环状RNA的研究进展

环状RNA(circular RNA,circ RNA)是广泛存在于各种生物体中一类区别于传统线性RNA的新型形式,是特殊的内源性RNA分子,并具有调控基因表达的作用。circ RNA首次在RNA病毒中被发现。近年来,研究人员在人、鼠、线虫、植物、古生菌生物体内发现存在大量circ RNA。在真核生物体中,大部分circ RNA是由外显子构成,富集在胞浆中,并具有牢固的环状结构,大量存在于真核转录组中,具有良好的物种保守性以及组织特异性,不易被核酸酶裂解。研究发现,circ RNA可作为一类新型的竞争性内源RNA分子(competing endogenous RNA,ce RNA)调节物,发挥RNA海绵功能,竞争性抑制micro RNA(mi RNA)的表达,阻断mi RNA对其靶基因表达的抑制作用。目前发现,circ RNA在肿瘤、阿兹海默症等疾病的发生上起重要作用,其作为新型临床诊断标记物具有明显的优势。本文就circ RNA的研究进展作一综述。     

环状RNA作为微小RNA海绵在肿瘤进展中的作用

环状RNA(circular RNA,circRNA)是一类共价封闭的内源性非编码RNA,无5'端帽和3'端多聚A尾,具有组织特异性,广泛存在于人类细胞中.circRNA于包括肿瘤在内的多种疾病相关组织及细胞中存在差异表达,提示circRNA对某些疾病具有调节作用,如circRNA可作为微小RNA(microRNA,m...     

RNA干扰抗乙肝病毒的研究进展

乙型肝炎病毒导致的慢性感染、肝炎、肝硬化和肝癌已经成为威胁全球健康的主要问题之一。至今,还没有找到能够彻底治愈慢性乙肝的特效药。RNA干扰(RNAi)研究快速发展,已被广泛用于基因功能研究和疾病治疗。阐述了小干扰RNA(siRNA)和微小RNA(miRNA)抗HBV的研究进展。     

RNA聚合酶Ⅱ转录的ALU对PKR磷酸化的调节作用

目的研究ALU自身的RNA聚合酶Ⅲ启动子对RNA聚合酶Ⅱ转录的影响,探讨RNA聚合酶Ⅱ转录的ALU对PKR磷酸化的调节作用。方法将ALU全基因序列插入pcDNA3.1(-)载体的CMV启动子(一个RNA聚合酶Ⅱ启动子)的下游,构建重组质粒pcDNA3.1-ALU;转染HEK293细胞,提取细胞总RNA,RT-PCR筛选稳定表达ALU的细胞;用干扰素处理稳定表达ALU序列的细胞,Western blot法检测PKR的磷酸化水平。结果ALU全基因序列插入pcDNA3.1载体的CMV启动子直接下游,能够被RNA聚合酶Ⅱ有效转录;在稳定表达ALU的HEK293细胞中,加干扰素与未加干扰素组PKR的磷酸化水平均明显高于相应的HEK293细胞对照组。结论ALU自身的RNA聚合酶Ⅲ启动子对RNA聚合酶Ⅱ转录无明显影响,但与RNA聚合酶Ⅲ启动下转录的ALU不同,RNA聚合酶Ⅱ转录的ALU失去了对干扰素的拮抗作用,反而可以通过形成双链RNA的方式激活PKR的活性。     

肝细胞RNA在小鼠体内的抗突变作用

以 C_(57)BL/6J 小鼠为模型,皮下注射人肝或牛肝 RNA,4小时以后腹腔注射 MMC,,同时皮下埋植 5-溴尿嘧啶,再经24小时后取骨髓细胞进行姐妹染色单体交换及染色体畸变数检测;同时取 C_(57)BL/6J 雄性小鼠皮下注射人肝 RNA,4小时后腹腔注射 MMS,17天后,检测非程序 DNA 合成反应。结果表明肝 RNA 对 MMC 诱发的小鼠骨髓细胞姐妹染色单体交换和染色体畸变数,对 MMS 诱发非程序 DNA合成反应均具有明显的抑制作用。以上结果提示人肝及牛肝 RNA 对 MMC 或 MMS 所诱发的基因突变具有防护作用。     

肝癌高表达长链非编码RNA的研究进展

非编码RNA即一类不编码蛋白质的核苷酸分子的总称。肝癌高表达长链非编码RNA(long non-coding RNA highly up-regulated in liver cancer,lnc RNA HULC)为lnc RNA的一种,其水平与肝癌的发生、发展、治疗及预后有关。近年来研究发现,lnc RNA HULC与其他疾病也有重要的联系。基于此,本文对lnc RNA HULC的相关生物学功能及其与疾病的关系作一综述。     

