,连续7 周。结果表明,前5 周4 组大鼠粪便中乳酸杆菌（lactobacilli）、沙门氏菌（Salmonella）、产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）的数量处于平缓变化状态,且3 个实验组与高脂模型组相比无显著性差异;5 周时,3 个实验组大鼠粪便中乳杆菌的数量极显著高于高脂模型组（P＜0.01）,沙门氏菌的数量极显著低于高脂模型组（P＜0.01）,产气荚膜梭菌的数量显著低于高脂模型组（P＜0.05）;其中低剂量组的乳杆菌数量最高而沙门氏菌和产气荚膜梭菌数量最低,说明低剂量实验组优于中、高剂量实验组。显示藏灵菇源克鲁维酵母菌M3能够调节高胆固醇血症大鼠肠道有益菌的生长,并抑制有害菌的繁殖,具有良好的调节肠道菌群平衡的效果。     

藏灵菇菌发酵黑米酸乳的研制

将黑米粉经调浆、蒸煮、糊化、液化、糖化、过滤得黑米汁,然后与牛奶进行调配和杀菌,采用藏灵菇作为发酵剂制得黑米酸乳.获得适宜的发酵条件为:黑米汁与牛乳体积比为30:70,蔗糖加量为6%,接种量为7%,42℃,发酵7h.对发酵过程中的酸度变化进行测定,并对藏灵菇发酵酸乳与普通乳酸菌发酵酸乳进行比较.为开发新型发酵剂和新型酸乳奠定了基础.     

藏灵菇发酵产胞外多糖的影响因素及其应用研究

利用苯酚-硫酸法从15个不同地区藏灵菇样品中筛选出3个高产胞外多糖样品（K4、K7、K12）。通过单因素分析确定K4、K7、K12高产胞外多糖的条件为:接种量K4为9%、K7和K12为7%;发酵时间K12为12 h、K4和K7为18 h;发酵温度均为37℃;脱脂乳浓度均为11%。藏灵菇K4、K12分别与商业发酵剂搭配制备发酵乳,结果表明,K12发酵乳的凝乳时间最短（4.52 h）,胞外多糖含量和活菌数分别保持在50 mg/L左右和8.20 log cfu/m L以上,且具有较高的持水力和黏度。      

藏灵菇酵母菌K1耐胃肠道逆环境特性及降胆固醇的实验研究

利用从藏灵菇中筛选的马克斯克鲁维酵母K1菌株探讨胃肠道耐受性及体外降胆固醇功效。分别在pH 1.5~4.5、胆盐浓度0.3%~3.0%、NaCl浓度3.0%~6.0%的模拟胃肠道环境下,采用活菌计数法检测K1菌株的耐胃肠道逆环境特性,以邻本二甲醛法检测其降胆固醇效果。结果表明,在pH2.5~4.5作用4h活菌数超过106cfu/mL,0.3%~3.0%胆盐及3.0%~6.0%NaCl作用8h活菌数为104cfu/mL~106cfu/mL,在pH1.5~3.0(4h)及胆盐浓度0.3%~3.0%的模拟人体胃肠道环境下降胆固醇率40.0%~52.8%。显示K1菌株具有较强的耐胃肠道逆环境特性及良好的降胆固醇能力。     

藏灵菇及其优势菌群的发酵性能研究

以藏灵菇为发酵剂生产酸乳的工艺条件为:发酵温度37℃,发酵时间10h。获得的酸乳产品pH较低。用MRS培养基、Elliker培养基、TYC培养基和SL培养基从藏灵菇中分离出乳球菌、乳杆菌、链球菌和明串珠菌。将优选的分离菌组合发酵鲜牛乳,产酸速度更快,黏度较高。     

冷冻面制品中耐冻藏酵母菌的筛选鉴定及性能研究

从-18 ℃的冷冻老面中分离出6株酵母菌,考察其产气性能、耐酒精能力、耐酸能力、发酵力和耐冻藏能力等指标,筛选出一株最佳菌株,并对其进行分子生物学鉴定和生长曲线测定。结果表明：菌株AY005为最佳菌株,产气效果较好,发酵力最好,面团膨胀体积最大达到250 mL;菌株AY005在-18 ℃环境下储存60 d,酵母菌仍然具有比较好的发酵活力,存活率为62.5%,表现出较好的耐冻藏能力;菌株AY005被鉴定为酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）;4～16 h为菌株AY005的对数生长期。该实验对耐冻藏酵母菌AY005在冷冻面制品的应用提供了一定的理论基础,其抗冻机理还有待进一步研究。     

