铜绿假单胞菌M19降解黄曲霉毒素B1的产物研究（网络首发、推荐阅读）

以实验室筛选保藏的黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）降解菌M19产生的降解酶PADE为对象,对其AFB1降解液进行薄层色谱及荧光光谱分析（LC-MS）,分析降解产物可能的结构变化,并利用液相质谱检测AFB1降解产物。薄层色谱检测结果：有机相和水相降解液均未检测到新的荧光吸收物质,表明降解产物没有荧光吸收;荧光光谱检测结果：AFB1降解产物的荧光明显减弱;液相质谱检测结果：发现质荷比为227.18的物质P。结果推断：AFB1降解过程中内酯键断裂,产生一个分子量为226的降解产物P,利用Xcalibur软件分析其分子式为C14H10O3,并根据AFB1降解后的LC-MS图谱分析以及AFB1降解产物的相关文献对降解途径进行假设。     

铜绿假单胞菌M19降解黄曲霉毒素B1的产物研究

以实验室筛选保藏的黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)降解菌M19产生的降解酶PADE为对象,对其AFB1降解液进行薄层色谱及荧光光谱分析(LC-MS),分析降解产物可能的结构变化,并利用液相质谱检测AFB1降解产物。薄层色谱检测结果:有机相和水相降解液均未检测到新的荧光吸收物质,表明降解产物没有荧光吸收;荧光光谱检测结果:AFB1降解产物的荧光明显减弱;液相质谱检测结果:发现质荷比为227.18的物质P。结果推断:AFB1降解过程中内酯键断裂,产生一个分子量为226的降解产物P,利用Xcalibur软件分析其分子式为C14H10O3,并根据AFB1降解后的LC-MS图谱分析以及AFB1降解产物的相关文献对降解途径进行假设。     

漆酶降解花生饼中黄曲霉毒素B1 的工艺优化 及分子对接分析

为促进漆酶在花生饼粕中黄曲霉毒素B1（AFB1）脱除中的实际应用,以霉变花生饼为实验对象,利用漆酶降解AFB1,考察加酶量、体系pH、反应温度、反应时间及料液比对AFB1降解率的影响,优化漆酶降解花生饼中AFB1的工艺条件,并通过分子对接分析漆酶与AFB1的相互作用方式。结果表明：漆酶降解花生饼中AFB1的最优工艺条件为加酶量5 U/g、体系pH 6.0、反应时间48 h、反应温度45 ℃、料液比1∶ 10,在此条件下漆酶对花生饼中AFB1的降解率高达83.5%,AFB1残留量为15.8 μg/kg,符合国标要求（≤50 μg/kg）;分子对接分析表明AFB1与漆酶活性空腔中的氨基酸残基His109、Ser110、His111、Ser113、His452、Asp456间形成了氢键网络,漆酶降解AFB1的机制可能与该氢键网络有关。综上,漆酶对花生饼中AFB1具有高效的降解活性,在发霉花生饼脱毒处理中有较大应用前景。     

低温射频等离子体降解乙腈中黄曲霉毒素B1的效果与途径分析

采用低温射频等离子体处理溶解于乙腈中的黄曲霉毒素B1,考察了时间、等离子体发射功率、黄曲霉毒素B1初始浓度对黄曲霉毒素B1降解率的影响,通过HPLC-MS/MS分析降解产物及其可能的降解途径。结果表明,随着等离子体功率的增大、黄曲霉毒素B1初始浓度的降低,其降解率有增大的趋势。200~500μg/L黄曲霉毒素B1经120 W等离子体处理150 s以上,黄曲霉毒素B1的降解率可达95%以上。经过对比等离子体处理不同时间后的黄曲霉毒素B1的一级质谱,推测准分子离子峰157、299、339为可能的降解产物峰。结合产物峰的二级质谱碎片信息和黄曲霉毒素B1分子结构中的活性位点,推断出降解产物的结构和降解路径。     

