时间分辨荧光免疫层析法定量检测谷物中黄曲霉毒素B1和玉米赤霉烯酮残留

建立了一种快速定量检测谷物产品中黄曲霉毒素(Aflatoxin B1,AFB1)和玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)的时间分辨荧光免疫层析方法。采用时间分辨荧光微球标记黄曲霉毒素B1抗体和玉米赤霉烯酮抗体,研究了如p H值、标记抗体浓度、荧光探针使用量、检测T线包被原浓度、质控C线羊抗鼠Ig G浓度、样品前处理方法等因素对时间分辨荧光免疫层析方法灵敏度的影响。结果表明:AFB1的检出限为0.80 ng/mL,线性范围(IC20~IC80)为0.81~5.67 ng/mL,半抑制浓度(IC50)为2.15 ng/mL。在ZEN检出限为4.58 ng/mL,线性范围(IC20~IC80)为4.76~85.60 ng/mL,半抑制浓度(IC50)为20.19 ng/mL。方法特异性良好,与T-2毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、伏马毒素、赭曲霉毒素A多种真菌毒素交叉率小于10%。通过选择玉米、麦麸、大豆、小麦进行添加回收试验,AFB1的添加回收率在97.1%~108.7%之间,ZEN的添加回收率在92.8%~109.1%之间,相对标准偏差小于15%。选取经HPLC-MS/MS检测过的FAPAS标准质控样本进行测试,检测结果与其结果一致。在实际产品检测对比中,与市售胶体金免疫层析卡,ELISA试剂盒的检测结果基本一致。本方法操作简单快速、可定量,检测过程约25 min,适用于谷物样品中黄曲霉毒素B1和玉米赤霉烯酮的现场快速筛。     

免疫亲和柱净化-HPLC法测定小麦粉中的黄曲霉毒素B_1、玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量

建立了免疫亲和柱净化-高效液相色谱法测定小麦粉中黄曲霉毒素B1(AFB1)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的方法。小麦粉样品经乙腈-水振荡提取,三合一免疫亲和柱净化后,采用双通道荧光检测器串联光化学衍生器同时测定黄曲霉毒素B1和玉米赤霉烯酮,二极管阵列检测器测定脱氧雪腐镰刀菌烯醇。样品中各真菌毒素平均加标回收率为74.8%~105.2%,相对标准偏差为1.96%~6.26%。此方法可用于实验室开展小麦中3种真菌毒素含量的检测。     

北京市地区小包装食用油中真菌毒素污染状况调查

在北京市地区随机抽取120份小包装食用油,采用高效液相色谱法或液相色谱-质谱联用法检测AF、AFB1、ZEN、DON、OTA和FB 6种真菌毒素的含量,并进行危害性评估。结果表明:120份样品中,黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮的检出率分别为6. 67%和17. 50%,且检出黄曲霉毒素的食用油都为花生油,检出玉米赤霉烯酮的食用油都为玉米油,未检出其他真菌毒素;黄曲霉毒素虽然没有超出我国食用油真菌毒素的限量标准,但超出了欧盟的真菌毒素限量标准;玉米赤霉烯酮检出率虽然很高,但没有超出人体的每日最大耐受摄入量。     

粮食中三种主要真菌毒素常用定量检测技术概述

真菌毒素是粮食产品的重要污染物之一,黄曲霉毒素B(1AFB1)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、呕吐毒素(DON)是污染最为普遍的三种毒素。本文对粮食产品中这三种真菌毒素检测技术研究进行系统阐述,对以后的检验工作提供了一些的可借鉴经验。     

玉米赤霉烯酮时间分辨荧光试纸条的制备及特性研究（网络首发、推荐阅读）

研究制备一种基于时间分辨荧光免疫层析法的玉米赤霉烯酮（ZEN）快速定量检测试纸条。采用铕纳米微球作为荧光探针,标记抗ZEN的单克隆抗体,应用竞争抑制原理建立免疫层析定量方法并对其进行方法学考核。结果表明：ZEN荧光试纸条的灵敏度为0.1 ng/mL,线性范围为0.1~5.0 ng/mL,玉米、小麦阴性样品的加标回收率在93.45%~112.20%之间,对于同一个样品5次重复测定的变异系数小于15%。ZEN快速定量检测试纸条具有灵敏度高、反应时间短、准确定量、稳定性好等技术特点,适用于谷物及制品中玉米赤霉烯酮的快速定量检测。     