藏灵菇菌发酵性能以及抑菌特性研究

以复原乳为原料,将藏灵菇菌作为发酵剂以10%的接种量在30℃、37℃、42℃培养至凝乳,4℃冷藏.考察了凝乳期间和后酸化过程中藏灵菇菌产酸能力以及藏灵菇菌发酵乳的保水率、黏度;以大肠杆菌为指示菌,采用滤纸片法研究了藏灵菇菌块、发酵乳上清液对大肠杆菌的抑菌活性.在42℃下藏灵菇菌发酵乳产酸快,9h达到81°T,37℃下发酵12h达到83°T.发酵乳冷藏1d后的测定的黏度值(表观黏度η')由大到小依次为:η'37℃>η'42℃>η'30℃,三者保水率相近.综合考虑藏灵菇菌发酵乳较优发酵温度为37℃,发酵12h;藏灵菇菌块对大肠杆菌有一定抑菌作用,且产生这种抑菌作用的物质对热敏感,发酵乳上清液对大肠杆菌起抑菌作用主要由酸度降低引起.     

藏灵菇发酵酸奶的制备及工艺条件优化

以藏灵菇为发酵剂,考察发酵温度、时间和接种量对藏灵菇发酵酸奶感官品质的影响,通过试验设计优化发酵条件,得到藏灵菇发酵酸奶最佳发酵条件为:发酵温度24℃、接种量5%、发酵时间24h、蔗糖添加量6%、牦牛奶添加量50ml。所制出的酸奶样品为乳白色,组织细腻,光滑均匀,有些粘稠,味道独特的营养性饮品。本项研究可以为藏灵菇酸奶技术提供技术支持,而且可以带动当地经济的发展。     

藏灵菇酸奶的制作及工艺条件优化

以藏灵菇为发酵剂,考察了发酵温度、时间和接种量对藏灵菇酸奶感官品质的影响,通过Box-Benhnken实验设计优化了发酵条件,得到藏灵菇酸奶的最佳发酵条件为:接种量为2%(w/v),发酵温度为20℃,发酵时间为18h。所制产品为乳白色,组织细腻、均匀,稍黏稠,味道独特的营养食品,实验结果可为藏灵菇酸奶的工业化生产提供理论依据。     

藏灵菇酸乳的抗氧化性研究

通过对清除DPPH自由基活性、脂质过氧化抑制活性、亚铁离子的螯合能力和还原能力等试验测定了藏灵菇酸乳的抗氧化性,并与用商业乳酸菌发酵剂发酵制得的酸乳及普通脱脂乳进行抗氧化性对比。结果表明:藏灵菇酸乳在DPPH自由基的最大清除率的能力、对亚油酸过氧化抑制能力和对亚铁离子的最大螯合能力分别达到了87.99%±2.41%、87.75%±1.64%、20.70%±0.65%,均大于商业乳酸菌发酵剂发酵制得的酸乳及普通脱脂乳。证明藏灵菇酸乳与同类产品比较具有较强的抗氧化性。     

藏灵菇菌发酵麦芽汁饮料的研究

将大麦芽粉碎,加水糖化制成麦芽汁;大豆浸泡磨浆制成豆浆,然后将两者按一定比例混合,接藏灵菇进行发酵,制成麦芽汁新型保健饮料.通过单因素和正交实验确定最佳工艺,结果表明,麦芽汁制备最佳条件为:料液比1:4,糖化温度为65℃,糖化至无碘反应;豆浆制备最佳条件为:在15℃,pH=5.5条件下浸泡12h,然后将大豆与水按1∶8的比例进行磨浆,在95℃下保温10min;麦芽汁饮料最佳发酵条件为:麦芽汁与豆奶按9∶1混合,接入6％的藏灵菇,在42℃下发酵6h.在此工艺下制备的饮料,经测定各项理化指标为:酸度36.5°T,还原糖5.29％,可溶性固形物12.5％.