纳豆糖蛋白的分离纯化、结构表征及其免疫活性研究

为更充分了解纳豆中的成分对脾细胞增殖能力的影响,本实验通过DEAE-52纤维素离子交换柱层析以及Sephadex G-100凝胶柱层析,从纳豆糖蛋白粗提物中获得两种较纯的纳豆糖蛋白：NPPC-1-b和NPPC-2-a。由高效凝胶渗透色谱得到它们的分子质量分别为26.93、357.60 kD。对这两种糖蛋白进行进一步的红外光谱扫描、紫外光谱扫描、单糖组成分析以及氨基酸组成分析显示,NPPC-1-b中含有的是O-糖肽键,而NPPC-2-a中存在的是N-糖肽键。NPPC-1-b主要由甘露糖、鼠李糖、阿拉伯糖组成,且其含量比例分别为67.45%、25.67%和2.44%。NPPC-2-a主要由葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖、木糖以及半乳糖组成,其含量比例分别为36.64%、21.71%、10.35%、9.00%和5.17%。氨基酸自动分析结果显示,两种糖蛋白兼含有人体所需的17 种氨基酸。NPPC-1-b主要由谷氨酸、脯氨酸、赖氨酸和精氨酸组成,其含量分别为0.971%、0.791%、0.708%和0.603%;NPPC-2-a主要由谷氨酸、脯氨酸以及天冬氨酸组成,其含量分别为0.903%、0.689%和0.504%。此外,体外免疫活性探讨发现,100～200 μg/mL的NPPC-1-b以及12.5～200 μg/mL的NPPC-2-a可显著增强脾细胞增殖能力（P＜0.05）,其中以100 μg/mL的NPPC-2-a作用效果最佳。在细胞因子表达方面, NPPC-1-b和NPPC-2-a可显著促进细胞因子白细胞介素-2（interleukin-2,IL-2）以及干扰素-γ（interferon-γ,IFN-γ）的表达,其中50 μg/mL的NPPC-2-a分泌IL-2最多,200 μg/mL的NPPC-2-a表达IFN-γ的量最高。以上研究结果表明NPPC-1-b和NPPC-2-a具有一定的免疫调节作用。     

鱿鱼内脏糖蛋白提取工艺及其免疫活性初步研究

本文分析了鱿鱼内脏的一般营养成分;探索了NaCl溶液提取鱿鱼内脏糖蛋白的工艺流程及工艺条件;并初步探讨了鱿鱼内脏糖蛋白对小鼠免疫功能的影响.结果表明:鱿鱼内脏中含有较高的蛋白质;提取的最佳工艺条件是:料液比为1:6、浸提时间为60 min、NaCl浓度为3%、浸提温度为80 ℃;该工艺所提取得糖蛋白具有一定的免疫活性.     

海蜇头糖蛋白分离纯化及免疫活性研究

以海蜇头为原料,通过乙醇分级沉淀、柱层析等分离纯化方法,获得3种组分均一的糖蛋白JGP-Ⅱ、JGP-Ⅲ、JGP-Ⅳ。检测3种糖蛋白对小鼠脾淋巴细胞增殖作用和转化能力的影响,研究其免疫活性。结果表明:3种糖蛋白对小鼠脾淋巴细胞均有增殖作用;对脾淋巴细胞转化能力具有促进作用。     

河蚬免疫活性糖蛋白分离及结构初步分析

采用DEAE-52纤维素柱层析,SephadexG-75葡聚糖凝胶层析和RP-HPLC柱层析手段分离纯化,从河蚬中分离纯化得到一种酸性糖蛋白CFP。经RP-HPLC和SDS-PAGE测定,CFP纯度为94.74%,其相对分子量为19030D。经苯酚-硫酸法测定,CFP的含糖量为5.18%,蛋白质含量为93.22%。碱性β-消除反应表明,河蚬糖蛋白中存在O-糖肽键。经红外光谱分析,CFP具有多糖的特征吸收,含有吡喃糖β-型糖苷键。     

