硫辛酸对阪崎克罗诺杆菌感染能力的抑制作用

硫辛酸是一类天然的类维生素化合物,广泛分布于水果、蔬菜中。为评价硫辛酸对阪崎克罗诺杆菌感染能力的抑制作用,本研究探究了硫辛酸对阪崎克罗诺杆菌泳动及群集运动能力、生物被膜形成能力、黏附及侵入宿主细胞能力以及在巨噬细胞中存活及增殖能力的影响。结果表明,硫辛酸对阪崎克罗诺杆菌3株标准菌株和3株分离菌株的最小抑菌浓度均为5.00 mg/mL,硫辛酸对阪崎克罗诺杆菌ATCC 29544的亚抑制浓度为30、60μg/mL。亚抑制浓度的硫辛酸可抑制阪崎克罗诺杆菌的泳动及群集运动能力、生物被膜形成能力、黏附及侵入Caco-2细胞能力。此外,硫辛酸可降低阪崎克罗诺杆菌在小鼠巨噬细胞RAW 264.7中存活及增殖的能力。综上,硫辛酸可有效抑制阪崎克罗诺杆菌并降低其感染宿主的能力。硫辛酸有潜力作为膳食补充剂用于预防或控制由阪崎克罗诺杆菌引起的相关食源性疾病。     

柠檬醛对阪崎克罗诺肠杆菌环境压力耐受能力及抗生素敏感性的影响

探究柠檬醛对阪崎克罗诺肠杆菌（Cronobacter sakazakii）环境耐受能力及对抗生敏感性的影响。首先测定柠檬醛对C. sakazakii的亚抑制浓度;随后使用亚抑制浓度的柠檬醛作用C. sakazakii,探究柠檬醛对菌体干燥、热、渗透压、酸、胆盐耐受能力的影响;同时,研究利用E-test?法检测柠檬醛作用后的菌体对抗生素氨苄西林和头孢西丁敏感性的变化;最后利用逆转录实时定量聚合酶链式反应,分析柠檬醛对C. sakazakii环境耐受相关基因转录的影响。结果表明：质量浓度为31.250?μg/L的柠檬醛对阪崎克罗诺肠杆菌的生长没有影响,本研究选择31.250?μg/L和15.625?μg/L为柠檬醛的亚抑制浓度;亚抑制浓度的柠檬醛使菌体耐干燥、耐渗透压、耐热、耐酸、耐胆盐的能力显著降低,且呈现质量浓度依赖性;并且,亚抑制浓度的柠檬醛增强了菌体对氨苄西林和头孢西丁的敏感性;逆转录实时聚合酶链式反应结果表明,柠檬醛降低了与阪崎克罗诺肠杆菌环境耐受能力相关的多个基因的转录水平。综上所述,柠檬醛可降低阪崎克罗诺肠杆菌的多种环境压力耐受并增强菌体对抗生素的敏感性,本研究将为柠檬醛应用于食品生产加工过程中控制阪崎克罗诺肠杆菌奠定理论基础,也为天然活性物质控制食源性致病菌提供新的思路。     

原儿茶醛对阪崎克罗诺肠杆菌的抑制作用及机理

本文通过检测原儿茶醛（PC）对阪崎克罗诺肠杆菌的最小抑菌浓度及对生长曲线的影响,分析其抑菌效果;利用场发射扫描电镜,观测PC对阪崎克罗诺肠杆菌细胞形态的影响;利用多种荧光探针检测PC对细菌细胞膜完整性、胞内pH、胞内ATP浓度、膜电位的作用,探明其可能的抑菌机理。结果表明：PC对阪崎肠杆菌的最小抑菌浓度为0.625~1.25 mg/mL,PC使细菌生长速率和最大菌体浓度显著减小。扫描电镜结果表明PC使菌体干瘪皱缩,丧失原本的棒状杆菌形态。同时,浓度为2MIC和4MIC的PC使细胞膜完整性分别降低49.0%和50.7%,使胞内pH由6.87降低为5.67和4.47,使胞内ATP浓度由1.824 μmol/L降低为0.01 μmol/L以下,并且使细菌细胞膜出现去极化。综上所述,PC对阪崎克罗诺肠杆菌有良好的抑制效果,其可能的抑菌机理是影响细胞膜的通透性,原儿茶醛有潜力作为天然抑菌剂在婴幼儿食品或其他食品中使用。     