玉米赤霉烯酮时间分辨荧光试纸条的制备及特性研究

研究制备一种基于时间分辨荧光免疫层析法的玉米赤霉烯酮(ZEN)快速定量检测试纸条.采用铕纳米微球作为荧光探针,标记抗ZEN的单克隆抗体,应用竞争抑制原理建立免疫层析定量方法并对其进行方法学考核.结果表明:ZEN荧光试纸条的灵敏度为0.1 ng/mL,线性范围为0.1～5.0 ng/mL,玉米、小麦阴性样品的加标回收率在...     

表面等离子共振技术快速检测食品中的 玉米赤霉烯酮毒素

目的建立基于表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)技术快速检测食品中玉米赤霉烯酮毒素(zearalenone,ZEN)的方法。方法采用表面自组装技术(self-assembled monolayer,SAM)在金膜的表面修饰羧基基团,将ZEN抗原与牛血清白蛋白(albumin from bovine serum,BSA)偶联物(ZEN-BSA)通过共价键固定在芯片的表面,采用竞争法检测样品中的玉米赤霉烯酮毒素。结果该方法的检测限为8.2 ng/m L,ZEN单克隆抗体与呕吐毒素、黄曲霉毒素B_1、赭曲霉毒素、伏马毒素等没有交叉反应,与α-玉米赤霉烯醇和β-玉米赤霉烯醇交叉反应率分别为15.3%和11.5%。结论本方法具有简便、快速和高灵敏度等优势,在食品中真菌毒素的快速检测方面具有潜在的应用价值。     

利用液相色谱对原粮的真菌毒素检测——HPLC法测定玉米赤霉烯酮

<正>真菌毒素是一种真菌产生的有毒代谢产物。常见的污染粮食的真菌毒素包括:玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)、赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)、黄曲霉毒素B1(aflatoxins,AFB1)、黄曲霉毒素B2(AFB2)、黄曲霉毒素G1(AFG1)、黄曲霉毒素G2(AFG2)、呕吐毒素(deoxynivalenol,DON)以及T-2毒素等。根据大量研究文献及实验室的长期监测数据,出现很多粮食中同时遭到多种真菌毒素污染的情况。在基层实验室检测仪器配置情况的基础上,我国     

12种植物性饲料原料中霉菌毒素污染状况的调查分析

对采集的12种植物性饲料原料中的59份样品进行玉米赤霉烯酮、黄曲霉毒素B1、B2、G1、G25种霉菌毒素的检测,结果表明,玉米赤霉烯酮共10种原料26份样品有检出;黄曲霉毒素B1共7种原料10份样品有检出;黄曲霉毒素B2共2种原料2份样品有检出;黄曲霉毒素G1、G2未检出。饲料原料受玉米赤霉烯酮、黄曲霉毒素B1污染较多,应加以重视。     

2017年上半年我国部分地区饲料及饲料原料中霉菌毒素的污染状况分析

应用酶联免疫吸附法结合高效液相色谱对我国部分地区饲料及原料中黄曲霉毒素B1(AFB1)、玉米赤霉烯酮(ZEN)和脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)3种霉菌毒素的含量进行检测。结果表明：356份样品中AFB1、ZEN和DON检出率分别是87.8%、95.0%和98.3%,平均含量分别为11.2、689.0和1 855.2 μg/kg,说明我国部分地区饲料及饲料原料霉菌毒素污染比较普遍。玉米、玉米副产物、配合饲料和粕类中ZEN和DON污染较严重,AFB1污染主要存在于粕类中,青贮料及发酵料中3种霉菌毒素的污染程度相对较轻,但污染范围较广,建议饲料生产企业应加强对饲料和饲料原料的品控管理。     

