高产辅酶Q10光合细菌的选育

以球形红假单胞菌1．1737^T为出发菌株,经紫外线和亚硝基胍诱变,并结合罗红霉素抗性和耐前体性物质-对羟基苯甲酸抗性突变株的筛选,获得1株辅酶Q10高产菌株PHB^r-2,该菌株经发酵108h的生物量为15．7g／L,辅酶Q10产量达到50．6mg／L,比原始菌株在同样条件下产量提高了90．9％。该变异株遗传性能稳定,经转接5代后其辅酶Q10产量为49．5mg／L,是1株很有前景的辅酶Q10生产菌株。     

表面活性剂和抗氧化剂对三孢布拉霉合成β-胡萝卜素的影响

三孢布拉霉（Blakeslea trispora）是发酵生产天然β-胡萝卜素的优良菌种。实验研究了乳化剂OP、Span 20、Tween 80 3种非离子型表面活性剂对三孢布拉霉合成β-胡萝卜素的影响，确定了三者的最佳作用浓度分别为0．075％、0．05％和1％，β-胡萝卜素产量的最大增长幅度分别为15％、10％和50％。抗氧化剂Ethoxyquin对β-胡萝卜素产量的增长有显著作用，最佳浓度为0．025％，β-胡萝卜素产量的增长幅度可高达70％。     

三孢布拉氏霉菌体中辅酶Q10测定方法的条件优化

为快速测定三孢布拉氏霉发酵制备生产中的辅酶Q10,本研究采用醇碱皂化法,其工艺条件为:KOH加量为干菌体质量的1.9倍,醇碱浓度为10%,焦性没食子酸添加量为湿菌体质量的10%,在70℃下皂化60min。将萃取得到的皂化液采用硅胶HF254为固定相的薄层层析,石油醚(60～90℃):乙醚(20:3)为流动相,分离菌体皂化液中的辅酶Q10。然后在薄板上刮下与辅酶Q10标准品相同Rf值的色带,溶于无水乙醇中,用紫外分光光度法测定其辅酶Q10含量,其回收率达82.8%(RSD值为1.49%)。同时结合高效液相色谱法,确证三孢布拉氏霉菌体中辅酶Q10的存在及含量。      

三孢布拉氏霉菌体中辅酶Q10测定方法的条件优化

为快速测定三孢布拉氏霉发酵制备生产中的辅酶Q10本研究采用醇碱皂化法,其工艺条件为:KOH加量为干菌体质量的1.9倍,醇碱浓度为10%,焦性没食子酸添加量为湿菌体质量的10%,在70℃下皂化60min.将萃取得到的皂化液采用硅胶HF254为固定相的薄层层析,石油醚(60～90℃):乙醚(20:3)为流动相,分离菌体皂化液中的辅酶Q10.然后在薄板上刮下与辅酶Q10标准品相同Rf值的色带,溶于无水乙醇中,用紫外分光光度法测定其辅酶Q10含量,其回收率达82.8%(RSD值为1.49%).同时结合高效液相色谱法,确证三孢布拉氏霉菌体中辅酶Q10的存在及含量.     

低能离子注入β-胡萝卜素生产菌株的选育与发酵条件初步优化

通过10k eV氮离子(N )注入β-胡萝卜素生产菌三孢布拉霉(Blakeslea trispora)筛选得到2株产量比出发菌株提高20%的高产菌株,经过多次传代试验表明该菌遗传稳定性较好,并对pH值、温度、转速等发酵条件进行初步优化,使β-胡萝卜素的产量达到2.2g/L.     

N~+注入番茄红素生产菌株的选育及基因转录分析

对三孢布拉霉(Blakeslea trispora)负菌进行了N+诱变,筛选出1株高产番茄红素的负菌株4c,并研究了出发菌株与高产菌株番茄红素合成关键基因表达量的变化。研究表明,突变株番茄红素合成关键基因hmgR、car B和carRA的表达量与出发菌株相比分别提高了2.2倍、2.35倍和2.16倍;与正菌混合发酵48 h后hmgR、car B和carRA的表达量与出发菌株相比分别提高了2.0倍、1.52倍和1.35倍。突变株与正菌共培养发酵96 h后,番茄红素产量达到了25.97 mg/g,与出发菌株相比,提高了39%。     

辅酶Q10 高产菌株的诱变选育

以豌豆根瘤菌(Rhizobium leguminosarum 1.1723)为出发菌株,利用紫外-LiCl和超声波进行诱变,以期获得高产辅酶Q10菌株。结果表明：1g/L LiCl诱变能显著提高菌株的正突变率,超声波诱变会引起细胞壁结构与构成发生改变。通过罗红霉素初筛和摇床复筛,获得辅酶Q10突变株C40-05,胞内辅酶Q10产量为1.198mg/g干菌,比出发菌株(0.389mg/g)提高了208%。菌株经5次传代培养,胞内辅酶Q10产量下降了2.67%,突变株遗传形状稳定,可作为辅酶Q10生产菌株。     

热带假丝酵母辅酶Q10高产菌的选育研究

以热带假丝酵母(Candida tropicalis)AS 2.1387为出发菌株,研究紫外线、硫酸二乙酯单因素及复合诱变对出发菌株的诱变效应,并根据辅酶Q10合成的反馈调节途径,建立了高产突变菌株的快速筛选方法,通过放线菌素D对突变菌进行广谱抗性初筛,并以高浓度前体物质对羟基苯甲酸以及终产物结构类似物维生素K3进行特异性筛选,选育得到了遗传稳定性良好的辅酶Q10高产突变株APV.12,使得APV.12菌株辅酶Q10的发酵产量达到23.958mg/L,比出发菌株提高了1.76倍.     

热带假丝酵母辅酶Q10高产菌的选育研究

以热带假丝酵母(Candida tropicalis)AS2.1387为出发菌株,研究紫外线、硫酸二乙酯单因素及复合诱变对出发菌株的诱变效应,并根据辅酶Q10合成的反馈调节途径,建立了高产突变菌株的快速筛选方法,通过放线菌素D对突变菌进行广谱抗性初筛,并以高浓度前体物质对羟基苯甲酸以及终产物结构类似物维生素K3进行特异性筛选,选育得到了遗传稳定性良好的辅酶Q10高产突变株APV.12,使得APV.12菌株辅酶Q10的发酵产量达到23.958mg/L,比出发菌株提高了1.76倍。      

基于ARTP技术快速选育番茄红素高效合成突变株

为了提高番茄红素的生物合成水平,本研究利用常压室温等离子体注入技术对番茄红素生产菌三孢布拉霉负菌(Blakeslea trispora(-))进行诱变选育。首先建立了番茄红素含量分析的标准曲线和等离子体诱变致死率曲线。通过构建的"马鞍形"致死率曲线确定了合适的诱变处理时间,经过数轮肉眼初筛和摇瓶复筛,获得了一株产量为0.85±0.04 g/L的突变株ARTP-3,比出发菌株番茄红素的产量提高51.4%,且传代实验表明该菌株的番茄红素产量遗传稳定性较好。本研究不仅获得了一株具有较大经济价值的番茄红素高效合成突变株,建立的育种方法也可为其他工业微生物特别是丝状真菌的选育提供有益的参考。