天然防腐剂——乳酸链球菌素的研究进展

防腐剂是一种重要的食品添加剂 ,作者简要介绍了乳酸链球菌素的防腐机理、在食品工业中的应用及今后的发展前景     

乳酸链球菌素在食品工业中的应用

综述了乳酸链球菌素的结构、性质以及其在食品工业中的应用,说明其作为一种天然的生物性食品防腐剂,具有广阔的应用前景。     

不同发酵条件下Tween80对 乳酸链球菌SM526产Nisin的影响

以SYS3为发酵培养基,研究了在不同发酵条件下Tween80对乳酸链球菌SM526产Nisin的影响.在自然pH、兼性厌氧发酵条件下,在体积浓度0 1%的范围内,乳链菌肽的活性随Tween80浓度的提高而提高,最适浓度(1%)时,提高幅度为36%;浓度超过1%后, Nisin的活性有所降低.在兼性厌氧条件下通过流加NaOH溶液保持恒定pH为 6.5并添加1%的Tween80进行发酵,同不添加Tween80相比,发酵单位提高了30%.在厌氧条件下恒定pH为6.5并添加1%的Tween80进行发酵,同不添加Tween80相比,发酵单位提高了17%.     

肺炎球菌表面黏附素A和表面膜蛋白A的研究进展

肺炎球菌表面黏附素A(Pneumococcal surface adhesin A,PsaA)为脂蛋白,属于ABC型转运蛋白复合物(ATPbinding cassette transporter),存在于各型肺炎球菌中,是其重要的毒力因子和黏附因子,编码基因高度保守,具有转运Mn2+及黏附功能。肺炎球菌表面膜蛋白A(Pneumococcal surface protein A,PspA)是与其毒力相关的一种重要的表面抗原,在目前发现的所有临床分离的肺炎球菌中几乎均存在,其编码基因变异性较大。PsaA和PspA均为肺炎球菌的保护性抗原和新型肺炎球菌疫苗的研发热点之一。本文就这两种蛋白的结构、功能、免疫学特性及应用的研究进展作一综述。     

A群链球菌疫苗的研究进展

A群链球菌(GAS)是人类细菌感染最常见的病原菌之一,其疫苗的研发仍是尚未解决的难题。本文介绍了目前GAS疫苗研发的不同策略,并重点阐述了M蛋白多肽疫苗的最新研究进展。     

肺炎链球菌表面蛋白A的研究进展

肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia,Sp)是儿童社区获得性感染的主要病原菌。目前使用较多的7价结合疫苗及23价肺炎链球菌多糖疫苗在长期使用后会出现血清型替换,这可能会使接种疫苗的受益程度下降。寻找新的候选疫苗是有效预防Sp疾病的重要途径,蛋白质疫苗因此备受关注。本文就近年来研究较多的下一代Sp疫苗的重要的候选蛋白质抗原,肺炎链球菌表面蛋白A(pneumococcal surface protein A,PspA)的研究进展作一简要综述。     

乳酸酯及其衍生物的合成研究进展

介绍了近几年来乳酸乙酯、乳酸丁酯，乳酸乙酯乙酸酯，O－酰基乳酸酯，丙酮酸乙酯，2－氯丙酸乙酯，O－对甲苯磺酰－（S）－乳酸甲（乙）酯及L（－）对甲苯磺酰乳酸乙酯的合成研究进展，提出了中国加快发展乳酸工业亟待解决的几个问题。     

A群链球菌四价重组蛋白的表达、纯化及其免疫原性

目的原核表达并纯化A群链球菌M1、3、6、18型四价重组蛋白,并检测其免疫原性。方法以克隆质粒pUC18-Strep4为模板,PCR法扩增四价重组蛋白基因,克隆至表达载体pQE30中,构建重组表达质粒,转化E.coilM15,筛选阳性克隆,IPTG诱导表达。采用Ni2+-NTA凝胶亲和层析纯化重组蛋白。以该蛋白免疫家兔,ELISA法检测血清抗体滴度;间接免疫荧光法(IFA)检测A群链球菌型特异性抗体;体外杀菌试验检测杀菌抗体活性。结果四价重组蛋白表达质粒pQE30-Strep4经双酶切和测序,证明构建正确。重组蛋白相对分子质量与预期相符,表达量约占菌体总蛋白的30%,为可溶性表达。纯化后蛋白纯度可达90%以上,并可诱导家兔产生高滴度的M1、3、6型特异性杀菌抗体。结论已成功表达了A群链球菌四价重组蛋白,纯化后的蛋白可诱导家兔产生针对A群链球菌M1、3、6三个血清型菌株的特异性杀菌抗体。     