基于超导体包被的免疫荧光快检试纸法同时测定玉米中3种毒素的适用性研究

应用基于超导体包被的免疫荧光快速定量检测技术，建立了一种AFB1-ZEN-DON三合一联检卡法，可同时快速测定玉米中的黄曲霉毒素B1(AFB1)、玉米赤霉烯酮（ZEN）、呕吐毒素（DON）三种常见真菌毒素。对质控样准确度、加标回收率、检测限、定量限进行测定，检测多个玉米样品并与液相色谱法的检测结果进行对比，评估方法的适用性。结果表明，AFB1-ZEN-DON三合一联检卡检测AFB1含量在0.5～30μg/kg,ZEN含量在5～200μg/kg,DON含量在100～2 500μg/kg的范围内线性良好。AFB1在5～20μg/kg加标量范围时，回收率为97.62%～99.37%,ZEN在50～150μg/kg加标量范围时，回收率为98.03%～104.07%, DON在500～2000μg/kg加标量范围时，回收率为102.49%～108.53%。与液相色谱法相比，使用该方法检测AFB1相对偏差在–2.84%～11.91%,ZEN相对偏差在–3.43%～18.12%,DON相对偏差在1.83%～12.91%，均在液相色谱法允许偏差20%、15%和23%之内。该方法检测AFB1检测限为0....     

2022年第一季度粕类样品中真菌毒素污染分析

本研究对2022年第一季度收集的57份粕类(不含豆粕与花生粕)样品进行真菌毒素检测分析,采用高效液相色谱法对样品中黄曲霉毒素B₁、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(呕吐毒素)及玉米赤霉烯酮3种真菌毒素的含量进行检测,并参照GB 13078—2017、GB 2761—2017两类限量及相关产品标准对检测结果进行分析与评价。结果显示粕类样品中玉米赤霉烯酮、呕吐毒素处于中风险范围,黄曲霉毒素处于低风险范围。粕类样品中应重点关注玉米胚芽粕,此类样品有33%处于呕吐毒素中风险范围,有13%处于呕吐毒素高风险范围,有38%处于玉米赤霉烯酮中风险范围,有62%处于玉米赤霉烯酮高风险范围。粕类样品中多毒素共污染情况,除呕吐毒素/玉米赤霉烯酮两种毒素共污染的比例为37%外,其余共污染比例均小于10%。     

赭曲霉毒素A时间分辨荧光侧流层析试纸条的研究

目的 构建一种基于时间分辨荧光纳米微球的赭曲霉毒素A (ochratoxin A, OTA)侧流层析试纸条。方法 基于免疫层析原理, 以时间分辨荧光纳米微球为信号探针, 降低非特异性荧光的干扰, 提高检测灵敏度, 并通过优化样品提取液和样品稀释液, 进一步提高现场检测OTA的灵敏度和准确性。结果 OTA在1~50 μg/kg范围内, T线和C线荧光强度的比值与OTA浓度的对数值具有良好的线性关系, 相关系数r2为0.9981~0.9998。不同基质中OTA的检出限(limit of detection, LOD)和定量限(limit of quantitation, LOQ)分别为0.401 μg/kg~0.614 μg/kg和0.970 μg/kg~1.617 μg/kg, 加标回收率为89.53%~118.37%, 相对标准偏差(relative standard deviations, RSDs)小于12% (n=3), 且与呕吐毒素、伏马菌素B1、黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和T-2毒素的交叉反应率均小于5%, 特异性良好。基于荧光定量快速检测技术平台OTA侧流层析试纸条可在8 min内快速准确地定量检测出待测样本中OTA的含量。结论 本研究所制备的时间分辨荧光侧流层析试纸条可实现玉米、小麦和饲料中OTA的快速定量检测, 并具有成本低、灵敏度高、操作简便、准确高、重复性好、特异性好的优点, 可满足国内外OTA检测的技术要求, 为真菌毒素快检技术的发展提供技术支撑。     