DEAD-box RNA解旋酶3在肿瘤中作用机制的研究进展

DEAD-box RNA解旋酶(DEAD-box helicase,DDX)在RNA代谢过程中发挥多种功能,对转录、剪切、mRNA转出、翻译、核糖体合成及miRNA的调控均有一定影响,其对RNA代谢的影响可引起一系列疾病的产生。DEAD-box RNA解旋酶3(DDX3)是DDX家族重要的成员,在细胞周期阻滞、细胞增殖和凋亡中起重要作用。DDX3可在多种肿瘤组织中发生异常表达,影响肿瘤患者的生存和预后。本文就DDX3在肿瘤,如肺癌、结直肠癌、乳腺癌及肝癌中作用机制的研究进展作一综述。     

RNA药物研发进程

一、RNA药物市场分析目前，诺华、默克、OPKO健康、Alnylam制药等大型制药公司和生物科技企业正一掷千金，开发另一个生物技术领域的“潜力股”——RNA药物。从研究和开发传统生物制品的角度来看，大多数大型制药企业还不能和安进、基因泰克和BiogenIdec公司竞争。但考虑到RNA疗法具有”重磅炸弹”药物的潜力，过去的两年间，制药企业和生物企业之间围绕RNA干扰、反义RNA和适体等产品而产生了许多战略和金融上的交易。     

浓盐法提取啤酒酵母中RNA的研究

对影响浓盐法提取啤酒酵母中RNA的条件进行了研究,确定其较优生产条件为:温度95 ℃,加盐量10 %,提取时间120 min,调等电点pH4.2沉淀蛋白质后4℃静置8 h.在此条件下,从45 g湿酵母(相当于10 g干酵母)中可提取0.5308 g RNA,蛋白质含量为0.0615%,A260/A280为1.988.     

影响浓盐法提取啤酒酵母RNA的工艺参数研究

以啤酒酵母为原料,通过浓盐法进行RNA提取的研究.考察了影响RNA提取率的因素,如提取温度、提取时间、加盐量及酵母质量浓度,获得了最大提取率的条件:提取温度95 ℃,提取时间为60 min,氯化钠的加入量为10%,酵母质量浓度为10%.正交实验表明加盐量为反应过程的显著因素.在上述条件下,90 g湿酵母(相当于20 g干酵母)能够提取1 g RNA,A260/A280是1.983.对RNA粗品进行精制,得到固体的白色粉末.     

丙型肝炎病毒RNA室内质控品的制备及其临床应用评估

目的探讨自制丙型肝炎病毒(hepatitis C Virus,HCV)RNA定量检测室内质控品的可行性,并评估其临床应用价值。方法收集已发过HCV-RNA临床报告的血浆样本,分别将HCV-RNA阴性血浆(<50 IU/mL)、弱阳性血浆(102~103 IU/mL)和强阳性血浆(105~106 IU/mL)混合、离心后,获得阴性质控品(HCV-RNA-N)、弱阳性质控品(HCV-RNA-L)和强阳性质控品(HCV-RNA-H),小量分装后于-80℃冻存。确定靶值后,评价其均一性、重复性、准确性和稳定性。结果自制HCV RNA室内质控品具有良好的均一性、重复性和准确性,可在-80℃保持稳定至少12个月。结论HCV RNA室内质控品制备过程简单,样品均一,重复性好,准确性高,稳定性良好,可用于临床检测HCV-RNA。     

聚苯乙烯基质RNA固相有机合成载体的制备与性能表征

将氨甲基衍生的聚苯乙烯载体与3-氨基-1-(4,4￠-二甲氧三苯甲基)-1,2-丙二醇通过琥珀酸键连接,成功制备了一种新型的通用型RNA固相有机合成载体. 载体有效载量达61~92 mmol/g,高于传统可控孔度玻璃(CPG)载体;载体偶联效率大于95%,与CPG载体相似;RNA产物合成后处理条件温和. 反相高效液相色谱显示自制载体合成产物与CPG载体合成产物具有同一性,没有明显降解现象发生. 这种聚苯乙烯基质RNA固相有机合成载体由于其高载量、通用性及较好的合成性能等优点,具有替代传统CPG载体的潜力.     