施氏假单胞菌F4对黄曲霉毒素B_1的酶解作用及其降解产物的初步分析

施氏假单胞菌F4能高效降解黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)。研究了F4的AFB1降解活性、降解动力学以及蛋白酶K和SDS对其降解性能的影响。F4细胞悬液与毒素共培养72 h后降解率达80.03%;蛋白酶K处理对降解率没有影响,SDS处理的细胞悬液基本丧失了降解活性。不同时间点的降解液上清液仍能有效降解残留AFB1,其中以60 h的降解液上清液活性较好,与残留AFB1继续作用48 h后降解率达84.30%;而经蛋白酶K处理后降解率仅为45.42%。低浓度AFB1诱导对菌体的降解活性没有影响。上述结果提示,F4通过胞内酶作用降解AFB1。高效液相色谱对产物分析表明,F4可将AFB1酶解为至少2种产物。     

黄曲霉毒素B1 降解菌株的分离鉴定、发酵条件的 优化及活性组分分析

为筛选出一株高效降解黄曲霉毒素B1（AFB1）的菌株，选取土壤为菌株来源，进行富集培养，经过以香豆素为唯一碳源的初筛和添加AFB1的复筛后，对筛选得到的各菌株进行16S rDNA鉴定，比对其测序结果，选取降解AFB1最高的菌株，探究发酵时间、发酵温度、初始pH、接种量、培养基对菌株降解AFB1的影响规律，通过正交试验优化发酵条件，并对降解方式进行初步探索。结果表明：经过初筛和复筛得到7株能够降解AFB1的菌株，经鉴定均为伯克霍尔德菌属，其中Burkholderia sp. D6的AFB1降解率最高；最优发酵条件为以LB培养基为发酵培养基、发酵时间84 h、发酵温度37 ℃、初始pH 7.0、接种量10%，在此条件下Burkholderia sp. D6对AFB1的降解率为（87.91±2.32)%；初步判断降解AFB1的活性组分是蛋白质或者酶。综上，通过筛选得到了一种能够高效降解AFB1的菌株，蛋白质或酶参与了AFB1的降解。     

响应面优化微波结合酶法制备米糠多肽过程中黄曲霉毒素B1的降解工艺

研究微波结合酶解法组合技术对米糠多肽制备过程中黄曲霉毒素B_1(Aflatoxin B_1,AFB_1)的影响,为染毒米糠的脱毒提供新途径。在单因素试验的基础上,将料液比(X1)、微波时间(X2)、碱性蛋白酶酶解时间(X3)、酶解p H(X4)因素进行组合,应用Design Expert软件和Box-Behnken中心组合试验方法对AFB1降解条件进行了优化,测定米糠多肽AFB1的降解量。初始米糠中AFB1浓度为100.14μg/kg,运用响应面分析确定了其最佳工艺条件:微波功率750 W、微波时间9.56 min;碱性蛋白酶酶解温度50℃、酶解p H 10.74、酶解时间1.57 h、加酶量0.4%;料液比1:9.96,在此条件下,米糠中AFB1的降解率为98.68%,所制备的米糠多肽残留浓度为1.85μg/kg,符合国家标准(≤10μg/kg)。通过响应面优化微波结合酶法制备多肽工艺发挥协同作用,能有效降低米糠多肽AFB1含量满足国家标准限量要求。微波结合酶解处理条件温和,降解效率高、操作方便,可推广应用于受黄曲霉毒素的降解的粮油制备中。     

氧化电解水清除黄曲霉毒素B＿1生成产物及其安全性评价

真菌毒素是引发食品安全问题的重要污染原因。黄曲霉毒素B1(AFB1)因污染范围广,对人和各种生物毒性极强而引起广泛关注。本文利用酸性氧化电解水清除AFB1,对生成产物进行辨识和安全性评价。揭示电酸性氧化电解水清除AFB1的机制。试验结果表明:经高分辨质谱分析,酸性氧化电解水清除AFB1生成的主要产物相对分子质量为364,化学式为C17H13Cl O7。结合NMR分析,确认未知产物为8-氯-9-羟基-Aflatoxin B1(8-Cl-9-OH-AFB1)。它是具有两亲性质的有机分子。该产物的安全性研究结果表明:产物无致突变性,其半数致死剂量浓度IC50值约为150 mmol/L,对细胞无毒害作用。本文明确了酸性水清除AFB1的应用安全性,为清除AFB1污染提供了1种安全有效,具有较好应用前景的新途径。     