啤酒及其生产原料中的真菌毒素

真菌毒素是由真菌产生的一类次级代谢产物,而啤酒及其生产原料的真菌毒素感染则对人们饮用啤酒的安全性造成了威胁。本文综述了赭曲毒素A(Ochratoxin,OTA)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)、玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)、伏马毒素(Fumonisin,FB)和黄曲霉毒素(Aflatoxin,AFB)对啤酒及其生产原料的感染情况、分析方法和限量标准,并简要介绍了谷物中真菌毒素感染的预防措施和脱毒技术。     

啤酒及其生产原料中的真菌毒素

真菌毒素是由真菌产生的一类次级代谢产物,而啤酒及其生产原料的真菌毒素感染则对人们饮用啤酒的安全性造成了威胁。本文综述了赭曲毒素A(Ochratoxin,OTA)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)、玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)、伏马毒素(Fumonisin,FB)和黄曲霉毒素(Aflatoxin,AFB)对啤酒及其生产原料的感染情况、分析方法和限量标准,并简要介绍了谷物中真菌毒素感染的预防措施和脱毒技术。      

高效液相色谱法同时检测粮食中常见8 种真菌毒素的含量

建立免疫亲和柱净化-高效液相色谱法同时测定粮食中黄曲霉毒素B1（aflatoxins,AFB1）、黄曲霉毒素B2（AFB2）、黄曲霉毒素G1（AFG1）、黄曲霉毒素G2（AFG2）、赭曲霉毒素A（ochratoxin A,OTA）、玉米赤霉烯酮（zearalenone,ZEN）、呕吐毒素（deoxynivalenol,DON）和T-2毒素的检测方法。样品经乙腈-水提取后,用免疫亲和柱净化,Agilent Elipse Plus C18（100 mm×4 mm,3.5 μm）色谱柱分离,以甲醇-乙腈-水-乙酸为流动相,流速1 mL/min,柱温35 ℃,进样量20 μL,检测系统为可变波长检测器串联光化学衍生器串联荧光检测器。根据信噪比为3的峰响应值,确定各真菌毒素的检出限为：AFB1 0.446 ng/mL、AFB2 0.152 ng/mL、AFG1 0.523 ng/mL、AFG2 0.334 ng/mL、ZEN 7 ng/mL、OTA 0.7 ng/mL、DON 200 ng/mL、T-2毒素100 ng/mL。样品中各真菌毒素的平均加标回收率,玉米为80.0%～104.5%,小麦为83.2%～102.8%,方法精密度为2.6%～10.2%。从样品前处理到分析整个过程耗时约2 h。本方法简便、快速、灵敏度高,适用于粮食中多种真菌毒素的快速测定。     

啤酒酿造原料中黄曲霉毒素B_1、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A同时检测分析方法研究

研究建立同时检测啤酒及酿造原料中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A的免疫亲和柱净化-柱后化学衍生-高效液相色谱方法。样品经过甲醇-水(80∶20,v/v)提取,通过免疫亲和柱进行富集和净化,采用Thermo BDS HYPERSIL C18色谱柱,以乙腈-2%乙酸(40∶60,v/v)为流动相,等度洗脱,柱后以0.5%碘溶液衍生、改变波长荧光检测。结果表明,黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A检出限分别为0.05μg/kg(AFB1)、3.19μg/kg(ZEA)和0.22μg/kg(OTA),标准曲线的线性范围分别为0.2~10.0μg/L、10.0~1000.0μg/L和5.0~50.0μg/L;在大麦样品中加标回收率为90.0%~109.5%,相对标准偏差为2.18%~4.94%。被检37个样品的真菌毒素含量检测结果表明,正常贮存下的啤酒原料均未检测出真菌毒素,但在霉变大麦样品中可以检测出少量的真菌毒素。     

