没食子酸的体外抑菌作用研究

研究了没食子酸对常见食源性致病菌和腐败菌的抑菌作用.采用液体二倍稀释法和牛津杯法测定了没食子酸的最小抑菌浓度及抑菌活性;采用酶标仪测定了细菌生长曲线的变化;采用扫描电镜观察了单增李斯特菌的形态变化.结果表明,没食子酸对单增李斯特菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌最小抑菌浓度分别为0.125、0.25、2、4、4、4mg/mL,抑菌圈分别为24.03±0.17、20.67±0.28、17.17±0.64、14.43±0.10、14.77±0.04、(15.07±0.03) mm;对生长曲线均有影响,并使单增李斯特菌的菌体从中间处凹陷,大部分出现破损,具有明显的细胞原生质泄漏现象.     

辽西传统发酵食品中抗单增李斯特菌乳酸菌的筛选与鉴定

目的:从传统辽西发酵食品中筛选对单增李斯特菌具有良好拮抗作用的乳酸菌菌株。方法:采用双层琼脂扩散法筛选乳酸菌优良菌株。采用酸性实验、热处理实验、蛋白酶敏感性实验分析拮抗特性,利用生长曲线分析拮抗物质形成过程,扫描电镜分析细胞结构完整性。通过生理生化实验和16S rRNA序列进行菌株鉴定。结果:从13株乳酸菌中筛选出1株抗单增李斯特菌活性较强的菌株DL3,抗菌物质存在于无细胞上清液中。经胃蛋白酶处理后抑菌活性丧失了27.50%,胰蛋白酶和木瓜蛋白酶可使抑菌活性完全丧失,经121℃处理15 min后,抑菌活性仍保留96.88%,在p H2.5~6.5时具有抑菌活性,表明菌株DL3产生的抑菌物质可能为细菌素。添加菌株DL3无细胞上清液可使单增李斯特菌的生长曲线延迟期和稳定期延长4 h,显著地缩短了其生长期。扫描电镜结果表明经菌株DL3无细胞上清液处理的单增李斯特菌菌体变小且边缘模糊不清,其中一端细胞原生质发生泄漏。经鉴定菌株DL3为植物乳杆菌。结论:获得1株对单增李斯特菌有较强拮抗活性的植物乳杆菌DL3,该菌的拮抗活性物质可能为细菌素,可作为食品防腐剂潜在的应用菌株。     

两种天然防腐剂对单增李斯特氏菌抑菌机制的研究

通过测定最小抑菌浓度(MIC)、核酸蛋白泄露情况、扫描电镜实验(SEM),研究了两种天然抗菌剂大豆球蛋白碱性抗菌肽和乳酸链球菌素对单增李斯特氏菌的抑菌活力和抑制机制。结果表明,两种天然抗菌剂均对单增李斯特氏菌表现出良好的抑制作用,大豆球蛋白碱性抗菌肽的最小抑菌浓度更低,乳酸链球菌素对胞膜的破坏更强,乳酸链球菌素可能主要通过诱导膜损伤来抑制单增李斯特氏菌,而大豆球蛋白碱性抗菌肽可能还存在其他的抑制方式,两种防腐剂具有潜在的复配使用可能。     

丁香精油对单核细胞增生性李斯特菌的抗菌性能及杀菌机制研究

近年来,食品安全问题已成为全球关注的公共卫生问题,食源性致病菌是引起食源性疾病的首要原因。单核细胞增生性李斯特菌(单增李斯特菌)因其高致病率的特点在食品等诸多领域给人类社会带来了严重的危害。本文着重研究了丁香精油对单增李斯特菌的抗菌效果及其抗菌机制。经试验测得,丁香精油对单增李斯特菌的最小抑菌浓度是0.05%,最小杀菌浓度是0.1%。0.05%的丁香精油能在8小时内清除99.996%的单增李斯特菌。实验结果表明,丁香精油对单增李斯特菌显示了较好的杀菌效果。丁香精油抗菌机制实验结果表明,丁香精油能破坏单增李斯特菌细胞的细胞膜,并且能抑制93.75%的ATP的合成。另外,丁香精油能有效抑制细菌核酸的合成,使细菌的生长繁殖受到影响,最终导致细菌死亡。     

