复合诱变选育木聚糖酶高产菌株

目的：米曲霉高产木聚糖酶菌株的诱变筛选。方法：以米曲霉FSl为出发菌株,采用紫外线＋氯化锂复合诱变,筛选出一株高产木聚糖酶菌株FSl－41,并对该突变株的遗传稳定性初步研究。结果：紫外线的最佳照射时间为210s,氯化锂的最佳浓度为0．8％,筛选出来的突变株FSl－41产酶水平可达4992．51U．mL－1,比出发菌株提高了22．49％,突变株经5代连续培养,产酶性能稳定。     

紫外诱变筛选Nisin高产菌株的研究

以HS-5乳酸链球菌为出发菌株,进行紫外线照射诱变.经初筛、复筛得到2株高产乳酸链球菌肽的稳定性菌株.其效价比原始菌株分别提高了12.41%和4.76%.效价达到了3116IU/mL和2904IU/mL.     

紫外- 氯化锂复合诱变选育中性植酸酶高产菌株

以放射型根瘤杆菌为出发菌株,对其进行紫外-氯化锂(LiCl)复合诱变筛选,得到一株产中性植酸酶酶活力较高的菌株。当培养温度为30℃、pH值为7.0、接种量为10%时,经96h培养后,该菌株产中性植酸酶活力最高达到18.49U/mL,比原始菌株提高47.68%,且发酵周期缩短12h,该菌株具有良好的遗传稳定性。     

紫外-亚硝酸钠复合诱变高产纤维素酶菌株

为得到高产纤维素酶的菌株,改善菌种产纤维素酶的能力,该研究以贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）为原始菌株,以纤维素酶酶活为考察指标,通过单因素和正交试验优化复合诱变条件。结果表明,最优复合诱变条件为紫外（UV）处理150 s、0.25 mol/L亚硝酸钠（NaNO2）在诱变温度23 ℃下诱变处理23 min。在此优化复合诱变条件下,突变株UN-5纤维素酶酶活为101.48 U/mL,比原始菌株的酶活提高了205.8%。经10代传代,纤维素酶酶活仍有100.5 U/mL,说明该突变株产纤维素酶能力强且遗传性状稳定。     

氯化锂诱变赤灵芝原生质体选育高产三萜类菌株

采用化学诱变剂氯化锂诱变赤灵芝原生质体,对高产三萜类菌株进行筛选。结果表明:经0.3%氯化锂诱变后,原生质体致死率为72.8%,胞内、胞外三萜类产量达到最高,分别为55.33mg/g和14.88×10-2mg/mL,比原菌株分别提高了461.72%和136.57%。第2代、第3代诱变菌株比原菌株胞内三萜类产量分别提高了483.05%和496.04%,胞外三萜类产量分别提高了158.66%和171.38%,诱变菌株遗传稳定性良好。     

紫外诱变筛选高产可溶性葡聚糖PS202菌株的研究

采用紫外诱变的方法筛选可溶性葡聚糖产生菌,最大正变率可达19%。所得菌株遗传稳定。并采用红外分析方法对所得多糖进行一级结构分析,确定了该种多糖的组成为β糖苷键连接,含有coo- 的一类酸性细菌胞外多糖。     

复合诱变选育透明质酸高产菌株

以马疫链球菌AF-0为出发菌株,用LiCl结合紫外线及硫酸二乙酯(DES)进行复合诱变,涂布筛选培养基,从中筛选出溶血素和透明质酸降解酶的双缺陷型突变菌株,经摇瓶发酵考察得到一株产量较高的菌株C4,并经多次传代,其遗传性基本稳定,但随传代次数增多,HA产量有下降趋势;其透明质酸产量达3.32g/L,分子量达1.45×106u,相对于原始出发菌株,产量及分子量分别提高了78%和40%.     

原生质体紫外诱变脂肪酶高产菌株

以粗壮假丝酵母CJ107为出发菌株,对其进行原生质体紫外诱变选育。筛选得到10株脂肪酶活力比出发菌株高的突变株,其中菌株CJ-09的酶活达35.78U/mL,比CJ107提高了4.58倍。突变株CJ-09经10次传代,其脂肪酶酶活性保持稳定,为今后进一步研究不同的育种方法、进一步提高脂肪酶的产量打下基础。      

紫外-LiC1复合诱变选育高产糖化酶菌株

对糖化酵母As2.1548的紫外-LiC1复合诱变条件进行研究.在紫外照射时间90 s、LiC1用量0.5%时,其正突变率达到21.8%.成功选育出一株遗传性能稳定的高产糖化酶菌株A-U-90-8,其产糖化酶活力为324 U/g,比出发菌株提高了48.6%.     