百里酚和香芹酚对阪崎克罗诺肠杆菌的抑制作用

为探究百里酚和香芹酚对阪崎克罗诺肠杆菌的抑制作用及机理。测定百里酚、香芹酚对阪崎克罗诺肠杆菌最小抑菌浓度(MIC),研究两种物质对阪崎克罗诺肠杆菌生长曲线、膜电位、胞内pH、胞内ATP、细胞膜完整性的影响,利用场发射扫描电镜观测细胞形态的变化。结果表明:百里酚和香芹酚对阪崎克罗诺肠杆菌具有良好的抑制作用,两者对9株阪崎克罗诺肠杆菌的最小抑菌浓度均在0.1~0.2 mg/mL之间。百里酚和香芹酚均可使阪崎克罗诺肠杆菌细胞膜出现超极化,浓度为4MIC的百里酚和香芹酚分别使菌株的胞内pH由5.45降低至4.96和4.97,胞内ATP浓度由0.584降低为0.048和0.027 μmol/L,细胞膜完整性分别下降85.0%和88.1%。场发射扫描电镜结果显示,百里酚和香芹酚均能够导致菌体出现干瘪皱缩,细胞膜出现孔洞甚至裂解。结果显示,百里酚和香芹酚对阪崎克罗诺肠杆菌均具有良好的抑制效果,其作用机理可能与细胞膜的通透性及细胞形态有关。百里酚和香芹酚虽然互为同分异构体,但二者对阪崎克罗诺肠杆菌的抑制作用并未表现出明显的规律性差异。     

百里醌对阪崎克罗诺肠杆菌的抑制作用

为探究百里醌对阪崎克罗诺肠杆菌的抑制作用及可能的抑制机理,检测了百里醌对阪崎克罗诺肠杆菌的最 小抑菌浓度（minimal inhibitory concentrations,MIC）及对其生长动力学模型的影响,并测定百里醌处理后阪崎肠 杆菌胞内ATP浓度、胞内pH值、膜电位、细胞膜完整性的变化,最后利用场发射扫描电子显微镜观察细胞形态的 改变。结果表明：百里醌对阪崎克罗诺肠杆菌的MIC为0.3～0.6 mg/mL;百里醌使阪崎克罗诺肠杆菌的生长迟滞期 延长,最大生长速率减小;百里醌影响了阪崎克罗诺肠杆菌细胞膜的通透性,表现为：质量浓度为MIC和2×MIC 的百里醌使细胞内ATP浓度由6.52 μmol/L分别降低为0.27 μmol/L和0.17 μmol/L,胞内pH值分别由5.69降低为5.22和 4.99,细胞膜完整菌体比例分别降低至80%和22%,引起细胞膜膜电位超极化;场发射扫描电子显微镜观测表明百 里醌使阪崎克罗诺肠杆菌细胞膜褶皱,菌体干瘪。综上所述,百里醌是通过影响细胞膜通透性和改变细胞形态抑制 阪崎克罗诺肠杆菌。这些结果表明百里醌有潜力作为控制阪崎克罗诺肠杆菌的天然抑菌剂应用于食品中。     