千层纸素A的抗肿瘤药理作用及机制研究进展

千层纸素A是从中药黄芩根部提取的主要黄酮类化合物之一,能通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡、诱导细胞周期阻滞和抑制肿瘤转移等多方面发挥抗肿瘤作用。本文主要阐明近5年内对于千层纸素A抗肿瘤活性的多种机制、途径和分子靶点的研究进展,证实千层纸素A的抗肿瘤作用,为进一步开发提供理论支撑。     

肺炎链球菌表面蛋白A的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备

目的原核表达、纯化肺炎链球菌表面蛋白A(pneumococcal surface protein A,Psp A),并制备多克隆抗体。方法应用ANTHEWIN、DNAstar等分子生物学软件,对Psp A氨基酸序列进行分析,筛选出抗原表位富集区(第33~109个氨基酸),选用原核生物偏爱的密码子优化基因序列,化学合成全新的基因序列pspa,插入质粒p GEX-4T-2和p ET28a(+)中,构建重组表达质粒p GEX-4T-2-pspa和p ET28a(+)-pspa,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。分别纯化带有GST标签和His标签的Psp A重组蛋白GST-Psp A和His-Psp A,以His-Psp A作为免疫原,经背部多点免疫新西兰大耳白兔,间接ELISA法检测血清抗体效价,Western blot法检测血清抗体特异性。结果两种重组表达质粒p GEX-4T-2-pspa和p ET28a(+)-pspa经双酶切鉴定构建正确;表达的两种重组蛋白GST-Psp A和His-Psp A相对分子质量分别约为33 000和18 000,均为可溶性表达,纯化后目的蛋白条带均无降解,纯度约为95%,蛋白浓度分别为2和0.2 mg/ml;制备的兔抗血清效价较高,可达1∶200 000,且特异性较好。结论原核表达并纯化了肺炎链球菌Psp A融合蛋白,并制备了特异性良好的高效价兔抗血清,为下一步建立肺炎链球菌快速检测技术奠定了基础。     

四价重组A群链球菌多肽疫苗基因序列的合成及克隆

目的设计针对可引起风湿热的A群链球菌M1、3、6、18四个血清型的重组多肽疫苗,合成并克隆该重组多肽疫苗的核苷酸序列。方法从美国疾病预防和控制中心(CDC)数据库获得A群链球菌1、3、6、18四个血清型M蛋白型特异性序列,根据文献报道并结合生物信息学的方法,筛选每一个血清型的特异性序列中与人体组织蛋白无同源性的区段,将其按1-3-6-18型的顺序串连,在串联序列的C-端加上一个四个血清型所共有的与人体组织蛋白无交叉表位、且具有一定免疫原性的保守序列J14。对设计的多肽疫苗的氨基酸序列进行与人体组织蛋白的BlastP比对、亲水性分析、二级结构分析、空间结构分析以及B细胞表位预测。采用DNAWORK2.0在线软件设计一组寡核苷酸引物,OverlapPCR方法合成该多肽疫苗的核苷酸序列,并在5′端和3′端分别引入BamHⅠ和HindⅢ的酶切位点,将该序列双酶切后克隆至pUC18载体上,并测序。结果软件分析显示,设计的多肽疫苗与人体组织蛋白无同源性,有较好的亲水性,二级结构与空间结构均与天然M蛋白相似,在每一个血清型的区段都可能存在B细胞表位。成功扩增出了该多肽疫苗的DNA序列,并获得了一个与设计序列完全一致的重组克隆载体。结论已成功设计了一种四价重组A群链球菌多肽疫苗,为其重组表达和免疫原性的研究奠定了基础。     

