生物法拆分外消旋甲霜灵制备R-甲霜灵

从土壤和污泥样品中分离得到一株能不对称水解甲霜灵的革兰阴性菌。通过分子生物学鉴定,命名该菌株为Albibacters sp.zjut528。当底物浓度为50 g·L^-1,湿菌体（含水量81%）：底物=0.3：1（质量比）,反应28 h,产物得率为47.1%,主产物为R-甲霜灵酸,对映体过量值ee_p > 99.9%。将菌株细胞破碎得到的粗酶液分离纯化得到一个SDS-PAGE电泳纯的酯酶,分子量约为40×10³,酶的N端10个氨基酸序列为NH₂-Ala-Ala-Lys-Ala-Pro-Leu-Arg-Leu-Lys-Glu。该酶最适温度为40℃,20~40℃稳定性较好。最适pH为9.0,在pH 5.0~10.0范围内稳定。Fe²⁺、Mn²⁺、Zn²⁺对酶活有促进作用,Fe³⁺对酶活有一定的抑制作用。在含有20%的乙腈、异丙醇、丙酮、二异丙醚、环己烷、正己烷的水溶液中,酶活均比在纯水相中有明显提高。该酶反应动力学符合米氏方程,V_m为0.18 mmol·L^-1·min^-1,K_m为2.29 mmol·L^-1,K_cat为0.85 min^-1。建立了一条利用Albibacters sp.zjut528细胞作催化剂拆分甲霜灵制备R-甲霜灵的工艺路线,终产品R-甲霜灵的纯度是96.2%,ee值为99.3%。     

沙蚕消化道细菌D2胞外蛋白酶的分离纯化及其性质

目的分离纯化沙蚕消化道菌D2胞外蛋白酶,并对其性质进行分析。方法收集48 h发酵液上清,经80%饱和硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose阴离子交换层析、Superdex G-75凝胶过滤层析逐步纯化D2蛋白酶,分析其酶学性质,并用ESI-MS/MS测定其酶解后的部分氨基酸序列。结果经纯化,得到电泳纯的D2蛋白酶,纯化倍数为4.9倍,活性回收率为33%,相对分子质量约42 000,纯度大于99%;最适作用温度为60℃,最适pH为9,在pH6~11及0~60℃具有较好的稳定性,水解酪蛋白的Km值为2.44 mg/ml;Cu2+、Ca2+、Mg2+、K+等金属离子对酶活力有明显促进作用,EDTA和PMSF对酶活力有强烈抑制作用;该酶对尿素、SDS、DTT等变性剂有较好的耐受性,其两个内部肽段经质谱测序,序列分别为AHGFLPLTK和APSATG-GSALYPLEFVVGK。结论该酶为一高温碱性丝氨酸蛋白酶,具有较高的工业开发价值和较大的应用潜力。     

高强度耐有机溶剂蛋白酶的纯化及性质

分离纯化了自行筛选的耐有机溶剂的地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis YP1所产的溶剂稳定性蛋白酶. 发酵液经硫酸铵沉淀、疏水层析及强阳离子交换层析纯化,得到电泳纯的蛋白酶;分子量约为28 kDa,纯化蛋白酶的比酶活达到1.18′105 U/mg,纯化倍数为37.2,酶活回收率为20.8%. 纯化的YP1蛋白酶对50%(j)的多种亲水或疏水有机溶剂具有很高的耐受性,其中50%(j)的DMF和DMSO能显著促进YP1蛋白酶活力. YP1蛋白酶为Zn2+蛋白酶,最适反应温度为55℃,最适反应pH为10.0,pH 8.0~13.0范围内具有高活力. 以酪蛋白为底物,YP1蛋白酶的米氏常数Km为0.048 g/L.     