甘薯糖蛋白化学结构及其生物学活性

甘薯糖蛋白是一种独特粘蛋白,是甘薯重要生理活性物质,具有重要生理作用和药用价值。该文综述甘薯糖蛋白化学组成及其生物学功效,并介绍有关研究热点。     

滁菊多糖结构特性及其免疫活性研究

目的 分离纯化滁菊多糖(Chuzhou chrysanthemum polysaccharides, CCPS),对其进行结构解析,并研究其免疫活性。方法 以滁菊为原料,热水浸提,乙醇沉淀得到CCPS;通过快流速二乙氨基乙基-琼脂糖凝胶(diethylaminoethyl-sepharose fast flow, DEAE-FF)和葡聚糖凝胶G-100 (Sephadex G-100)层析柱分离纯化CCPS,得到中性多糖CCPS-1-1。用高效液相色谱法、紫外和红外光谱法、刚果红实验等进行CCPS-1-1结构解析,建立小鼠单核巨噬细胞(mousemononuclearmacrophagescells,RAW264.7)的免疫模型探究其免疫刺激活性。结果 CCPS-1-1主要由鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、半乳糖醛酸组成,具有三股螺旋结构。体外免疫活性实验表明,CCPS-1-1可以促进RAW264.7细胞的增殖和吞噬作用,显著诱导RAW264.7细胞中一氧化氮(nitricoxide,NO)的分泌及细胞因子包括肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)、白细胞...     

黑豆糖蛋白的结构分析及抗氧化和免疫活性

本实验从黑豆中分离得到两种糖蛋白，并对其结构组成、抗氧化活性和免疫活性进行研究，为糖蛋白的高效开发利用提供理论依据。采用碱提醇沉法提取黑豆糖蛋白粗品，命名为HDJ，通过DEAE-52纤维素柱层析和Sephadex G-100柱层析分离纯化获得两个均一组分，分别命名为HDJS2和HDJS5-2。利用物理化学方法和光谱法对其化学组成及结构进行分析，通过测定总还原力、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl，DPPH）清除率及总抗氧化能力研究两种糖蛋白的抗氧化活性，采用噻唑蓝比色法评价两种糖蛋白的免疫活性。结果表明：HDJS2（3.20×104 Da）和HDJS5-2（3.89×104 Da）主要是由中性糖和蛋白质组成的糖蛋白，其糖肽键类型均为O-型糖肽键。HDJS2主要由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、岩藻糖和96.1%氨基酸组成；HDJS5-2主要由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和71.3%氨基酸组成。抗氧化分析结果表明，HDJS2和HDJS5-2的还原能力、DPPH清除能力和抗氧化能力呈剂量依赖性关系。此外，HDJS2和HDJS5-2均能够促进脾淋巴细胞增殖。结论：HDJS2和HDJS5-2具有潜在的抗氧化作用和免疫调节作用。     

黑木耳多糖的结构组成及其免疫活性研究

目的:对高温蒸汽浸提法提取得到的黑木耳多糖进行结构解析,并探究其在免疫功能方面的活性。方法:通过气相色谱(GC)、红外光谱(FT-IR)、刚果红实验等对其结构进行分析,建立RAW264.7巨噬细胞的免疫模型以探究其免疫刺激活性。结果:黑木耳多糖主要由鼠李糖、甘露糖和葡萄糖组成,其具有和免疫活性相关的β-构型糖苷键和三股螺旋构象。黑木耳多糖可以促进巨噬细胞的增殖,增强巨噬细胞的吞噬作用,显著诱导RAW264.7细胞中一氧化氮的分泌及细胞因子IL-6、TNF-α的释放。结论:黑木耳多糖具有与免疫相关的多种结构,对巨噬细胞具有强烈的刺激作用,在用作潜在的免疫刺激剂方面具有广阔的前景,黑木耳也可作为调节人类免疫力的功能性食品发挥巨大的应用价值。     

海蜇Ⅰ型胶原蛋白的提取及结构特性研究

以海蜇为原料，采用盐酸-胃蛋白酶法提取胶原蛋白，并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-Polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）、紫外光谱（UV-visible spectroscopy，UV）、氨基酸分析、红外光谱（Fourier-transform infrared spectroscopy，FTIR）、圆二色谱（Circular dichroism，CD）以及扫描电镜（Scanning electron microscope，SEM）对其结构特性进行了系统全面的研究。结果显示，海蜇胶原蛋白在135 kDa左右有一条α-链，在245 kDa以上有一条β-链和γ-链，紫外吸收峰在233 nm处，符合I型胶原蛋白的特征，其亚基组成可能为[α₁(I)]₃。海蜇胶原蛋白中含量最高的氨基酸为甘氨酸，占氨基酸总量的25.99%，且含有15.94%的亚氨基酸。红外光谱和圆二色谱均表明海蜇胶原蛋白分子排布紧凑，具有主要由氢键构成的完整三螺旋结构。扫描电镜结果显示海蜇胶原蛋白具有多层聚集、以纤维为主的无规则网状结构。     