降解黄曲霉毒素B1菌株的发酵条件优化及降解机制

目的：鉴定一株降解黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1,AFB1）的霉菌HSK8,通过优化其发酵条件提高AFB1降解率,并初步探索其降解机制。方法：通过形态学和内部转录间隔区（internal transcribed spacer,ITS）、18S rRNA和26S rRNA序列分析对该菌株进行鉴定,并通过单因素试验对发酵条件进行优化,采用薄层层析对AFB1降解产物进行研究。结果：经鉴定该株霉菌为夏孢生枝孢（Cladosporium uredinicola）。其发酵条件经优化确定为：发酵温度28 ℃、装液量75 mL/250 mL、接种量15%、发酵时间36 h、初始pH 8.0。薄层层析观察到一个不同于AFB1的荧光斑点。结论：发酵条件优化后,AFB1降解率从40.68%提升到68.96%,提高了69.52%;AFB1降解产物能在365 nm波长处发出蓝色荧光。     

介质阻挡等离子体降解阿月浑子坚果仁中AFB1的效果研究

探究介质阻挡(Dielectric barrier discharge,DBD)等离子体技术对阿月浑子坚果仁中黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）的降解影响因素。采用高效液相色谱法（High performance liquid chromatography,HPLC）分析AFB1,通过单因素实验,考察放电时间、放电功率和放电间距对AFB1降解率的影响,在此基础上进行Box-Behnken的实验设计,选取AFB1降解率作为响应值,优化AFB1的降解条件。根据AFB1浓度和峰面积建立标准工作曲线,得到曲线方程为y=57773.964 x+166368.663,R2=0.9995。通过响应面优化可知,各因素对AFB1降解率的影响大小依次为放电功率>放电间距>放电时间。DBD等离子体降解AFB1的最佳工艺条件为放电时间20 s、放电功率200 W和放电间距0.4 cm,AFB1的降解率高达93.4287%,与预测值98.5162%基本一致,说明该模型优化较为合理。DBD等离子体对阿月浑子坚果仁中AFB1具有良好的降解效果,DBD等离子体降解真菌毒素有广阔的应用前景。     

产漆酶食用菌的筛选及食用菌漆酶降解黄曲霉毒素B1的研究进展

每年有大量的谷物被黄曲霉毒素B1(aflatoxin B₁,AFB₁)污染,对人类和牲畜健康造成极大的危害。生物法降解AFB₁具有底物特异性强、反应条件温和等优点,受到社会的广泛认可。在降解谷物中AFB₁时,宜采用食用安全的微生物,以避免引入新的污染物,因此,产漆酶的食用菌是一种较好的选择。基于此,本文从美国国家生物技术信息中心数据库和Uniprot数据库(Unified Protein Database)中筛选出具有漆酶基因序列或氨基酸序列的食用菌,对已报道的能够产漆酶的食用菌进行总结,并概述产漆酶食用菌的实验筛选方法,探讨食用菌漆酶的结构和理化性质,综述食用菌漆酶的作用和食用菌漆酶降解AFB₁的研究进展,以期为食用菌漆酶安全、高效、绿色降解AFB₁提供理论支持。     

复合菌系降解黄曲霉毒素B_1的效果及组成多样性研究

采用"外淘汰法"筛选了一组对黄曲霉毒素B_1(aflatoxin B_1,AFB_1)具有高效降解能力的复合菌系FBAD-2,该复合菌系在120 h内能将质量浓度为2 000μg/L的AFB_1完全降解,对质量浓度为5 000μg/L的AFB_1能降解90%。FBAD-2在30~70℃的范围内均能保持对AFB_1的高效降解能力,其最适温度为60℃。毒素降解实验分析表明,FBAD-2对AFB_1的降解主要是胞外酶的作用,其最适产酶时间为24 h,此时的胞外粗酶液在48 h内能将5 000μg/L的AFB_1完全降解。16S rDNA基因组测序分析结果表明,FBAD-2的微生物组成主要包括土芽孢杆菌(Geobacillus)、嗜热小杆菌(Symbiobacterium thermopilum)、梭菌(Clostridium)和热厌氧杆菌(Tepidanaerobacter)等。     