单环刺螠纤溶酶UFE-Ⅱ的分离纯化及其酶学性质

目的分离纯化单一组分的单环刺螠纤溶酶UFE-Ⅱ,并分析其酶学性质。方法单环刺螠体腔液经离心、超滤、离子交换层析、凝胶过滤等方法进行分离纯化,得到单一洗脱峰酶组分,经Native-PAGE、SDS-PAGE和飞行质谱分析,测定其纯度和相对分子质量;并以酪蛋白为底物,Folin-酚试剂法测定酶活力,对其酶学性质进行分析。结果分离纯化的UFE-Ⅱ具有水解纤维蛋白的活性,其水解酪蛋白的比活力达到375.6U/mg,纯化倍数为10.3倍,回收率为14.0%。UFE-Ⅱ为单一组分,纯度达99%以上,相对分子质量为24329。UFE-Ⅱ的最适反应温度约为45℃;最适反应pH值为7.0;Ca2+、Mn2+和Fe2+是该酶的强激活剂;Fe3+、Cu2+和Pb2+对该酶活力具有一定的抑制作用;SBTI和PMSF能完全抑制酶活力,表明该酶为丝氨酸蛋白酶;糜蛋白酶抑制剂可部分抑制酶活力,亮抑酶肽、抑蛋白酶肽、苯甲脒可较弱地抑制酶活力。结论从单环刺螠体内成功分离纯化出纤溶酶UFE-Ⅱ,并分析了其酶学性质,该酶具有进一步开发利用价值。     

聚合松香铜对漆树漆酶的固定化研究

以聚合松香(PR)为原料,分别与Cu2+、Ca2+、Ni2+和Mg2+等4种金属离子反应制备相应配合物,再对漆树漆酶进行固定化,得固定化酶PRCuEn、PRCaEn、PRNiEn、PRMgEn,考察了固定化酶的性能.结果表明,4种固定化酶均具有较好的重复使用性,其中PRCuEn使用5次后,相对活力为53.6%;以愈创木酚为底物时,PRCuEn的最适温度为40～45℃(较游离酶高5～10℃),其最适pH值为5.0(较游离酶最适pH值9.0明显向酸性偏移).     

新型嗜热耐碱脂肪酶的纯化表征及应用

将来源于解脂嗜热互营杆菌（Thermosyntropha lipolytica）的脂肪酶（TlLipA）基因tll1导入大肠杆菌BL21（DE3）中表达,通过热处理和镍柱亲和层析获得纯酶,并对其酶学性质进行研究。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）显示TlLipA分子量为53×10³,其最适反应温度为65℃,最适反应pH为8.0。在55~65℃范围内酶活较高且比较稳定;在pH^{7.0~11.0于室温保存1 h后,残留相对酶活仍达80%以上。1 mmol/L 金属离子Zn2+、Fe3+和试剂SDS,0.05%（质量分数）Tween 80,对酶活力具有强烈的抑制作用,残留相对酶活皆低于15%;1 mmol/L Mg2+、Mn2+对酶活力表现出轻微的激活作用。由底物专一性实验可得,该酶对辛酸对硝基苯酯（C8）和癸酸对硝基苯酯（C10）偏好明显。以棕榈酸对硝基苯酯（p-NPP）为底物,该酶动力学参数K_m值为0.23 mmol/L,V_max为33.50 mmol/(L·min),k_cat为22.83 _S-1。以重组脂肪酶为催化剂在无溶剂体系中制备生物柴油,含水率20%,酶加量200 U/g油,醇油比为4∶1的条件下,在55℃催化大豆油反应48 h,收率可达91.75%。}     

酸性蛋白酶水解小麦蛋白产物的乳化活性研究

以乳化活力指数为指标,采用单因素和正交实验研究了酸性蛋白酶对小麦蛋白水解最适条件。结果表明:三个因素对小麦蛋白粉乳化性的影响由强到弱的顺序为:反应温度>pH值>酸性蛋白酶/小麦蛋白粉质量比,最佳酶解条件为:反应温度为45℃、pH值为3.0、酸性蛋白酶/小麦蛋白粉质量比为3%,并测得在最佳条件下酶解产物的乳化活力指数为17.69 m2/g,此时水解度为7.32%。本研究可为利用小麦蛋白粉开发天然乳化剂提供参考。     