两种天然防腐剂对单增李斯特菌抑菌性的研究

通过测定最小抑菌浓度、李斯特菌细胞内RNA、蛋白质泄露以及李斯特菌的还原糖来研究大豆球蛋白碱性多肽(GBP)和乳酸链球菌素(Nisin)两种天然防腐剂对单增李斯特菌的抑菌效果,初步探究了天然防腐剂对食品致病菌的抑制作用。研究发现:两种天然防腐剂都能抑制单增李斯特菌的生长,但相同条件下GBP的抑菌效果明显强于Nisin;通过细胞内RNA及蛋白泄露、还原糖测定实验验证了两种天然防腐剂都会破坏菌体的细胞膜结构,造成生物大分子如蛋白等物质的泄露。     

胡椒油中萜类化合物对单增李斯特菌抑菌机理及在冷鲜肉中的应用

将不同浓度的萜类化合物添加至单增李斯特菌培养基中,对照组中不添加萜类化合物,通过对单增李斯特菌最小抑菌浓度(MIC)、菌落数、形态和电导率等指标的测定和分析,探究胡椒油中萜类化合物对单增李斯特菌的抑菌机理。结果表明,胡椒油中萜类化合物对单增李斯特菌的MIC为0.05%。添加0.1%萜类化合物可显著抑制单增李斯特菌的生长(P<0.05),使单增李斯特菌细胞膜通透性发生变化,细菌内容物大量流失,菌体相互黏连、衰亡。胡椒油中萜类化合物应用于冷鲜肉保鲜可有效减缓菌落总数的增长,相较于对照组在冷藏后12 h时菌落数已超出国家标准(6.0 lg CFU/g),加入0.1%萜类化合物能够使冷鲜肉菌落数在24 h时仍然处于较低水平。本研究探讨了胡椒油中萜类化合物对单增李斯特菌的抑菌机理并将其用于冷鲜肉的保鲜,这有利于对胡椒油的开发利用,也为日后将其应用于肉制品保鲜领域提供理论基础。     

百里香抑菌物质的提取工艺优化及活性研究

研究百里香中抑菌成分的超高压提取工艺及抑菌作用,考察压力、酒精浓度、料液比对百里香提取物抑菌作用大小的影响,采用响应面法优化百里香抑菌成分超高压提取的最佳条件;采用倍半稀释法测定百里香提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及单增李斯特菌的最小抑菌浓度(MIC);检测抑菌物质对细菌的生长曲线、核酸泄漏的影响;对百里香提取物成分进行分析。实验结果表明:在压力380MPa、乙醇浓度83%、料液比1∶42(g/mL)的条件下,相对电导率为15.69%±0.21%;百里香提取物处理细菌后与对照组相比,菌生长缓慢,迟滞期延长,细胞膜通透性增加,核酸泄露量明显增加,说明百里香提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及单增李斯特菌生长具有一定抑制作用;每1g百里香超高压提取物中含黄酮0.189mg、多酚0.162mg、多糖0.085mg、百里香酚0.134mg。     

发酵面团中抗单增李斯特氏菌乳酸菌的筛选及鉴定

以单增李斯特氏菌为指示菌,通过牛津杯双层平板法对从发酵面团样品中分离出的54株乳酸菌进行抑菌试验。在排除有机酸,过氧化氢的干扰后,其中1株乳酸菌的发酵上清液对单增李斯特氏菌仍然表现出明显的抑制作用。其抑菌活性在酸性条件下较强,在加入蛋白酶K和胰蛋白酶以及100℃以上热处理时明显下降甚至消失,说明其代谢产物中含有蛋白质类抑菌物质,是一类细菌素。经Trcine-SDS-PAGE试验分析该细菌素分子质量为25 kDa;经过生理生化试验及16S rDNA序列同源性分析,该菌被鉴定为Lactobacillus curvatus。     