反式肉桂醛对副溶血性弧菌毒力因子的抑制作用

为探究反式肉桂醛对副溶血性弧菌毒力因子的抑制作用,首先研究了反式肉桂醛对副溶血性弧菌的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)及亚抑制浓度,随后研究评价了反式肉桂醛对副溶血性弧菌的泳动运动性、生物被膜形成能力、黏附及侵入宿主细胞能力的影响。结果表明:反式肉桂醛对10株副溶血性弧菌的MIC为50～200μg/mL,对副溶血性弧菌ATCC 17802的亚抑制浓度为1/16 MIC、1/32 MIC、1/64 MIC。亚抑制浓度下,反式肉桂醛可降低副溶血性弧菌的泳动运动能力;通过结晶紫染色法和场发射扫描电子显微镜观察,发现反式肉桂醛可减弱副溶血性弧菌生物被膜形成能力;并且反式肉桂醛能使副溶血性弧菌黏附及侵入Caco-2细胞的能力降低。以上研究结果表明,反式肉桂醛具有降低副溶血性弧菌对人体感染能力的潜力,这为进一步开发反式肉桂醛应用于控制副溶血性弧菌引起的食源性疾病提供了理论依据。     

不同条件对阪崎克罗诺肠杆菌生物被膜形成的影响

本研究旨在探究不同生长温度(12℃、25℃、37℃)、培养基质(胰蛋白胨大豆肉汤、婴幼儿乳粉肉汤)和接触材料(不锈钢、玻璃、硅胶)对阪崎克罗诺肠杆菌ATCC 29004生物被膜形成的影响。研究首先通过活菌计数法评估不同条件下阪崎克罗诺肠杆菌粘附及生物被膜中的活菌量反映菌体粘附及成膜能力;随后借助场发射扫描电镜观测不同因素对菌体生物被膜微观结构的影响;最后分析不同条件下形成的生物被膜对三种季胺类消毒剂的抗性。结果表明:25℃和37℃下阪崎克罗诺肠杆菌的粘附菌量和生物被膜形成量高于12℃,菌体在胰蛋白胨大豆肉汤中的生物被膜形成量高于在婴幼儿乳粉肉汤中的形成量,37℃时硅胶材料表面粘附菌量高于不锈钢和玻璃材料,其他条件下菌体在三种材料表面粘附和生物被膜形成量无明显差异;阪崎克罗诺肠杆菌在25℃和37℃形成了致密且立体的生物被膜结构,12℃生物被膜为单层结构,三种材料表面生物被膜结构呈现出明显差异;阪崎克罗诺肠杆菌生物被膜对消毒剂的抗性取决于菌体的生长温度、接触材料及消毒剂的种类。综上所述,生长温度、培养基质和接触材料对阪崎克罗诺肠杆菌生物被膜形成均有影响,调节生长条件和选择接触材料对于控制阪崎克罗诺肠杆菌生物被膜的形成具有重要意义。     

培养条件对阪崎克罗诺杆菌食品分离菌株生物被膜形成的影响

目的研究不同培养条件对阪崎克罗诺杆菌食品分离菌株生物被膜形成的影响。方法从23株阪崎克罗诺杆菌食品分离菌株中筛选5株菌株作为研究对象,利用试管法和96孔微板法检测不同培养条件下阪崎克罗诺杆菌的菌膜形成情况。结果 5株菌株在胰蛋白胨大豆肉汤培养基(triptych soy broth,TSB)中均具有较强的成膜能力;培养基中添加不同浓度的营养因子对阪崎克罗诺杆菌生物被膜的形成影响不同,葡萄糖对5株阪崎克罗诺杆菌食品分离菌株的成膜能力有明显促进作用,乳糖的添加对阪崎克罗诺杆菌生物被膜形成有一定影响,但蔗糖的添加对阪崎克罗诺杆菌生物被膜形成影响不明显;培养基中添加一定浓度的氯化钠可以有效抑制阪崎克罗诺杆菌生物被膜形成;p H对阪崎克罗诺杆菌的成膜能力也有一定影响,中性环境有利于阪崎克罗诺杆菌的被膜形成。结论阪崎克罗诺杆菌食品分离菌株具有形成细菌生物被膜的能力,并且不同培养条件对阪崎克罗诺杆菌生物被膜的形成影响不同。     