固定化漆酶对二氯酚的脱氯作用

采用活性炭吸附与海藻酸钙凝胶包埋相结合的方法使Coriolus versicolor漆酶固定化.利用固定化漆酶对2,4-二氯酚进行脱氯反应,其最适pH值为4.5、最适温度为40℃.与游离酶相比,固定化酶反应的pH值和温度范围更宽,其稳定性得到了明显改善.使用柱式固定化酶反应器处理2,4-二氯酚,在批式反应工艺条件下,当底物浓度为1 mmol•L^-1、反应3～5 h, 2,4-二氯酚的去除率可达99.5%以上（脱除的氯离子浓度达0.5 mmol•L^-1）.连续8批反应的结果表明：固定化漆酶性能稳定、催化效率高,在环境污染废水治理方面具有良好的应用前景.     

绿僵菌几丁质酶的分离纯化及性质

从自然罹病死亡的金龟子体内分离到一株金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）,它在几丁质的诱导下能产生较高活性的几丁质酶.发酵液经硫酸铵盐析、DEAE纤维素柱层析、Phenyl Sepharose^TM 6 Fast Flow疏水柱层析等方法,得到电泳纯的几丁质酶.用SDS-PAGE测得该酶相对分子质量为61.5 kD,而经质谱分析为57.14 kD.最适反应温度为55 ℃,最适反应pH值为6.0,酶的等电点pI为4.02,其N末端序列为VIGPAAPL,用硫酸-酚法测得其含糖量为56.2%.水解几丁质的K_m为14.5 μmol•L^-1.该酶在45 ℃,pH值3.0～9.5较为稳定.Zn²⁺、Ca²⁺、Ba²⁺和Mn²⁺离子对几丁质酶活性有明显的促进作用,而Hg²⁺、Co²⁺和Fe²⁺离子完全抑制几丁质酶的活性.此酶还可被EDTA所抑制,表明金属离子为其活性所必需.PMSF试剂对几丁质酶的活力影响比较大,丝氨酸可能是酶活力的必需基团.     

乙醇脱氢酶的初步分离及其酶学性质的研究

以硫酸铵为沉淀剂,采用盐析法对乙醇脱氢酶（ADH）进行了初步的分离纯化,ADH比活力从粗酶液的0.464 U·mg^-1提高到1.198 U·mg^-1,纯化倍数为2.582。研究了ADH的基本酶学性质,其最适作用pH值为7.0-10.0,pH值为8.0时酶活力达到最大,pH值为7.0时酶较为稳定;最适作用温度为37℃,温度为30-40℃时酶活力较为稳定,温度超过45℃后酶活力急剧下降。     

大麦α-葡萄糖苷酶的提取与性质研究

从大麦中提取并部分纯化了α-葡萄糖苷酶,探索了其性质及活性影响因素.结果表明:丙酮沉淀,硫酸铵盐溶盐析和透析相结合的纯化方法可有效提高酶活到10.60倍.动力学研究得酶的Km=3.77 mol/L,Vmax＝719 U/min;其pH值范围4～12,最适为6.81,酶反应温度30 ～70℃,以40℃为最佳,实验证明大麦...     

织物用去血渍复合酶的反应特性研究

研究了织物用去血渍复合酶的最适反应温度、pH、温度稳定性、pH稳定性以及酶组分间的稳定性。结果表明,织物用去血渍复合酶的有效作用温度范围为25～55℃,有效作用pH范围为7.0～11.0;织物用去血渍复合酶的稳定温度区间为T≤55℃,稳定pH区间为6≤pH≤11;复合酶中的蛋白酶在正常洗涤时间里对其他的几种酶活力影响甚微,组分之间配伍性能良好。     