原生质体紫外诱变选育木聚糖酶高产菌株

采用紫外诱变选育木聚糖酶高产菌株,通过对出发菌株Thermomyces lanuginosus DSM10635原生质体形成条件及诱变条件的研究,探索出了其原生质体形成的最适条件:酶系及酶解浓度为0.010g/mL纤维素酶+0.010g/mL蜗牛酶(体积比1:1混合),菌龄58h,酶解时间2.5h,酶解温度30℃~34℃,稳渗剂为0.6mol/L的甘露醇;紫外诱变的最佳条件:距离15W紫外灯30cm处,照射时间5min,通过初筛和复筛,最终选育出3株遗传性能稳定的木聚糖酶高产诱变株,木聚糖酶的酶活分别提高了26.5%、37.78%、28.2%。     

10-HDA微生物菌株的选育

本论文对从鲜王浆、蜂巢、蜂尸中筛选得到3株产10-HDA菌株进行了产酸性能测定.利用梯度稀释和平板涂布法在培养基上30℃培养60h,.挑单菌落30℃、160r/min摇床培养用64h,提取,HPLC和GC-MS法确定发酵液中10-HDA,结果表示QYF005产10-HAD,含量能达0.25%.     

发酵液中提取10-HDA的研究

10-HDA为10-羟基-2-癸烯酸（10-Hydroxy-2-Decenoic酸）,是蜂王浆中的特殊活性物质,抗菌、灭菌、强壮肌体和具有强烈抑制移植性AKR白血病、TA3乳腺癌及多种腹水型艾利虚癌等癌细胞生长的作用。蜂王浆中10-HDA的提取方法有乙醚萃取法、乙醇提取法、溶液沉淀结晶法、醇中沉淀结晶法及从发酵液中提取法等。不同浓度、不同体积的乙醇对产率及质量有影响;不同体积的反萃取剂水对产率也有影响;不同温度对结晶有影响。     

超高效液相色谱—串联质谱法测定蜂蜜中10-羟基-2-癸烯酸

目的：为蜂蜜的真假鉴别提供一种内源性成分分析方法。方法：采用超高效液相色谱—串联质谱（UHPLC-MS/MS）检测方法,样品用甲醇—水溶液提取,经PLS固相萃取柱净化,用Agilent ZORBAX SB C₁₈色谱柱（50 mm×2.1 mm,1.8 μm） 分离,以甲醇—5 mmol/L乙酸铵溶液为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾负离子扫描,多反应监测模式检测,外标法定量。结果：10-羟基-2-癸烯酸在质量浓度为0.05~0.80 μg/mL内呈良好的线性关系,相关系数为0.995;方法检出限为 0.03 mg/kg,定量限为 0.10 mg/kg。在0.10,0.20,1.00 mg/kg添加浓度下,10-羟基-2-癸烯酸平均回收率为96.9%~108.3%,相对标准偏差为4.5%~10.7%;日内精密度和日间精密度分别为5.9%~9.2%和3.5%~14.3%。结论：该方法适用于蜂蜜中10-羟基-2-癸烯酸的检测,实际样品测定结果表明10-羟基-2-癸烯酸作为内源性成分在蜂蜜中是普遍存在的。     

Dose-dependent immunomodulatory effects of 10-hydroxy-2-decenoic acid on human monocyte-derived dendritic cells

The effect of 10-hydroxy-2-decenoic acid (10-HDA), the unique component of royal jelly, on maturation and functions of human monocyte-derived dendritic cells (MoDCs) in culture was investigated. It has been shown that 10-HDA, at concentrations higher than 500 μM, induces apoptosis of MoDCs. A lower dose (50 μM) stimulated T helper (Th)1 and down-regulated Th2 immune responses, as judged by the levels of interferon-gamma (IFN-γ) and interleukin (IL)-4, respectively, in supernatants of 10-HDA-treated MoDCs cultivated with allogeneic CD4⁺T cells. In contrast, a higher dose of 10-HDA (500 μM), although non-cytotoxic, inhibited maturation of lipopolysaccharide (LPS)-stimulated MoDCs. Such treated MoDCs produced lower levels of IL-12, IL-18 and tumour necrosis factor-alpha (TNF-α) and down-regulated both Th1 and Th2 immune responses. In conclusion, our results suggest that 10-HDA exerts different activity on human MoDCs, depending on applied concentrations, which is important when considering its therapeutic immunomodulatory property.     