环境因子对阪崎克罗诺肠杆菌生物膜形成的研究

目的研究阪崎克罗诺肠杆菌生物膜的形成特性。方法采用结晶紫染色法检测生物膜形成量,考察培养时间、培养温度以及初始pH值3个环境因子对阪崎克罗诺肠杆菌生物膜形成的影响。结果结果表明培养时间、培养温度以及初始pH值对生物膜形成影响较大,且各阪崎克罗诺肠杆菌的最佳成膜条件分别为:阪崎克罗诺肠杆菌CICC21550最适温度为30℃,最适PH为7,最佳培养时间为36h;阪崎克罗诺肠杆菌CICC 21562最适温度为30℃,最适pH为5,最佳培养时间为48 h;阪崎克罗诺肠杆菌CICC 21544最适温度为42℃,最适pH为7,最佳培养时间为24 h;阪崎克罗诺肠杆菌CICC 21563最适温度为30℃,最适pH为7,最佳培养时间为36 h。结论 4株阪崎克罗诺肠杆菌的生物被膜成膜能力由强及弱依次为阪崎克罗诺肠杆菌CICC 21550、21544、21563、21562。本研究为阪崎克罗诺肠杆菌生物膜相关研究提供理论参考。     

原儿茶醛对福氏志贺菌的抑制作用

为寻求安全、有效的福氏志贺菌控制方法,探究原儿茶醛对福氏志贺菌的抑制作用。测定原儿茶醛对福氏志贺菌的最小抑菌浓度、最小杀菌浓度以及其对菌体细胞形态、胞内ATP浓度、膜电位、菌体蛋白质合成和破坏及生长曲线的影响,结果表明：原儿茶醛对福氏志贺菌的最小抑菌浓度为0.5 mg/mL,最小杀菌浓度为4.0 mg/mL。场发射扫描电镜观测到原儿茶醛使福氏志贺菌形态受损,菌体皱缩干瘪;原儿茶醛影响福氏志贺菌细胞膜的通透性,表现为质量浓度为2×MIC和4×MIC的原儿茶醛使细菌胞内ATP浓度显著降低,引起细菌膜电位超极化,破坏菌体蛋白质并抑制细胞蛋白质合成;原儿茶醛延长了福氏志贺菌的生长迟滞期,减小其最大生长速率。结论：原儿茶醛对福氏志贺菌具有良好的抑制作用,其有作为天然、安全的抑菌物质应用于食品工业中的潜力。     

不同培养基质上阪崎克罗诺杆菌生物膜的比较

为了比较阪崎克罗诺杆菌在玻璃、聚丙烯及不锈钢表面形成的生物膜,将培养48 h的阪崎克罗诺杆菌生物膜经荧光染料SYTO 9/PI标记后,用激光共聚焦扫描显微镜(confocal laser scanning microscope,CLSM)联合COMSTAT软件定性定量地分析生物膜结构。结果表明:阪崎克罗诺杆菌在3种材料表面形成的生物膜的总生物量、平均厚度及平均扩散距离依次是不锈钢>聚丙烯>玻璃,粗糙系数及表面积与生物量比值则为不锈钢<聚丙烯<玻璃,生物膜的菌体活死比例是玻璃高于聚丙烯、不锈钢。另外,标准菌株ATCC 29544生物膜的总生物量、菌体活死比例、平均厚度及平均扩散距离均高于分离株Ⅰ、Ⅱ,粗糙系数及表面积与生物量比值均低于分离株。可见,阪崎克罗诺杆菌在不锈钢表面的成膜性强于玻璃与聚丙烯,标准菌株ATCC 29544的成膜能力高于2株食品分离菌株。      