核酸酶P1的纯化和酶学性质研究

桔青霉发酵液通过硫酸铵分级沉淀、凝胶层析和离子交换纤维素层析等生化分离步骤,得到的核酸酶P1比活力为711U/mg,纯化倍数1500。纯化的酶蛋白纯品经SDS 聚丙烯酰胺电泳,呈现一条单带。该酶催化反应的最适pH范围为6～8,最适温度在70℃,在60℃以下时酶活较为稳定.锌离子对此酶有明显的激活作用,而铜离子具有明显的抑制作用。     

黑曲霉负载银纳米颗粒的制备及其抗菌性能

采用非酶还原法,以黑曲霉菌原位还原银氨离子制备一种新型银纳米颗粒（AgNPs）/菌体复合抗菌材料,着重考察了反应温度与pH值对还原过程和所得复合材料的抗菌性能及稳定性的影响。结果表明,在温度为30℃、60℃和pH 9.5、11.5条件下,能够合成出粒径为6.9～8.2 nm的近球形AgNPs。该AgNPs均匀地分布在菌体表面上,对E.coli显示出高的抗菌性能：最小抑菌浓度(MIC)为217～434 mg·L^-1（以菌粉总质量表示）或8～20 mg Ag·L^-1（以银含量表示）。提高反应温度有利于提高菌体银负载量,但AgNPs粒径增大,抗菌性能有所下降;提高反应pH值有利于提高还原速率,而对抗菌性能影响不显著。复合材料中AgNPs与菌体结合牢固,单位质量复合材料释出的Ag⁺含量为1.7～6.8 mg·g^-1,提高反应温度和pH值后Ag⁺的释出均减少。     

弱碱性大孔树脂固定化氨基酰化酶的性能研究

对以弱碱性大孔阴离子树脂二乙胺基乙基羟乙酯(DEAE-E/H)为载体制备得到的固定化氨基酰化酶的性质进行系统研究。结果表明,DEAE-E/H固定化氨基酰化酶具有很好的热稳定性。与自由酶相比,固定化酶的最适反应温度分别由47℃变为57℃,pH值由7.0变为6.5,并且最适反应条件范围明显变宽。Co2+对固定化酶活力具有较强的激活作用,其最佳浓度为1×10-3mol/L。分别对其在间歇和连续操作过程巾的反应进行研究,结果表明,固定化酶具有较高的操作稳定性。     

黑曲霉液体发酵制备 β- 葡萄糖苷酶的研究

研究了培养条件对黑曲霉液体发酵制备β-葡萄糖苷酶的影响及β-葡萄糖苷酶的表观酶学性质。麸皮是黑曲霉β-葡萄糖苷酶的较适诱导物。黑曲霉NL02以 40 g/L 麸皮为碳源,在 250 mL 三角瓶中装液 40 mL,接种量 8%,初始pH值5.5, 30℃、 170 r/min 下培养 10 d,β-葡萄糖苷酶活力为 19.12 IU/mL。β-葡萄糖苷酶最适温度为 65℃,40℃ 时稳定性较好;最适pH值为4.8,在pH值3.0～5.0之间稳定性较好。     

Botrytis cinerea蛋白磷酸酶的分离纯化及酶学性质

[目的]植物真菌病害灰霉病是由灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)侵染引起,它在世界范围内造成了严重的经济损失.B.cinerea易对化学药剂产生抗性,寻找更多对灰霉病有特效的生物农药是目前急需解决的难题.鉴于顺丁烯二酸酐类化合物良好的生物活性,研究此类化合物对蛋白磷酸酶的抑制效果.[方法]将发酵优化后的B.cinerea菌体经超声破碎、硫酸铵分级盐析、透析浓缩、DEAE-Sepharase离子交换层析等步骤分离纯化,并以SDS-PAGE验证酶纯度.考察所得纯酶的酶学性质,研究顺丁烯二酸酐类化合物对B.cinerea蛋白磷酸酶的抑制作用.[结果]经分离纯化后,该酶SDS-PAGE为单一条带,提纯倍数达30.79倍,酶活回收率为39.26％.酶学特性研究结果表明其最适反应pH值为4.0,最适反应温度为37℃.该酶在pH值3.0～6.0,50℃以下内稳定.考察金属离子对B.cinerea蛋白磷酸酶酶活的影响,发现Mg2+、Fe2+、Ca2+、Ba2+能提高该酶活性,Zn2+、Cu2+、Mn2+对酶活有抑制作用.以p -NPP为底物的酶动力学参数Vmax和Km分别为12.71 mmol/(L·min)与12.84 mmol/L.4种顺丁烯二酸酐类化合物对B.cinerea蛋白磷酸酶的抑制作用由大到小排名为苯基马来酸酐、4,5-二氯邻苯二甲酸酐、二甲基马来酸酐、顺丁烯二酸酐.[结论]此酶分离纯化步骤少,减少了酶活损失.以纯化的蛋白磷酸酶为靶标,顺丁烯二酸酐类化合物对酶活抑制效果良好,可研究抑制灰霉病机理及作为生物源农药开发.     