糖蛋白结构鉴定研究现状

糖蛋白以各种形式广泛存在于动植物和某些微生物体内,是生物体中重要的生理活性物质,为了能更好地利用糖蛋白就需要对糖蛋白的结构进行鉴定,主要集中在糖蛋白的分离提纯、糖肽键的分析、糖基化位点的分析、糖链的分析等,多采用色谱、质谱以及核磁共振等技术进行鉴定。     

松口蘑菌丝体糖蛋白MP的性质及其结构

通过聚丙烯酰胺凝胶电泳、红外、紫外扫描、气相色谱、氨基酸组成、β 消去反应等方法研究松口蘑菌丝体糖蛋白MP的结构性质,结果表明,该糖蛋白的相对分子质量为57000,红外扫描有典型的多糖吸收峰,糖苷键为α型;单糖组成为葡萄糖和木糖,摩尔比(r)为34∶1,紫外扫描有蛋白质吸收峰,蛋白质量分数为75.5%,多糖为24.5%,多糖与蛋白质为O 糖肽键连接.     

小麦低聚肽的结构特征及其体外抗氧化活性

通过扫描电镜、基础理化成分、相对分子质量分布、氨基酸组成、紫外光谱和圆二色光谱对小麦低聚肽结构特征进行分析,从羟基自由基清除能力、DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力和氧自由基吸收能力（ORAC）4个方面对其体外抗氧化活性进行考察。结果表明,小麦低聚肽具有明显的球体颗粒状,表面有不规则褶皱和气孔,蛋白质和肽含量分别为95.86%、83.74%（均以干基计）,分子质量1000 u以下的组分占92.22%,必需氨基酸和疏水性氨基酸含量分别为20.46%、33.38%,在270 nm波长处有最大吸收峰。二级结构以多种构象并存,α-螺旋、平行式β-折叠、反平行式β-折叠、β-转角和无规卷曲含量分别为5.83%、3.14%、37.57%、20.32%和33.14%。小麦低聚肽对羟基自由基和DPPH自由基的半抑制浓度（IC50值）分别为9.62、1.54 mg/mL,ABTS自由基清除能力为3.53 mmol Trolox/g,ORAC值为1035.52 μmol Trolox/g。因此,小麦低聚肽具有较强的抗氧化能力,为其在抗氧化功能食品的开发利用提供一定的理论依据。     

河蚬糖蛋白体外免疫功能研究

目的:研究河蚬糖蛋白对小鼠体外免疫功能的影响。方法:无菌分离小鼠脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞,与不同质量浓度(5、25、125、625μg/mL)的河蚬粗糖蛋白和高纯度糖蛋白CFP共同培养,采用MTT法测定其对淋巴细胞增殖和腹腔巨噬吞噬能力的影响。结果:在无有丝分裂原诱导下,125μg/mL的粗糖蛋白和4个浓度的CFP都有促进脾淋巴细胞的作用。在有丝分裂原刺激下,粗糖蛋白和CFP的刺激指数都比未加有丝分裂原时增大。125μg/mL粗糖蛋白和4个浓度的CFP都有提高巨噬细胞的吞噬能力,且2种河蚬糖蛋白都表现出一定的剂量效应关系。结论:河蚬粗糖蛋白和CFP均有免疫增强活性,其中CFP的活性较强。     