丁酸钠对副溶血性弧菌毒性的影响及机制研究

目的 探究丁酸钠对副溶血性弧菌毒性的影响及机制。方法 通过测定丁酸钠对副溶血性弧菌生物膜形成能力及黏附宿主细胞能力, 评估其对副溶血性弧菌毒性的影响; 此外基于傅里叶变换红外光谱法和拉曼光谱法检测胞外成分变化;利用RT-qPCR探究毒力基因转录水平变化。结果 亚致死浓度的丁酸钠基本不影响副溶血性弧菌生长,但对生物膜形成有显著地抑制作用; 丁酸钠处理后,副溶血性弧菌对Caco-2细胞的黏附率分别降低28%、41%和61%; 傅里叶变换红外光谱(FT-IR)和拉曼光谱表明丁酸钠能影响副溶血性弧菌脂肪酸及蛋白质疏水性以及降低核酸、碳水化合物和蛋白质的峰面积; RT-qPCR分析显示丁酸钠可显著下调与副溶血性弧菌毒力相关基因的转录表达。结论 丁酸钠具有一定的抑制副溶血性弧菌毒性的能力, 有潜力用于预防及控制副溶血性弧菌造成的食源性疾病。     

Characterization of the gene encoding the 16S rRNA of Enterobacter sakazakii and development of a species-specific PCR method

The gene encoding the 16S rRNA of Enterobacter (E.) sakazakii (ATCC 29544, plus four strains isolated from powdered infant formula) was studied, and the sequence compared with those of other Enterobacteriaceae in aspects of genetic variability. Sequence differences between E. sakazakii and other Enterobacteriaceae within the hypervariable regions V1, V2, and V3, respectively, were used to develop two PCR methods for E. sakazakii. PCR1 employed a primer pair located in V1/V2, while PCR2 utilized a primer pair located in V1/V3, respectively. The two PCR methods were tested against a set of 57 E. sakazakii and 148 non-E. sakazakii isolates. PCR1 gave an amplicon with a size of 406 bp and resulted in 100% positive results for E. sakazakii, but also detected Citrobacter koseri/amalonaticus and all nine tested Salmonella enterica serovars. In contrast, PCR2 (amplicon size of 952 bp) gave positive results only for E. sakazakii, thus allowing specific identification of this species.     

丁香酚对解淀粉芽孢杆菌气液界面生物膜的抑制作用

为研究丁香酚对解淀粉芽孢杆菌DY1a生物膜的抑制作用及成膜早期界面黏附聚集能力的影响,分析了不同质量浓度的丁香酚对生物膜形成、生物膜表面微观结构、膜内活菌数及生物膜基质多糖和蛋白质含量的影响,并评价其对成熟生物膜的清除能力,通过细菌运动能力实验、细胞表面疏水性、细胞表面Zeta电位及细胞自聚集能力,综合分析丁香酚对生物膜形成早期界面黏附聚集能力的影响。结果表明:丁香酚对解淀粉芽孢杆菌的最低生物膜抑制质量浓度(MBIC)为1.500mg/mL,MBIC的丁香酚对成熟生物膜清除率为28.85%。添加1/2 MBIC、1/4 MBIC的丁香酚培养基气液界面形成的生物膜较为单薄,表面较为光滑平整,生物膜内活菌数显著降低。丁香酚对腐败菌泳动能力抑制率为22.16%~100.00%,对丛集能力的抑制率为43.86%~97.50%,使细胞表面疏水性、细胞表面负Zeta电位和自聚集率均降低。此外,丁香酚显著抑制了腐败菌胞外多糖和蛋白质合成。丁香酚对芽孢杆菌生物膜的抑制作用主要是通过抑制细菌运动能力,降低细胞表面的疏水性、自聚集性,从而干扰早期菌体在成膜界面上的黏附能力,并通过抑制胞外聚合物组分的合成分泌延迟生物膜的形成和成熟。丁香酚可作为抑制腐败解淀粉芽孢杆菌气液界面生物膜形成的潜在抗生物膜剂。     

