两株动物双歧杆菌的潜在干预糖尿病作用

为了获得对糖尿病有潜在干预作用的菌株,本实验对阳性对照菌株动物双歧杆菌BB12、受试菌株20-9和15-2的抗氧化性质,α-葡萄糖苷酶活力抑制能力,对酸、胆盐和模拟消化道环境的抗性、粘附能力和粘附抑制能力进行研究。结果显示:动物双歧杆菌15-2完整细胞和细胞提取物的羟自由基清除能力和还原能力高于菌株20-9和菌株BB12,α-葡萄糖苷酶活力抑制能力高于菌株20-9,两者抑制率分别为26.90%和12.83%,而菌株BB12对α-葡萄糖苷酶活力无抑制作用,菌株15-2经模拟消化道后的存活率和对Caco-2细胞的粘附率(分别为88.91%和27.59%)强于菌株20-9和菌株BB12。菌株15-2对酸耐受性高于菌株20-9和BB12,在胆盐和粘附抑制能力方面虽略逊于菌株BB12,但仍优于菌株20-9。因此,动物双歧杆菌15-2可以作为潜在的干预糖尿病作用菌株进一步用于动物实验。     

瑞士乳杆菌的益生特性

研究了瑞士乳杆菌作为发酵肉制品发酵剂的发酵特性;在模拟胃肠道环境中对酸和胆盐的耐受性;另以Caco-2细胞为体外肠道上皮细胞模型,研究了瑞士乳杆菌对小肠的黏附性和影响黏附的因素。实验结果表明,瑞士乳杆菌不产粘液,不产气,不产H2S,不产氨,不产H2O2,不具有氨基酸脱羧酶活性,不具有硝酸还原酶能力,具有抑制S.aureus和E.coli能力,能耐受一定量的NaCl和NaNO2,发酵葡萄糖产酸。瑞士乳杆菌同时还具有较好的耐酸和耐胆盐性能。通过瑞士乳杆菌的小肠黏附实验发现,生长稳定期的瑞士乳杆菌与Caco-2细胞有很好的黏附效果,当瑞士乳杆菌与Caco-2细胞共培养时间为2h时,黏附趋于饱和,且黏附环境pH值为7.0时黏附性最强。结果显示瑞士乳杆菌具备益生活性,满足发酵肉制品中益生菌制剂的筛选标准,可作为发酵菌种用于发酵肉制品的生产。     

促人胎结肠上皮细胞增殖的婴儿源双歧杆菌的分离筛选及生物学性质

以分离得到的15 株婴儿源双歧杆菌作为实验菌株,研究其对人胎结肠上皮细胞（CCD841 CoN）的增殖促进效果,以期筛选出一株具有较强促增殖能力的双歧杆菌,并对其形态学特征、生长特性、环境耐受性、黏附性及安全性等生物学性质进行评价,确定最佳促增殖条件。通过CCK-8法分别分析各实验菌株活菌及灭活菌菌悬液、发酵上清液及裂解液对CCD841 CoN细胞的增殖活性百分比,主成分分析结果表明Bifidobacterium ongum K2-21-4综合促增殖性能最佳。对CCD841 CoN细胞的黏附性实验也显示,K2-21-4的黏附率仅次于商业菌株Lactobacillus animalis BB12,可达6.6%,然而,B. longum K2-21-4对酸、胆盐的耐受性较差。除对氨基糖苷类、喹诺酮类抗生素具有抗性外,对青霉素、大环内酯类具有一定程度敏感,对阿莫西林、万古霉素、四环素、利福平、氯霉素均敏感,无溶血活性。107 CFU/mL长双歧杆菌K2-21-4活菌悬液与细胞共作24 h的细胞增殖促进作用最佳。综上B. longum K2-21-4具有较高的促进CCD841 CoN细胞增殖能力,具有一定的应用潜力。     

15株乳酸菌的表面性质及其黏附能力

为了初步探讨乳酸菌的黏附机制,对15株乳酸菌的表面疏水性、自凝聚能力以及体外黏附Caco-2细胞的能力进行了测定,筛选出高黏附性乳酸菌菌株。采用化学试剂和酶处理嗜酸乳杆菌KLDS 1.0901细胞壁表面成分,再经过cFDA-SE荧光标记后,测定其对Caco-2细胞黏附能力的变化,分析影响黏附的主要黏附素。结果表明:嗜酸乳杆菌KLDS 1.0901对Caco-2细胞的黏附率最高,为12.73%;不同乳酸菌之间的表面疏水性、自凝聚能力以及对Caco-2细胞的黏附能力存在差异;经高碘酸钠、苯酚、胃蛋白酶、胰蛋白酶,尤其是氯化锂和热处理,能显著降低KLDS 1.0901的黏附性(p<0.05)。表明KLDS 1.0901对Caco-2细胞的黏附可能是以表层蛋白为主的多种黏附素共同作用的结果。     