挤压膨化降解糙米中黄曲霉毒素B1

目的：研究挤压工艺参数对黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1,AFB1）降解率的影响,为建立粮食产品中AFB1的挤压降解技术提供依据。方法：采用双螺杆挤压机挤压膨化污染AFB1的糙米,分析挤压温度、物料水分、喂料速率和螺杆转速对糙米中AFB1降解率的影响,并通过优化工艺得到最佳工艺条件。结果：单因素试验机筒温度170 ℃时,AFB1降解率最高为37.1%;物料水分24%时,AFB1降解率最高为37.2%;喂料速率30 g/min时,AFB1降解率最高为37.8%;螺杆转速200 r/min时,AFB1降解率最高为39.2%;挤压降解糙米中AFB1正交试验的最佳工艺条件为机筒温度180 ℃、物料水分24%、喂料速率30 g/min、螺杆转速160 r/min,其降解率为48.6%。挤压过程中机筒温度极显著影响AFB1降解,物料水分显著影响AFB1降解,喂料速率和螺杆转速对AFB1降解的影响不显著。结论：挤压膨化加工能有效降解糙米中的AFB1。     

黄曲霉毒素B1降解酶的分离纯化及其酶学特性

施氏假单胞菌（Pseudomonas stutzeri）F4能产生黄曲霉毒素B1的降解酶（aflatoxin B1-degrading enzyme,ADE）,本实验通过3 步法提取纯化ADE,即包括硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose阴离子交换柱层析和SephadexG-100凝胶过滤层析。结果表明,通过以上纯化方法,ADE的回收率为56%,纯化的ADE比活力为6.4×104 U/mg,纯化了123 倍。利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得ADE分子质量约为24 kD;ADE与AFB1反应的最适温度和pH值分别为30 ℃和6.0;Cu2+对ADE酶活性有抑制作用;利用双倒数作图法测得ADE表观Km值为5.61×10-5 mol/L。     

Effects of sodium metabisulphite, hydrogen peroxide and heat on aflatoxin B1 in lafun and gari--two cassava products.

Sodium metabisulphite and hydrogen peroxide alone or in combination with heat (50-70 degrees C) were found to be effective in degrading aflatoxin B1 (AFB1) in lafun and gari. Hydrogen peroxide (H2O2) at a concentration of 3% in the aqueous phase gave a 12.5% degradation of aflatoxin B1 in lafun and at 50 degrees C, degradation levels of 25% and 50% were obtained with 6.0 and 9.0% H2O2, respectively. When sodium metabisulphite was applied during the production of gari (a fermented cassava product heated to 50-70 degrees C during production) AFB1 degradation levels were found to be 65.8%, 60.9%, 41.5% and 36.6%, respectively, for sodium metabisulphite levels of 1.0%, 0.8%, 0.5% and 0.3%.     

臭氧降解玉米中黄曲霉毒素B1效果及降解动力学研究

玉米是我国重要的食品和饲料原料,当收获、加工和储藏等措施不当时,可能会造成黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1,AFB1）污染玉米这一突出问题,AFB1已被国际癌症机构定为1级致癌物。尽管目前已建立了一些物理、化学和生物降解AFB1的方法,但高效、安全、经济的绿色降解方法仍很少。本研究以AFB1污染的玉米为试样,研究臭氧对玉米中AFB1的降解效果。结果表明：AFB1降解率随着臭氧质量浓度的增加和处理时间的延长而显著提高;当水分质量分数为20.37%的玉米经90 mg/L的臭氧处理40 min后,AFB1含量由77.6 μg/kg降低到21.42 μg/kg,降解率达72.4%。臭氧降解AFB1的动力学模拟结果表明,臭氧降解AFB1符合一级动力学模型。玉米中AFB1降解速率常数按以下次序递减：k90 mg/L＞k65 mg/L＞k40 mg/L。实验得到臭氧降解AFB1的动力学方程、反应速率常数、决定系数和半衰期,为最优地控制臭氧降解AFB1的反应条件奠定了理论和实践基础,也为臭氧降解AFB1污染玉米的应用提供了技术保障。     