大肠杆菌O157:H7与假单胞菌混合菌膜形成时交互作用及其对毒力基因表达的影响

以大肠杆菌O157:H7和食品中常见腐败菌假单胞菌为对象,研究两种菌混合培养时菌体泳动能力和混合菌膜形成时的交互作用,进一步采用反转录实时定量聚合酶链式反应分析大肠杆菌O157:H7代表菌株在混合菌膜形成时毒力基因（stx1、stx2、hly和eae）表达变化。菌体泳动性结果显示,3 株大肠杆菌O157:H7泳动性均低于4 株假单胞菌（P＜0.05）,两种菌混合培养时假单胞菌的泳动能力受到显著抑制。选择性培养计数发现混合菌膜形成72 h时,两种菌未发生相互促进,其中4 株假单胞菌的菌膜形成均受到3 株大肠杆菌O157:H7显著抑制（P＜0.05）。选取大肠杆菌O157:H7 CICC21530菌株分析毒力基因表达,结果发现混合菌液单位体积、混合菌膜单位面积4 种毒力基因表达分别低于单种菌液、单种菌膜（P＜0.05）,进一步的单位菌数结果亦然,表明混合培养和混合菌膜形成时假单胞菌抑制了大肠杆菌O157:H7毒力基因表达;单位菌数结果还发现菌膜中4 种毒力基因表达均高于浮游菌（P＜0.05）,表明形成菌膜后菌体毒力增强。本研究可为揭示食源性致病菌和腐败菌混合菌膜形成的交互作用及进一步风险评估和风险防控提供科学依据。     

Plant-derived antimicrobials reduce Listeria monocytogenes virulence factors in vitro, and down-regulate expression of virulence genes

Listeria monocytogenes (LM) is a major foodborne pathogen causing septicemia, meningitis and death in humans. LM infection is preceded by its attachment to and invasion of human intestinal epithelium followed by systemic spread. The major virulence factors in LM include motility, hemolysin and lecithinase production. Reducing LM attachment to and invasion of host tissue and production of virulence factors could potentially control listeriosis in humans. This study investigated the efficacy of sub-inhibitory concentrations (SICs, concentrations not inhibiting bacterial growth) of three, generally regarded as safe (GRAS)-status, plant-derived antimicrobial compounds in reducing LM attachment to and invasion of human colon adenocarcinoma (Caco-2) and human brain microvascular endothelial cells (HBMEC). Additionally, the effect of these compounds on the aforementioned LM virulence factors was studied. The compounds and their respective SICs used relative to their MICs were trans-cinnamaldehyde (TC 0.50mM, 0.75mM with the MIC of 0.90mM), carvacrol (CR 0.50mM, 0.65mM with the MIC of 0.75mM), and thymol (TY 0.33mM, 0.50mM with the MIC of 0.60mM). All three-plant antimicrobials reduced LM adhesion to and invasion of Caco-2 and HBMEC (p<0.05). The compounds also decreased LM motility, hemolysin production and lecithinase activity (p<0.05). Real-time PCR data revealed that TC, CR, and TY down-regulated the expression of LM virulence genes by >3.0 folds compared to controls (p<0.05). Results suggest that TC, CR, and TY could potentially be used to control LM infection; however, in vivo studies are necessary to validate these results.     

二烯丙基二硫醚对产志贺毒性大肠杆菌毒力基因表达及生物学特性的影响

以二烯丙基二硫醚(DADS)为原料,以非O157产志贺毒性大肠杆菌CICC10670为供试菌,通过测定最低抑菌浓度探究DADS对大肠杆菌的抑菌活性,利用实时荧光定量PCR技术测定大肠杆菌stx2、eaeA和ehxA基因表达的影响,DADS作为抑制剂探究其对大肠杆菌游动能力的影响。结果表明:DADS对大肠杆菌有较好的抑菌能力,其最低抑菌浓度为2 mmol/L。亚抑菌浓度下DADS降低大肠杆菌毒力基因stx2、eaeA和ehxA的表达,相对表达量降低85%以上,并呈现浓度依赖性。DADS以剂量依赖的方式在亚抑菌浓度下抑制大肠杆菌游动能力。综上所述,二烯丙基二硫醚对产志贺毒性大肠杆菌有良好的抑菌作用,并且较低浓度下就可抑制相关毒力基因的表达,可作为潜在的天然防腐剂,防止食物中毒,延长食品的货架期。     