黄精多糖肽的单糖组成和抗氧化活性

利用水提醇沉法提取黄精多糖肽,三氯乙酸法、透析法和阴离子交换柱层析法分离纯化黄精多糖肽;GC-MS分析了黄精多糖肽的单糖组成;Fenton法、邻苯三酚自氧化法和磷钼络合物法分别研究了黄精多糖肽对羟基自由基、超氧阴离子清除和总抗氧化能力。结果表明:黄精中多糖肽的含量为0.34%,多糖肽中多糖和蛋白质的比率为5.4∶1;黄精多糖肽的单糖组成主要是鼠李糖、阿拉伯糖、D-木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖等,其相对百分含量分别为:2.12%、1.81%、2.51%、65.4%、14.3%、13.8%。黄精多糖肽在一定范围内随着浓度的增高对羟基自由基的清除率、对超氧阴离子的清除率逐渐增高,总抗氧化活性也随黄精多糖肽浓度的增高而增高;其对羟基自由基和超氧阴离子的清除率高于Vc,但总抗氧化活性远低于VC的总抗氧化活性。     

茶多糖的结构特征与降血糖活性

探讨茶多糖的结构特征与抗糖尿病机制,为多糖的应用与糖尿病天然药物的开发提供理论依据。从粗老茶叶中分离茶多糖并纯化,分析了其单糖组成、分子质量、紫外与红外吸收特征。以四氧嘧啶诱导小鼠非肥胖型糖尿病,茶多糖以100 mg/（kg·d）剂量灌胃治疗糖尿病小鼠42 d,以格列本脲为阳性药物对照,测定血清和肝脏中的空腹血糖浓度、血清胰岛素含量和总抗氧化状态,苏木精-伊红染色法观察胰岛、肝脏组织变化。结果表明,从粗老茶叶中分离的茶多糖分子质量为119 600 Da,由D-葡萄糖醛酸、鼠李糖、D-岩藻糖、L-阿拉伯糖、D-木糖、D-甘露糖、D-葡萄糖和D-半乳糖8 种单糖组成,其物质的量比为32.61∶1.00∶5.46∶8.13∶3.84∶2.37∶15.36∶7.52,紫外与红外光谱扫描结果推测其可能为一种不含蛋白、核酸的吡喃型酸性杂多糖。茶多糖药物组小鼠肝糖原含量显著升高,血糖浓度从18.98 mmol/L降至正常水平,其血浆和胰脏中胰岛素含量与正常组无显著差异（P＞0.05）,血清与肝脏中超氧化物歧化酶活力显著高于四氧嘧啶模型组（P＜0.05）,而肝脏中一氧化氮合酶活力和丙二醛含量接近阴性组水平,一氧化氮含量显著低于模型组（P＜0.05）,其作用效果与格列本脲相近。病理组织形态学结果显示,茶多糖药物组小鼠胰岛β细胞得到修复,肝脏组织病理形态恢复正常。本研究表明茶多糖通过改善胰岛素分泌、胰岛β细胞功能和抗氧化状态发挥抗糖尿病作用。     

甘薯糖蛋白的体外抗氧化作用研究

经水溶提取、乙醇沉淀、凝胶过滤层析，从广薯98中提取甘薯糖蛋白，并研究了甘薯糖蛋白对超氧阴离子自由基、羟基自由基的清除作用，以及对肝微粒体脂质过氧化产物丙二醛的抑制作用和对H2O3引起红细胞溶血的抑制作用。结果表明，甘薯糖蛋白能有效地清除超氧阴离子自由基和羟基自由基，并能明显地抑制肝微粒体脂质过氧化产物丙二醛的生成，但不能抑制H2O2引起的红细胞溶血。     

茶多糖结构特征研究进展

茶多糖是一类复合型多糖，结构十分复杂，本文介绍了影响茶多糖含量的因素以及茶多糖结构的解析方法和特征。茶多糖含量在茶树品种、成熟度、茶树器官、茶叶加工方法和茶树生长环境等多种因素影响下存在差异；其结构组成单元包括8 种中性单糖、2 种糖醛酸、1.87%～38.00%蛋白质、18 种氨基酸和少量无机元素等，分子质量为2.56～3 900.00 kDa；糖链由单糖通过(1→2)、(1→3)、(1→4)、(1→2,4)等多种方式通过O原子连接而成，且存在分支；有些茶多糖分子存在三股螺旋结构；茶多糖分子会缠绕结合在一起形成形状各异、大小不一的聚集体；结构解析方法包括色谱、光谱、核磁共振、原子力显微镜、扫描电子显微镜等。此外，本文还简要归纳了茶多糖的构效关系，以期为后续茶多糖的结构特征和生物活性研究提供参考。