生产蜂王酸(10-HDA)菌株的筛选与评价

从新鲜的蜂王浆、蜂巢以及其他可能含有脂肪酸的物质中筛选出3株菌株——QYF005、QYF017、QYF024,依据它们产蜂王酸的重现率,确定QYF005作为进一步研究的对象.通过稀释涂布平板的方法,将菌株在30℃培养60h后,选择平板上的单菌落,在160r/min摇床中30℃培养64h,提取产品,用HPLC和GC-MS方法检测该菌株是否在发酵过程中产生蜂王酸.检测结果显示菌株QYF005能够产生蜂王酸,产量达到25mg/L.     

10-HDA对体外培养大鼠小脑细胞增殖的影响

目的:探讨不同浓度的10-HDA对体外培养大鼠小脑神经细胞的增殖和存活的影响。方法:将不同浓度的10-HDA加到原代培养的新生大鼠小脑神经细胞中,使其终浓度分别为0.1μmol/L、1.0μmol/L、10μmol/L、通过BrdU染色,尼氏染色,MTT的方法来检测10-HDA对体外培养大鼠小脑神经细胞增殖和存活的影响。结果:不同浓度的10-HDA均能促进小脑细胞的增殖和存活,并且有一定的浓度依赖关系。中浓度组(10-HDA终浓度为1.0μmol/L)的效果最为显著,与对照组相比有显著性差异(p<0.01)。结论:10-HDA有助于小脑神经细胞的增殖和存活。     

Biosynthesis of 1-Octen-3-ol and 10-Oxo-trans -8-decenoic Acid Using a Crude Homogenate of Agaricus bisporus: Reaction Scale Up

ABSTRACT: The enzymatic reaction that produces 1 -octen-3-ol and 10-oxo-trans-8-decenoic acid was successfully scaled up from a 1 -L to a 10-L bioreactor using a crude mushroom homogenate of Agaricus bisporus . For this non-Newtonian reaction broth, the agitation rate was considered the most important controlling factor for the scale up. An agitation rate of 600 rpm, for an aeration rate of 0.44 m³/m³/h, was found to be the minimum to maintain the yield constant for the 1-L reactor. Subsequently, the agitation rate for the 10-L reactor was determined using 2 different approaches: a constant power per volume of liquid and a constant volumetric mass transfer coefficient (k_La). The constant power per volume of liquid approach predicted an agitation rate of 364 rpm that resulted in being too low to maintain the same yield obtained with the 1-Lreactor. Measurement of the kLa for the 10-Lreactor, at 364 rpm and an aeration of 0.44 m³/m³/h, produced a value of 11.7/h, thus confirming that the reaction in the larger reactor was oxygen-deprived. Therefore, the use of constant volumetric mass transfer coefficient (kLa) strategy was used instead. k_La was experimentally determined at different agitation rates for the 10-L reactor. It was found that 750 rpm produced a k_La of 40.2/h. Confirmatory reactions were run in both reactors with the same batch of mushrooms, and the results were equivalent, thus indicating that was a good criterion for scaling up this process.     

沪酿3.042米曲霉紫外诱变及高活力蛋白酶菌株选育

采用沪酿3．042米曲霉的孢子为对象，对其孢子进行紫外诱变，利用酪蛋白平板对2261株再生株进行初筛，得到34株蛋白酶活力提高的菌株，复筛得到一株蛋白酶活力高且遗传稳定的突变株LY06，37℃培养44h产酶活力由313U／g曲料高到556U／g曲料，为原菌株的1．78倍，传代培养15次，蛋白酶活力基本保持稳定，没有明显的下降。     

用于羊毛细化的酸性蛋白酶产生菌的选育

利用紫外线和亚硝酸对黑曲霉进行联合诱变，使用自制的培养基筛选出7株对羊毛细化具有效果的菌株，又通过摇瓶复筛出1株对羊毛细化具有明显效果的菌株。同时设计了1种以羊毛作为底物的酶活力的测定方法，用这种测定方法，筛选出的菌株的最高产酶活力可以达到620μg／ml。     

紫外结合亚硝酸诱变选育中性蛋白酶高产菌株

为提高一株深海来源微小杆菌属细菌Exiguobacterium sp.SWJS2产中性蛋白酶的酶活,本文先后采用紫外线和亚硝酸对其进行诱变处理。紫外诱变条件为8W紫外灯在20cm处直接照射50s;三轮诱变后得突变株UV-48,其酶活较原始菌株提升21.32%。再以UV-48为出发菌株进行亚硝酸诱变,条件为0.03mol/L亚硝酸作用8min;三轮诱变后得突变株HN-34,其酶活为1109U/m L,较突变株UV-48提升13.97%,较原始菌株提升38.28%。HN-34传代5次相对酶活均在94%以上,遗传性状稳定。