我国部分地区2010年产谷物及其制品中多组分真菌毒素污染状况研究

目的 了解我国部分地区2010年产谷物及其制品中多组分真菌毒素污染状况.方法 2010年在安徽、云南、福建、甘肃、广西、海南、黑龙江、湖北、湖南、江西、山西和上海12个省(市/自治区)采集玉米及其制品、小麦粉、大米和花生共计650份样品,用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)方法检测14种真菌毒素.结果 玉米制品和小麦粉样品中污染的真菌毒素主要是B类单端孢霉烯族化合物和玉米赤霉烯酮(ZEN).215份玉米样品中有84.65％检出脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON),其中7份样品中的DON污染水平超过我国规定的1 000μg/kg限量标准,超标1.08 ～2.51倍(平均1.77倍);69.30％ (149/215)的玉米样品ZEN阳性,其中23份样品中的ZEN水平超过我国规定的60 μg/kg限量标准,超标1.06～19.19倍,平均4.32倍.53.02％的玉米样品还受到黄曲霉毒素的污染,其中有12份样品中AFB1含量超过了我国规定的20 μg/kg限量标准,尤以云南、广西样品受污染较重.125份小麦粉样品中,仅有1份来自湖北的样品其DON污染水平(1 016.80 μg/kg)超过我国规定的1 000 μg/kg限量标准.40.41％的花生样品不同程度地受到黄曲霉毒素的污染,其中有5份样品中的AFB1水平超过20 μg/kg的国家限量标准;大米受真菌毒素的污染较轻.结论 我国玉米制品和小麦粉受多种真菌毒素污染,且以B类单端孢霉烯族化合物和ZEN为主;玉米和花生不同程度地受到黄曲霉毒素的污染.     

2019年饲料原料霉菌毒素污染状况调查

目的 调查分析2019年饲料原料霉菌毒素污染状况。方法 采用胶体金免疫层析法或上转发光免疫分析(up-conversion immunoassays, UPT)法对安佑集团各分子公司所采购的大宗饲料原料中呕吐毒素、玉米赤霉烯酮和黄曲霉毒素B1含量进行快速检测, 2019年度共检测饲料原料样品20918份。结果 对比安佑集团企业标准, 2019年饲料原料霉菌毒素污染总超标率为3.2%。饲料原料霉菌毒素污染整体情况由重转轻, 上半年污染较重主要是由于麸皮及次粉霉菌毒素污染超标所致, 下半年霉菌毒素污染程度整体较轻, 但9月玉米和玉米干酒糟及其可溶物(distillers dried grains with soluble, DDGS)的玉米赤霉烯酮(zearalenone, ZEN)污染情况较重, 其中DDGS达重度污染; 从产地来源看, 2019年全国各产地麸皮和次粉呕吐毒素(vomitoxin, DON)污染较重; 河南产地米糠黄曲霉毒素B1(aflatoxins B1, AFB1)及四川产地米糠ZEN达重度污染; 山东、江苏、云南、安徽产地玉米AFB1及安徽产地玉米DON达重度污染; 且饲料原料中的霉菌毒素并非单一存在, 多数情况下是多种毒素共存。结论 与2018年饲料原料霉菌毒素污染调查数据(未公开发表)相比, 2019年原料污染程度较轻。     

胶体金免疫层析技术快速检测谷物中3种真菌毒素的研究

目的应用胶体金免疫层析技术开发一种快速检测谷物中黄曲霉毒素B1(AFB1)、玉米赤霉烯酮(ZEN)和呕吐毒素(DON)的三联检测卡。方法优化胶体金溶液p H值、金标抗体量及抗原包被量制备3种胶体金试纸条,将试纸条组装成检测卡,研究该卡的检测限、准确度、特异性和稳定性。结果 AFB_1、ZEN和DON 3种试纸条的胶体金溶液最适p H值分别为7.5、7.5和7.0,金标抗体量分别为4.2、7.2和9.6μg/ml,抗原包被量分别为1.0、1.4和0.8 mg/ml。检测卡的检测结果与仪器检测结果基本一致,重复性较好,与结构类似物及其他霉菌毒素无交叉反应,在室温条件下可以保存12个月。结论该三联检测卡操作简便、快速、准确、稳定,且能同时检测3种真菌毒素,在谷物的现场检测中有较好的应用前景。