母乳婴儿源乳杆菌的筛选及其免疫调节能力研究

以分离自母乳婴儿源的乳杆菌——鼠李糖乳杆菌BF-1、植物乳杆菌BF-15、唾液乳杆菌BF-29、干酪乳杆菌BF-55为对象,研究这些菌株对体外模拟人工胃、肠液及胆盐的耐受性,对Caco-2细胞的黏附能力、安全性和对小鼠脾淋巴细胞增殖活性的影响,探讨菌株的免疫调节活性。试验结果表明:植物乳杆菌BF-15对人工消化液和胆盐有较强的耐受性,对Caco-2细胞黏附能力[(7.10±0.30)CFU/cell]显著高于阳性对照菌株LGG[(3.90±0.30)CFU/cell](P<0.05);BF-15除对氨基糖苷类、糖肽类抗生素的固有耐药性外,对苯唑西林、头孢噻吩也有耐药性,无抗性质粒;BF-15和LGG的活性和热致死菌在一定的菌浓范围(1×10^6~10^7CFU/mL)均促进体外小鼠淋巴细胞增殖,表现出剂量依赖关系,同时活性菌株作用效果明显优于热致死菌株。在相同菌浓条件下,两株菌体外免疫调节能力没有显著性差异(P>0.05)。母乳婴儿源乳杆菌——植物乳杆菌BF-15具有较强的抗逆性,较高的黏附性和一定的免疫调节能力。     

具有抑制肠道致病菌和黏附Caco-2细胞作用的益生性乳酸菌的筛选及鉴定

为了筛选具有肠道益生特性的乳酸菌,进一步开发益生菌资源,本文研究采用牛津杯、人工模拟胃肠液及体外黏附Caco-2细胞等方法,以鼠李糖乳杆菌GG(Lactobacillus rhamnosus GG,LGG)为对照菌株,对实验室保藏15株乳酸菌的益生特性进行筛选与评估。实验结果表明:15株乳酸菌对两株沙门氏菌都具有一定抑制效果,抑菌圈直径为10.95~22.06 mm;乳酸菌C174、D24、D599、C37、D512具有较好的耐酸耐胆盐能力,在人工胃液3 h内存活率达到60%以上,人工肠液4 h内存活率达到80%以上;在黏附试验中,C174对Caco-2细胞具有较强黏附能力,黏附数量为740 CFU/100细胞,略高于对照菌株鼠李糖乳杆菌(543 CFU/100细胞);通过对具有高黏附性的菌株C174进行生理生化和16S rRNA分子测序鉴定,结果表明菌株C174为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),命名为Lactobacillus plantarum ZJ-174。Lactobacillus plantarum ZJ-174的抑菌能力强、能够耐酸耐胆盐,并具有很强的黏附能力,是一株潜在的益生菌,具有治疗或预防人和动物肠道疾病等应用价值。     

一株抗白色念珠菌植物乳杆菌AT14的益生活性分析

以5株乳酸菌为研究对象,分析菌株抗白色念珠菌活性和益生活性。筛选出对白色念珠菌具有明显抑制作用的乳酸菌,并对其进行分子生物学鉴定。通过体外模拟胃肠道环境耐受性试验,对碳氢化合物的疏水性和对Caco-2细胞黏附性试验,以及对7种常用抗生素的敏感性试验来评估乳酸菌的益生活性。结果表明,菌株AT14对白色念珠菌的抑制效果最明显,鉴定为植物乳杆菌。植物乳杆菌AT14可耐受8%NaCl、0.5%胆盐、0.5%苯酚和pH2.0的环境。植物乳杆菌AT14与5种碳氢化合物的疏水性均高于50%,对Caco-2细胞的黏附能力达65.0 cfu/cell。植物乳杆菌AT14对头孢噻肟、克林霉素和青霉素比较敏感,链霉素次之,对庆大霉素、氨苄青霉素和四环素存在一定抗性。     