微小RNA在恶性肿瘤中对蛋白酪氨酸激酶6调控作用的研究进展

蛋白酪氨酸激酶6(protein tyrosine kinase 6,PTK6)是一种非受体酪氨酸激酶，在各类肿瘤的发生发展中起关键作用，且在肿瘤中的作用具有双重性。微小RNA(microRNA,miRNA)是一种调节转录后基因表达的小非编码RNA。近年来，越来越多的研究表明，miRNA对PTK6的调控作用在肿瘤中起重要作用。本文对在不同癌症中miRNA对PTK6表达的影响作一综述，以期为癌症治疗提供理论依据。     

HPLC法测定酵母RNA降解的4种核苷酸

采用反相高效液相色谱 (HPL C)分离了酵母 RNA降解的 4种核苷酸。检测波长为 2 5 4 nm,流动相为2 0 mm ol· L- 1 (NH4 ) H2 PO4 。方法精密度分别为 RSDCMP=1.79% ,RSDUMP=0 .36 % ,RSDGMP=0 .79% ,RSDAMP=0 .5 7% ,测得的 4种核苷酸的回收率分别为 98.9% ,99.1% ,10 0 .8%和 99.9%。     

地高辛标记Nkx2.1基因RNA探针的制备及应用

目的制备地高辛(digoxigenin,DIG)标记的Nkx2. 1基因RNA探针,用于小鼠胚胎早期神经管发育关键时期Nkx2. 1基因表达的检测。方法巢式PCR法扩增Nkx2. 1基因,将其克隆至pGEM-T载体;以其为模板,通过Nkx2. 1特异性引物,PCR扩增RNA探针转录模板;采用T7 RNA聚合酶,制备DIG标记的正义、反义Nkx2. 1 RNA原位杂交探针。经全胚胎原位杂交(whole-mount in situ hybridization,WM-ISH)技术分析胚胎8. 5、9. 5、10. 5 d小鼠体内Nkx2. 1基因的表达情况。结果制备的探针浓度为1 521. 986 ng/mL,纯度A260/280=2. 39。Nkx2. 1基因反义探针能高效检测到Nkx2. 1基因在胚胎8. 5、9. 5及10. 5 d小鼠神经系统中表达,正义探针未能检测到表达信号。结论成功制备了特异高效的DIG标记的Nkx2. 1基因RNA原位杂交探针,为进一步研究Nkx2. 1基因在小鼠胚胎组织中的表达,探索其在神经管发育中的作用机制奠定了基础。     

不同微小RNA与胰岛素分泌及糖尿病肾病相关性的研究进展

糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是2型糖尿病的并发症之一.微小RNA(microRNAs,miRNAs)影响基因表达的调控,导致胰岛素分泌紊乱,在DN的发病过程中发挥重要作用,可作为诊断DN的有效生物标志物.此外,miRNAs在人体体液中是稳定且可检测的,因此其对于不同疾病的早期诊断具有高度...     

盐酸阿霉素共振光散射法测定酵母RNA

pH 8.69条件下,酵母RNA的加入使盐酸阿霉素的共振光散射信号强烈增强,在322与558 nm处产生两个共振散射峰。研究表明,在322 nm波长处共振光散射强度与酵母RNA的浓度在0.02~20μg/mL范围内呈良好的线性关系,检出限为2.3 ng/mL。该方法用于样品中RNA的测定,结果令人满意,由此建立了一种选择性好、灵敏度高的RNA共振光散射分析方法。     

植物病毒RNA在片检测方法的建立研究

报道了一种检测植物病毒核糖核酸（RNA）的新方法——RNA玻片杂交法。这种方法把互补脱氧核糖核酸（cDNA）芯片技术与RNA斑点杂交技术相结合,将植物样品的总RNA直接固定在玻片上,用荧光标记的病毒特异探针与芯片杂交后分析杂交信号以确定相应的样品有无该病毒侵染。参照膜杂交的方法,我们设计了一系列实验,对芯片的制备和检测条件进行了摸索,基本建立了在玻片上杂交检测RNA病毒和类病毒的方法。     

RNA农药的研究现状和发展前景

RNA农药被誉为第三次农药革命,在植物病虫害治理方面展现出巨大潜力。近年来,植物基因工程和基因干扰（RNAi）技术在RNA农药的研发中起到了关键作用。RNA农药的研发策略主要分为4种：寄主诱导的基因沉默策略（HIGS）;病毒等微生物诱导的基因沉默策略（VIGS）;喷雾诱导的基因沉默策略（SIGS）;纳米载体递送的基因沉默策略（NDGS）。目前,RNA农药领域的研究大多集中在基础理论,而开发及应用能力相对较弱。鉴于此,本文总结了以RNAi为核心的病虫害防治技术的研究现状,介绍了基于RNAi技术防治病虫害的应用实例,阐明了叶绿体转基因技术及纳米递送平台的优势,并对未来开发低成本、安全和高效的RNAi产品做出了展望,以期为RNA农药的研究及商业化生产提供参考。