辣木籽素对单增李斯特菌的抑制作用

为了探究辣木籽素对单增李斯特菌（Listeria monocytogenes）的抑制作用,采用牛津杯法、二倍稀释法和生长曲线评价辣木籽素对L. monocytogenes的抑菌活性。通过核酸泄漏和蛋白质泄漏、胞外总糖、PI染色探究辣木籽素对单增李斯特菌细胞膜通透性的影响;运用结晶紫染色、细菌表面疏水性、菌体泳动性及扫描电镜评估辣木籽素对L.monocytogenes生物被膜的影响;采用胞内Ca2+含量和细胞凋亡率分析辣木籽素对单增李斯特菌凋亡的影响。结果表明,辣木籽素对单增李斯特菌具有较强的抑菌活性,其最小抑菌浓度（MIC）为400μmol/L;经1 MIC辣木籽素处理后的单增李斯特菌生长明显受到抑制,细胞膜损伤率达50.20%,通透性显著增加（P<0.05）;核酸、蛋白质和糖类等大分子物质泄漏量分别是对照组的2.59倍、2.38倍和1.34倍（P<0.05）;与对照组相比,生物被膜形成、细菌表面疏水性、泳动性和粘附性显著降低58.10%、38.00%和68.19%(P<0.05);胞内Ca2+含量显著上升3.83倍（P<0.01）,凋亡率达54.40%。辣木籽...     

葡萄皮花色苷对几种常见食源性致病菌的抑制作用

以葡萄皮为原料,采用高效液相色谱法分析葡萄皮中的主要花色苷含量,探究其花色苷提取物对几种常见食源性致病菌的抑制作用,并对3种抑菌试验方法进行对比分析。结果表明:葡萄皮花色苷提取物中除花色苷外还有其他成分,其中二甲花翠素3-O-葡萄糖苷的质量分数为0.19%。当使用抑菌圈法时,质量浓度为25mg/m L的花色苷对金黄色葡萄球菌ATCC 29213有抑制作用,然而不能抑制沙门氏菌SL 1344和单增李斯特菌CMCC 54004的生长。肉汤稀释法对金黄色葡萄球菌ATCC 29213、大肠杆菌ATCC 25922、沙门氏菌SL1344和单增李斯特菌CMCC 54004的最小抑菌质量浓度分别是1.25,2.5,1.25 mg/m L。琼脂稀释法对金黄色葡萄球菌ATCC 29213、沙门氏菌SL 1344和单增李斯特菌CMCC 54004的最小抑菌质量浓度均为1.25 mg/m L。     

抗菌肽zp37抑制果汁中单核细胞增生李斯特菌的活性及其作用机制

单核细胞增生李斯特菌（简称单增李斯特菌）作为一种常见的食源性致病菌,是影响果汁食用安全性的主要威胁因子。本实验设计并获得一种抗菌肽zp37,通过测定抗菌肽zp37最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）,分析抗菌肽zp37处理后单增李斯特菌的生长曲线、膜电位、膜完整性、细胞微观结构、细胞聚集率、DNA结合情况以及胞内活性氧等,研究抗菌肽zp37抑制果汁中单增李斯特菌的活性及其作用机制。结果表明,抗菌肽zp37对单增李斯特菌的MIC为16μg/mL,当其质量浓度大于4MIC时,单增李斯特菌生长受到明显抑制。同时,8MIC的抗菌肽zp37处理1h能杀死绝大部分的单增李斯特菌,且在7 d贮藏期内,2MIC的抗菌肽zp37能将草莓汁、猕猴桃汁和苹果汁中的单增李斯特菌控制到检测限以下。抗菌肽zp37处理后,单增李斯特菌细胞膜离子通透性增加、膜电位消失,细胞膜完整性被破坏,细胞出现明显的凹陷变形,细胞间发生聚集。荧光标记示踪法结果显示,抗菌肽zp37同时作用于单增李斯特菌的细胞膜和细胞质。在细胞质中,当抗菌肽zp37质量浓度大于DNA质量浓度的1/4...     