具有降解胆固醇能力的益生菌菌株筛选

益生菌是通过多种作用机制来提供功效作用,其中包括提供胃肠道保护屏障,改变肠道内环境p H来提供非致病菌的增殖,从而增强宿主的免疫应答能力,产生抗菌物质与其在受体肠道中进行竞争。乳酸菌对于宿主肠道上皮细胞的黏附性具有菌株特异性而并非宿主特异性,由此可以采用体外模型来筛选所诉求的益生菌。双歧杆菌的黏附过程首先是通过非特异性接触,之后与受体结合,实验过程主要是通过菌株对胞外机制的黏附能力进行筛选具有高黏附特性的Bifidobacterium lactis。采用20株分离自健康人体肠道的Bifidobacterium lactis进行筛选,并进一步从具有功能性的菌株进行了高黏附性筛选、耐酸耐胆盐等筛选,其中筛选出1株各方面均具有良好抗逆性的Bifidobacterium lactis BLa80,对肠道上皮细胞的黏附率达到1.1%,胆固醇降解能力达到34.56%;非外源性保护条件下胃酸p H环境下的存活率达到21.47%,胆盐耐受性达到29.3%。所筛选出的菌株经过中国微生物研究所鉴定为乳双歧杆菌Bifidobacterium lactis,并命名为BLa80。     

抑制致病菌益生乳杆菌的胁迫耐受性及免疫活性

以16株乳杆菌为研究对象,分析其对病原菌金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌及大肠杆菌的抑菌能力,黏附及干预病原菌黏附Caco-2细胞的作用,对酸及胆盐胁迫的抗逆性及对免疫细胞的调节活性。结果表明,植物乳杆菌KLDS 1.0328等乳杆菌的无细胞发酵上清液的抑菌圈直径均在15 mm以上。以鼠李糖乳杆菌LGG为对照,体外筛选出6株对Caco-2细胞体外黏附能力强或与之相当的菌株。基于竞争、排阻及置换试验,复筛出4株抑制病原菌和对Caco-2细胞黏附能力较强的乳杆菌,其中植物乳杆菌KLDS 1.0328竞争性抑制鼠伤寒沙门氏菌的抑制率为(72.52 ± 4.94)%。此外,证实植物乳杆菌KLDS 1.0328对酸及胆盐的耐受性较强,对免疫细胞活性有较好的调节作用,具有在食品工业开发、应用的潜力。     

六株植物乳杆菌的益生特性研究

该试验旨在研究不同来源的6株植物乳杆菌(分别为LP15-1、LP15-2、LC16-1、LP17-1、LP17-3、RS048)的益生特性。试验通过测定菌株的耐酸耐胆盐能力、模拟胃肠道耐受能力、抑制有害菌能力分别对结肠上皮细胞系Caco-2和空肠上皮细胞系IPEC-1细胞的黏附性等特性,考察植物乳杆菌的益生特性。研究结果表明,6株植物乳杆菌在pH=2的酸环境中孵育3 h存活率均在43%以上;除LC16-1和LP17-1外,其余4株均能在0.3%(质量分数)的胆盐中存活;在模拟胃肠液中存活率均高于95%,对金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌、大肠杆菌K88和大肠杆菌K99有较好的抑制能力;对Caco-2和IPEC-1有一定的黏附能力。其中植物乳杆菌LP15-1各项益生特性均比较优良,可作为潜在的益生菌株进行进一步研究和应用。     

In vitro inhibition of Escherichia coli O157:H7 by bifidobacterial strains of human origin

The ability of bifidobacteria isolated from infant feces to inhibit enterohemorrhagic Escherichia coli serotype O157:H7 in vitro and reduce its adhesion to human enterocyte-like Caco-2 cells was evaluated in comparison to American Type Culture Collection bifidobacterial reference strains. Five Bifidobacterium isolates from infant feces were identified and characterized by morphology, fructose-6-phosphate phosphoketolase (F6PPK) assay, polymerase chain reaction using bifidobacterial 16S rDNA specific primers, carbohydrate fermentation patterns, resistance to lysozyme, acid, bile and hydrogen peroxide as well as their ability to inhibit E. coli O157:H7 using the agar spot technique. Infant isolates showed greater resistance to bile, acid, lysozyme and more antimicrobial activity against E. coli O157:H7 than ATCC strains. Two infant isolates identified as B. bifidum RBL 71 and B. bifidum RBL 460 showed good adhesion and significant potential for reducing adhesion of E. coli O157:H7 to Caco-2 cells. This effect was dependent on bifidobacterial cell concentration. These results show that bifidobacteria isolated from infants may be useful for improving probiotic formulae with respect to protection against E. coli O157:H7 infection.     