花生中的物质成分对低温射频等离子体降解黄曲霉毒素B1的影响

研究采用低温射频等离子体技术处理黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1,AFB1）,通过高效液相色谱分析其中AFB1的降解率,探究花生中的蛋白质、脂肪酸、维生素和水分对低温射频等离子体去除AFB1的影响。结果表明,添加花生蛋白和玉米蛋白后,在不同的等离子体处理功率条件下,AFB1的降解率明显下降。在相同处理条件下,添加花生蛋白比添加玉米蛋白后的降解率低;添加油酸和亚油酸后,在不同的等离子体处理功率条件下,AFB1的降解率明显下降。在相同处理条件下,油酸和亚油酸的AFB1降解率基本相同;添加VE后,AFB1的降解率先高于空白组,后低于空白组。在相同处理条件下VE的含量越多,AFB1的降解率越低。说明低温射频等离子体技术降解AFB1时,花生中的成分对降解有影响。     

Aflatoxin B1 degradation by flavobacterium aurantiacum in the presence of reducing conditions and seryl and sulfhydryl group inhibitors

This study was undertaken to determine the effects of reducing conditions (L-cysteine) and seryl (phenylmethylsulfonyl fluoride) and sulfhydryl (divalent cadmium) group inhibitors on aflatoxin B1 (AFB1) degradation by Flavobacterium aurantiacum. High-performance liquid chromatography was used to determine AFB1 concentrations in 72-h cultures of F. aurantiacum. The addition of 0.1, 1, or 10 mM L-cysteine did not have any significant effect on AFB1 degradation by these cultures after incubation for 4, 24, or 48 h (P > 0.05). The addition of 0.1 mM phenylmethylsulfonyl fluoride did not significantly decrease AFB1 degradation (P > 0.05), but 1 mM phenylmethylsulfonyl fluoride significantly decreased AFB1 degradation after 4, 24, and 48 h of incubation (P < or = 0.05). No significant difference in AFB1 degradation was obtained with 0.1 mM Cd2+ after 4, 24, or 48 h of incubation (P > 0.05). The addition of 1 and 10 mM Cd2+ significantly decreased AFB1 degradation compared with the cells containing AFB1 alone after 4 and 24 h (P < or = 0.05). The addition of chelators, 1 mM EDTA and 1 mM o-phenanthroline, did not result in removal of inhibition of AFB1 degradation observed with 1 and 10 mM Cd2+. Higher concentration of chelators (>1 mM) are necessary to overcome the inhibitory effect. Further work on the cellular fractions and/or crude enzyme preparations is necessary to determine if indeed sulfhydryl and seryl groups of the enzymes are involved in AFB1 degradation (by maintaining either the structure or function of the enzyme).     

嗜盐四联球菌对黄曲霉毒素B1生物降解的研究

该实验主要研究了嗜盐四联球菌（Tetraphylococcus halophila）对黄曲霉毒素B1（AFB1）的降解。研究嗜盐四联球菌不同接种量及不同浓度AFB1对降解效果的影响,检测嗜盐四联球菌上清液不同处理条件及金属离子对AFB1降解效果的影响,并利用扫描电镜（SEM）观察了嗜盐四联球菌在AFB1毒素环境中的微观形态。结果表明,嗜盐四联球菌接种量为1%,发酵72 h时对AFB1的降解率可达到70.11%,降解活性物质主要存在于上清液中,且具有一定的耐热性。Ca2+抑制上清液对AFB1的降解,AFB1降解率降至40.32%;Zn2+促进上清液对AFB1的降解,AFB1降解率提高至75.52%,扫描电镜结果表明,与AFB1共培养72 h后,嗜盐四联球菌细胞壁褶皱转好。