弱酸性电位水对单增李斯特菌致死机制的研究

目的研究弱酸性电位水(slightly acidic electrolyzed water,SAEW)对单增李斯特菌的致死机制,并与强碱性杀菌剂次氯酸钠(Na Cl O)和强酸性杀菌剂稀盐酸(HCl)进行比较。方法测定三种杀菌剂的杀菌效率及处理后胞内蛋白泄漏量、TTC-脱氢酶相对活性、Na+/K+-ATP酶活性和细菌超微结构的变化。结果 30 mg/L SAEW和Na Cl O对Na+/K+-ATP酶和TTC-脱氢酶相对活性的抑制无显著性差异,但其显著高于稀HCl组。SAEW处理单增李斯特菌1 min后所导致的蛋白质泄漏量(0.35 mg/m L)显著高于Na Cl O和稀HCl处理组(分别为0.16mg/m L和0.11 mg/m L)。SAEW、Na Cl O、稀HCl对单增李斯特菌的细胞超微结构都造成了明显的损伤,细胞质凝集,透电子区扩大。其中稀HCl对超微结构的损伤最大,说明强酸性环境对细胞形态结构有很大的影响。结论 SAEW处理对单增李斯特菌细胞质造成了一定程度的损伤,抑制了细胞呼吸作用,改变了细胞膜的通透性,降低了细胞膜上的Na+/K+-ATP酶活性,导致细胞内大分子物质泄漏而最终导致细胞死亡。SAEW杀菌机制的初步研究为未来SAEW的杀菌研究和应用前景奠定基础。     

异硫氰酸酯类香料对两种革兰氏阳性致病菌的抑制作用

选取9种异硫氰酸酯类香料,以金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌作为供试菌,通过测量抑菌圈直径考察此类含硫香料的抑菌活性,并探讨其构效关系。筛选抑菌效果最好的含硫香料,利用反转录荧光定量聚合酶链式反应技术考察其对金黄色葡萄球菌耐热核酸酶nuc基因表达的影响。结果显示:4种异硫氰酸酯类香料——异硫氰酸苄酯(benzyl isothiocyanate,BZITC)、异硫氰酸苯乙酯(phenethyl isothiocyanate,PEITC)、异硫氰酸3-甲硫基丙酯(3-methylthiopropyl isothiocyanate,MTPITC)和异硫氰酸异戊酯(isoamyl isothiocyanate,IAITC)对2种革兰氏阳性菌的抑菌效果较好,且抑菌能力为BZITC≈PEITCMTPITCIAITC。对比9种异硫氰酸酯类香料的抑菌活性,BZITC对金黄色葡萄球菌的抑菌活性最强,最低抑菌浓度为0.61 mmol/L,对单增李斯特菌的最低抑菌浓度为4.88 mmol/L。在亚抑菌浓度条件下,BZITC极显著地降低了金黄色葡萄球菌毒力基因nuc的表达(P0.01)。以上结果说明,苯基的存在可能增强异硫氰酸酯类香料的抑菌活性,该结构对BZITC抑制金黄色葡萄球菌毒力基因nuc的表达具有重要作用。     

桦褐孔菌多酚抑菌活性分析研究

为减少辅料糠壳给酒体带来的邪杂味，研究箭竹作为辅料酿造小曲酒的工艺。分别考察箭竹的粉碎大小、加量、小曲种类、入窖温度对箭竹小曲酒的影响。结果表明，约7.0 mm长、3.0 mm宽的箭竹适合作小曲固态酿酒辅料，箭竹使用前清蒸1 h，加量为7%，选用泸州某小曲，入窖温度为24 ℃。通过理化分析及感官评定表明在该优化条件下，出酒率为47%以上，总酸含量为685.3 mg/L，总酯含量为1 071.5 mg/L，达到优级白酒标准；小曲酒酒体清香纯正，柔和谐调、醇甜爽净，除具有乙酸乙酯为主体的复合香气外，还带有箭竹独有的清香味。     