Exopolysaccharides produced by probiotic strains modify the adhesion of probiotics and enteropathogens to human intestinal mucus

Exopolysaccharides (EPSs) are exocellular polymers present in the surface of many bacteria, including Lactobacillus and Bifidobacterium. The genome sequence of several strains revealed the presence of EPS-encoding genes. However, the physiological role that EPSs play in the bacterial ecology still remains uncertain. In this study, we have assessed the effect of EPSs produced by Lactobacillus rhamnosus GG, Bifidobacterium longum NB667, and Bifidobacterium animalis IPLA-R1 on the adhesion of probiotic and enteropathogen strains to human intestinal mucus. The EPS fraction GG had no significant effect on the adhesion of L. rhamnosus GG and B. animalis IPLA-R1. However, the EPS fractions NB667 and IPLA-R1 significantly reduced the adherence of both probiotic strains. In contrast, the three EPS fractions increased the adhesion of Enterobacter sakazakii ATCC 29544 and Escherichia coli NCTC 8603. Higher adherence of Salmonella enterica serovar Typhimurium ATCC 29631 and Clostridium difficile ATCC 9689 was detected in the presence of the EPS fractions GG and NB667. In general, these effects were obtained at EPS concentrations of up to 5 mg/ml, and they were EPS dose dependent. The competitive exclusion of probiotics in the presence of EPS could suggest the involvement of these biopolymers in the adhesion to mucus. The increase in the adherence of enteropathogens could be explained if components of the pathogen surface are able to bind to specific EPSs and the bound EPSs are able to adhere to mucus. To the best of our knowledge, this is the first work reporting the effect of EPSs from probiotics on bacterial adhesion properties.     

应用环介导等温扩增检测阪崎肠杆菌

建立环介导等温扩增检测阪崎肠杆菌的方法,通过肉眼可见的白色沉淀,判断检测结果。将阪崎肠杆菌(ATCC29544)的16S-23SrRNA间区序列作为靶基因,设计2对特异引物,优化反应条件,进行LAMP扩增。对产物进行酶切分析,与理论上的预期结果相一致。通过测序比对,与GenBank上报道的同源性达到99%。用25株食源性致病菌证实该引物特异性强。LAMP扩增20min,其灵敏度为4.3×102 fg/tube,结果表明,LAMP方法检测阪崎肠杆菌,灵敏度高、特异性强、耗时短、方法简便。     

基于全基因组测序的阪崎克罗诺杆菌婴幼儿食品分离株分子特征研究

目的 研究婴幼儿食品中分离的阪崎克罗诺杆菌(C.sakazakii)分子生物学特征。方法 对婴幼儿食品中C.sakazakii进行分离鉴定、药物敏感性试验和全基因组测序,利用BioNumerics软件对全基因组数据进行拼接组装,对组装基因组开展多位点序列分型(MLST)、核心基因组多位点序列分型(cgMLST)、毒力基因和耐药基因分析,并与PubMLST数据库中ST型进行比较分析。结果 本研究中分离的9株C.sakazakii共分为5个ST型,ST1和ST64型为主要型别,同时也是PubMLST数据库中C.sakazakii的主要型别。3株C.sakazakii携带mcr-9耐药基因,但药敏结果显示所有菌株对包括多粘菌素B和多粘菌素E在内的12种抗生素均敏感。除携带共同毒力基因谱外,ST1、ST64和ST458型携带脂多糖基因gtrB。cgMLST聚类分析显示,9株C.sakazakii呈高度多样性。结论 与临床分离株相关的ST1和ST64型是本研究食品分离株中的主要型别,提示C.sakazakii具有潜在的致病性,有必要对婴幼儿食品中C.sakazakii开展连续监测,为预防控制由其引起的食源性疾病提供依据。