Kitasatospora sp.MY 5-36中e-聚赖氨酸降解酶的纯化及酶学性质

对Kitasatospora sp. MY 5-36中e-聚赖氨酸降解酶(PLD酶)进行了纯化和酶学性质研究. 通过DEAE-Sepharose, Source 15Q, Mono Q三步阴离子交换层析从细胞中得到纯酶，收率达40.7%，纯化倍数为500倍. 经SDS-PAGE电泳、凝胶过滤层析检测PLD酶由2个同聚亚基组成，亚基和全酶相对分子量分别为43.6和87.0 kDa. PLD酶的最适反应温度为30℃，最适pH值为7.0, 20~40℃保存时酶活力稳定，50~60℃保存时酶活力迅速下降，最大反应速率Vmax=0.112 mmol/(L×min), 米氏常数Km=0.216 mmol/L. PLD酶是一种金属酶，能够被Co2+激活、被Ca2+抑制.     

磷酸盐分步沉淀不锈钢酸洗污泥浸出液铬铁镍

不锈钢酸洗污泥含有高浓度的Fe、Cr、Ni金属离子,属于危险固体废弃物。本文对不锈钢酸洗污泥浸出液有价组分梯级分离展开研究,探讨了磷酸钠用量、浸出液初始pH、反应温度、搅拌时间对酸洗污泥中浸出液中Fe、Cr、Ni分离效果的影响。确定Cr³⁺沉淀的最佳工艺条件：P/Cr摩尔比为1.00,初始pH为1.00,反应温度为90℃,反应时间70min。Cr³⁺平均沉淀率为94.47%,Fe²⁺、Ni²⁺平均沉淀率为0.88%、0.78%。Fe³⁺优化条件为P/Fe体积比0.80、初始pH为1.00、反应温度为45℃、搅拌时间为60min,Fe³⁺沉淀率最高为99.83%、Ni²⁺沉淀率稳定在0.68%,证明了磷酸盐沉淀法可以有效分离不锈钢酸洗污泥浸出液中Fe、Cr、Ni,为不锈钢酸洗污泥铁、镍、铬分离提供理论依据和技术应用参考。     

胡萝卜汁中色素稳定性分析实验综述报告

以吸光度值为指标，探究在不同光照条件、温度、pH值、蔗糖含量、氧化剂、还原剂以及不同金属离子对胡萝卜汁中色素稳定性的影响。结果表明：胡萝卜色素具有一定的耐热性和耐糖性，对日光的照射和高温比较敏感，会在一定程度上破坏胡萝卜色素；在偏碱性条件下较稳定，强酸性条件下会破坏胡萝卜色素，胡萝卜色素在pH值为2.1～13时颜色会由鲜亮的橙红色变为暗红色，pH值在小于4的时候稳定性会降低，胡萝卜素会被破坏，出现沉淀。在pH值为8时色素最稳定；Fe³⁺、Fe²⁺、Cu²⁺会使胡萝卜汁变色，Al³⁺、Zn²⁺对胡萝卜色素具有保护的作用，在生产的过程中应该避免与这几种金属离子接触。