链球菌溶血素与真菌果胶酶融合表达及纯化条件的优化

目的优化链球菌溶血素(streptolysin O,SLO)与真菌果胶酶(pectin lyase,PL)的融合表达及纯化条件。方法将活化培养的工程菌以2%接种量接种于发酵液体培养基中,于37℃,200 r/min培养至不同生长期(A_(600)值分别为0.6、0.8和1.0),分别于不同温度(10、15、20、25、30、35和37℃)及加入不同终浓度IPTG(0.05、0.1、0.2、0.4、0.5、0.6、0.8和1.0 mmol/L)条件下诱导表达不同时间(6、12、20、24、36、48和60 h)。将诱导表达的融合蛋白进行Ni离子亲和层析纯化,对纯化中的上样缓冲液(binding buffer,分别含0、5、10、15、20、25、30 mmol/L咪唑)、清洗缓冲液(washing buffer,分别含0、5、10、20、30、40、50、60 mmol/L咪唑)及洗脱缓冲液(elution buffer,分别含100、200、500、1 000 mmol/L咪唑)的咪唑浓度进行优化。结果最佳诱导表达条件为:工程菌培养至A_(600)为0.8时,加入0.4 mmol/L IPTG,于20℃诱导24 h,目的蛋白的相对分子质量约91 500,占全菌总蛋白的38.6%,溶血活性可达4.0×10~7U/ml。最佳纯化条件为:binding buffer和washing buffer最佳咪唑浓度为5和60 mmol/L,elution buffer分别使用200和500 mmol/L咪唑进行阶段性梯度洗脱,纯化产物纯度可达95%。结论成功优化了SLO与PL融合蛋白的表达及纯化条件,纯化后获得了纯度较高的融合蛋白,为进一步研究SLO蛋白的性质及应用奠定了基础。     

L-乳酸的制备及其应用的研究进展

阐述了L-乳酸的制备、性质及其在各领域中的应用状况,并根据目前状况,对今后L-乳酸的开发应用提出了一些建议。     

乳酸生产、应用及市场前景

介绍了乳酸生产概况、主要用途及市场需要     

多杀菌素A的纯化方法研究

采用柱层析的方法从多杀菌素原料药中提取多杀菌素A和D的混合物(85∶15),然后采用重结晶的方法从多杀菌素A和D的混合物中提取多杀菌素A。多杀菌素A提取的优化条件为:甲醇为重结晶溶剂,多杀菌素A和D混合物质量与甲醇体积比为0.1 g/mL。在该条件下多杀菌素A的重结晶收率为64%,纯度为98.7%。     

L-乳酸的研究进展及其应用前景

阐述了L-乳酸的理化性质及其生产制备方法的优缺点，着重综述了微生物发酵法生产L-乳酸的研究进展及其各领域中的应用，并对L-乳酸的进一步开发应用提出了一些建议。     

活性化合物泽兰素的合成研究进展

泽兰素是来源于泽兰属植物的苯并呋喃活性成分,具有抗肿瘤、抗炎、杀菌、降糖、抗抑郁和抗氧化等多种生物活性,具有进一步开发利用的前景。由于泽兰素的获取主要从泽兰属植物中提取分离,为快速获取泽兰素,目前文献中主要有酰基苯并呋喃衍生化法、水杨醛环化法、烯炔偶联环化法和炔醇偶联环化法等4种方法可用于泽兰素的全合成;在泽兰素的结构衍生方面,主要有泽兰素类似物和多聚体两类活性成分报道。系统综述了近50年来关于泽兰素的生物活性、合成方法和结构修饰的文献研究进展,以期为泽兰素的进一步开发利用提供参考。     

乳酸脱氢酶的分离纯化及其催化合成苯乳酸的研究进展

对乳酸脱氢酶的来源、分离纯化及其催化合成苯乳酸的研究进行了综述。首先,分析了乳酸脱氢酶的微生物来源,重点对乳酸菌中乳酸脱氢酶的分离方法及相关研究现状进行了总结,认为采用晶胶层析方法可直接一步从破胞液中分离高纯度的乳酸脱氢酶;然后,分析了乳酸脱氢酶催化苯丙酮酸的核心反应机理、最适条件及其工程改造,讨论了pH、温度、耐热性等参数对乳酸脱氢酶催化苯丙酮酸的影响,表明不同菌种乳酸脱氢酶催化苯丙酮酸最适pH和温度有很大差异;最后,对比了乳酸脱氢酶酶法合成苯乳酸相关工程改造的研究工作,指出基因修饰能有效提高乳酸脱氢酶酶法对苯丙酮酸的催化能力,同时乳酸脱氢酶与辅酶共表达体系的构建是下一步研究的重点方向。     

天然产物Calanolide A的全合成研究进展

对具有抗HIV-1活性的天然产物Calanolide A的全合成研究进展进行了综述,并分析了各种合成方法及其关键步骤.