普洱茶与绿茶提取物体外抑菌效应的研究

采用滤纸片扩散法分别研究不同浓度的普洱茶和绿茶提取物对李斯特氏菌(L. monocytogenes)、猪粪链球菌(S. faecalis)、大肠杆菌(E. coli)、鼠伤寒沙门氏菌(S. typhimurium)、金黄色葡萄球菌(S. aureus)和炭疽杆菌(B. anthracis)6 株食源性微生物和致病菌的抑制效果及其最小抑菌浓度(MIC)。结果表明：普洱茶提取物在1%～7%(m/V)范围内对李斯特氏菌(L. monocytogenes)有较强的抑制作用,其MIC 为0.07mg/ml,在5%～7% 范围内对所有供试菌种均有抑制作用,对炭疽杆菌的抑制效果最好。绿茶提取物在1%～2%(m/V)范围内仅对李斯特氏菌(L. monocytogenes)有抑制作用,其MIC 为0.09mg/ml,在3% 时仅对炭疽杆菌(B. anthracis)无抑制作用,在4%～7% 范围内对所有供试菌种都有抑制作用,对猪粪链球菌抑制效果最好。     

茶槲寄生“螃蟹脚”醇提正丁醇萃取相对金黄色葡萄球菌抑菌机理的研究

本文研究了茶槲寄生“螃蟹脚”醇提各萃取相的抑菌作用及正丁醇萃取相（NVBEs）对金黄色葡萄球菌的抑菌机理。采用滤纸片扩散法测定抑菌圈直径（DIZ）的大小,对倍稀释法测定最小抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）,来评价“螃蟹脚”醇提各萃取相对金黄色葡萄球菌（S. aureus）、大肠杆菌（E. coli）、鼠伤寒沙门氏菌（S. typhimurium）、单核细胞增生李斯特菌（L. monocytogenes）4种食源性腐败菌的抑制性;通过光学显微镜和扫描电镜观察、胞膜通透性、胞壁完整性和酶活性等实验,研究了NVBEs抑菌机理。结果表明,“螃蟹脚”醇提各萃取相对S. aureus、E. coli、S. typhimurium和L. monocytogenes均有明显抑制效果,其中NVBEs抑菌活性较好,对S. aureus抑制效果最好,DIZ为9.84±0.57 mm,MIC为3.52 mg/mL,MBC为7.04 mg/mL。抑菌机理结果表明：NVBEs可增加S. aureus细胞壁及细胞膜的通透性,破坏菌体细胞结构,引起细胞内含物如核酸和蛋白质等外泄;引起遗传物质DNA的改变,使菌体细胞形态结构出现异常;影响菌体酶的代谢活动,从而抑制细菌的生长。     

绿色魏斯氏菌发酵液对单核细胞增生李斯特菌的抑制及其在冷却猪肉保鲜中的应用

采用微量肉汤稀释法测定绿色魏斯氏菌(Weissella viridescens)发酵液对单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)的最小抑菌浓度,微孔板法结合显微镜观察检测绿色魏斯氏菌发酵液对Lm生物被膜形成的影响,最后通过测定冷藏过程中冷却猪肉的菌落总数、Lm总数、感官指标和理化指标评...     