嗜黏蛋白阿克曼氏菌ATCC BAA-835肠道益生作用的体外评价

嗜黏蛋白阿克曼氏菌(Akkermansia muciniphila,Akk)具有良好的肠道益生作用,与宿主肠道健康、代谢、神经等生理状态密切相关.研究采用体外厌氧培养的方法评价1株Akk模式菌株(ATCC BAA-835)的肠道益生作用,从菌株水平考查菌株对模拟胃肠环境的耐受性、对Caco-2细胞的黏附性,以及利用低聚...     

H+-ATPase activity in Bifidobacterium with special reference to acid tolerance

The acid tolerance of 17 strains of nine species of bifidobacteria was compared using brief exposures to acidic conditions (pH 2-5). In addition, because it has been hypothesized that the acid tolerance of bifidobacteria depends on H+-ATPase activity, the activity of this enzyme in various strains and species was compared. In general, the acid tolerance of bifidobacteria was found to be weak, with the exception of Bifidobacterium lactis and Bifidobacterium animalis. High numbers of all strains of B. lactis and B. animalis survived exposure to pH 3-5 for 3 h. The H+-ATPase activity of the acid-tolerant strains B. lactis LKM512 and JCM 10602T, and B. animalis JCM 1190T, JCM 1253, JCM 7117, and JCM 7124 was higher at pH 4 than at pH 5. In contrast, the H+-ATPase activity of nonacid-tolerant strains was lower at pH 4 than at pH 5.     

婴儿源益生性双歧杆菌的筛选及肠道定殖性研究

本研究旨在从婴儿粪便中筛选出具有潜在益生特性的双歧杆菌,并探究其肠道定殖情况,为双歧杆菌的产品开发提供优良的菌株。采用MRS培养基对样品进行分离纯化,菌株经F6PPK检测及16S r DNA测序鉴定,之后进行模拟胃肠液、胆盐耐受性、对食源性致病菌(大肠杆菌、沙门氏菌、单增李斯特菌等)的抑制及对HT-29细胞的粘附能力测定,将筛选出的菌株进行动物实验,测定其肠道定殖能力。分离到的27株双歧杆菌,经分子生物学鉴定为7个不同的种:Bifidobacterium longum、Bifidobacterium breve、Bifidobacterium bifidum、Bifidobacterium pseudocatenulatum、Bifidobacterium infantis、Bifidobacterium animalis和Bifidobacterium adolescentis。体外实验表明,B.longum A9、B.breve A4、B.bifidum B6、B.longum C6、B.adolescentis F8和B.infantis H6等具有较强的潜在益生特性;动物实验表明,B.infantis H6和B.longum C6具有较强的肠道定殖能力。B.longum C6和B.infantis H6有望作为优良的益生性菌株,应用于双歧杆菌的产品开发。     

Kefir yeasts enhance probiotic potentials of Lactobacillus paracasei H9: The positive effects of coaggregation between the two strains

This study investigated pure Lactobacillus paracasei H9 tolerance to simulated gastrointestinal juices and adhesion to intestinal mucosa cells without yeasts, with viable yeasts (VY) and with different pretreated yeasts. Three models including gastric secretion tolerance (GST), intestinal juice tolerance (IJT) and sequential gastrointestinal tolerance (SGT) were respectively employed to assay the tolerance of L. paracasei H9, whilst Caco-2 cell line was used to investigate the bacterial adhesion. Particularly, the co-aggregation ability of the two strains at pH values of 2.0, 8.0 and 7.2 was originally carried out to study relations to the bacterial probiotic potentials. Results showed that yeast counts in the range from 3.0 to 5.0 log CFU mL^? 1 could gradually increase the viability of L. paracasei H9 in SGT. The bacterial viability in the three tolerance models and the adherent number to Caco-2 cells were significantly improved with addition of VY (P < 0.05). The L. paracasei H9 with VY in gastric juice at pH 2.0 and intestinal juice at pH 8.0, respectively, exhibited higher aggregation percentage compared with that of single L. paracasei H9 at 37 °C (P < 0.05). The aggregation ability of L. paracasei H9 with VY at pH 7.2, which might contribute to increase the adhesion of the bacteria, also excelled that of L. paracasei H9 (P < 0.05). It is deduced that proteins of the bacterial cell surface and polysaccharides in yeast cell walls play important roles in co-aggregation of the two strains and the microbial adhesion specificity to Caco-2 cells. The co-aggregation of the two strains also contributes to enhancing probiotic potentials of L. paracasei H9.