INHIBITION OF LISTERIA MONOCYTOGENES AND OTHER BACTERIA BY A PLANT ESSENTIAL OIL (DMC) IN SPANISH SOFT CHEESE

The inhibitory effects of a mixture of plant essential oils (DMC) were tested in culture media and Spanish soft cheese. The minimum inhibitory concentration (MIC) was determined in plate count agar and tryptose broth, with pH adjusted to 6.5, against Listeria monocytogenes, Listeria innocua, Staphylococcus aureus, Lactobacillus brevis, Micrococcus luteus, Salmonella cholerasuis, Escherichia coli O157:H7 , Enterobacter cloacae, Pseudomonas aeruginosa and Pseudomonas fluorescens. The mixture of essential oils inhibited all Gram-positive bacteria tested at 40 ppm, but higher concentrations were needed to inhibit Gram-negative bacteria, and no inhibitory effect was found against Ps. fluorescens. The effects of DMC against L. monocytogenes and E. coli O157:H7 were evaluated in Spanish soft cheese (Queso Fresco, pH=6.5) stored at 7C. DMC had a bacteriostatic effect against L. monocytogenes at concentrations of 2500 ppm but was ineffective to control the growth of E. coli O157:H7 .     

香芹酚对阴沟肠杆菌的抑菌作用及机理

香芹酚具有较好的抑菌效果,符合人们对食品防腐剂安全无毒、无副作用的要求。本研究通过最小抑菌浓度和杀菌实验分析了香芹酚对阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae C4）的抑菌活性,并检测其对阴沟肠杆菌细胞膜电势、胞外ATP化学发光值的影响,使用激光共聚焦显微镜观察细胞渗透性,并通过扫描电子显微镜观察香芹酚对阴沟肠杆菌细胞形态的影响,从而探究香芹酚对阴沟肠杆菌的抑菌机理。结果表明：香芹酚对阴沟肠杆菌的最小抑菌浓度为0.5 μL/mL;阴沟肠杆菌细胞膜通透性随着香芹酚含量（0.25～2 μL/mL）的增加而逐渐增加。经香芹酚处理的阴沟肠杆菌细胞膜内外电势改变,ATP大量漏出。通过扫描电子显微镜观察,发现经香芹酚处理的菌体细胞形态干瘪且明显被破坏,含量高于1 μL/mL的香芹酚几乎能够溶解菌体。推测香芹酚通过作用于细胞膜改变膜内外电势,造成细胞膜通透性改变,引起细胞ATP等内容物泄露,从而影响细胞功能,达到抑菌的作用。     

Antimicrobial susceptibilities of isolates of Staphylococcus aureus, Listeria species and Salmonella serotypes associated with poultry processing.

The broth microdilution method was used to determine the activities of selected antimicrobial agents used in the South African poultry industry (danofloxacin, neomycin, chlortetracycline, oxytetracycline, tylosin and colistin) and vancomycin against bacterial isolates previously obtained from carcasses and selected equipment surfaces and environmental sources associated with poultry processing. The antimicrobial susceptibilities of 38 isolates of Staphylococcus (S.) aureus, 25 Listeria (L.) innocua, 18 L. monocytogenes, and 62 isolates belonging to six Salmonella (Salm.) serotypes (Salm. agona, Salm. blockley, Salm. enteritidis, Salm. isangi, Salm. reading and Salm. typhimurium) were determined. The most active antimicrobial agent against all the isolates tested was danofloxacin with minimum inhibitory concentrations (MICs) for 90% of the isolates (MIC90) not exceeding 0.25 and 2 microg/ml for gram-negative and gram-positive isolates, respectively. Conversely, high MICs were recorded for all the isolates tested against chlortetracycline and oxytetracycline (MIC90 range of 32 to > 512 microg/ml), except for the L. monocytogenes and Salm. enteritidis isolates (MIC range of < or = 0.5-4 microg/ml). Neomycin was found to be active against S. aureus, L. innocua, L. monocytogenes, Salm. enteritidis and Salm. isangi isolates, with MICs not exceeding 8 microg/ml. MIC ranges for tylosin and vancomycin, which were only tested against the gram-positive isolates, were from 1 to > 512 microg/ml and from 1 to 4 microg/ml, respectively. The MIC range for the remaining antimicrobial agent, colistin, which was only tested against the Salmonella isolates, was 0.5-16 microg/ml. The lack of MIC breakpoints for the antimicrobial agents used in the poultry industry did not allow for definite conclusions as to the level of resistant bacteria associated with poultry carcasses and the processing environment in this study.