食源性致病菌活的不可培养状态研究进展

在食品加工、产品运输及贮藏过程中,极端的环境条件可能会导致食品中的致病菌进入活的不可培养(viable but non-culturable,VBNC)状态,如大肠杆菌O157:H7、副溶血性弧菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等常见的食源性致病菌。食源性致病菌一旦进入了VBNC状态,常规的培养检测方法不能将其检出,易造成VBNC状态致病菌漏检,威胁食品安全和人体健康。本文归纳了食品加工过程中可能致使食源性致病菌进入VBNC状态的相关因素,概括了食源性致病菌VBNC状态的生物学特性,并着重介绍VBNC食源性致病菌的检测方法,以期为食源性致病菌的安全防控提供科学依据。     

细菌活的非可培养状态的分子生物学检测技术研究进展

许多细菌在不良环境下能进入活的非可培养状态(viable but nonculturable state,VBNC)。细菌培养技术常常造成VBNC状态的细菌漏检,应用分子生物学检测技术可以提高VBNC细胞的阳性检出率。针对VBNC细胞的分子生物学检测技术,基于细菌特异性DNA分子、mRNA分子是目前常用的检测方法,而利用报告基因(如绿色荧光蛋白基因)检测VBNC细胞是一种有效的方法。最近利用叠氮溴乙锭 (ethidium monoazide bromide,EMA)或者叠氮溴化丙锭 (propidium monoazide,PMA)联合PCR技术选择性抑制细菌死细胞扩增,该方法结合了EMA(PMA)选择渗透性和PCR特异性,作为一种区分细胞死活的方法,可以有效检测细菌VBNC细胞。     

细菌的活的非可培养状态及其研究进展

细菌的活的非可培养状态是指细菌具有生物活性和毒性,但用常规培养法检测不出来的一种特殊生理状态。由于这种状态在特定条件下可以复苏,将培养出来和致病,所以研究细菌的活的非可培养状态对正确地评价食品的卫生状况,改进检验方法具有重要的意义。本文介绍了细菌进入活的非可培养状态的各种诱导因素;活的非可培养状态细菌的生理特征;已研究的能进入活的非可培养状态的细菌种类;细菌的活的非可培养状态的检测方法;最后阐述了进行细菌的活的非可培养状态研究的重要意义。     

物理场加工中细菌活的非可培养状态相关研究进展

物理场加工技术是一类使用加热、加压和辐射等物理学方法的技术, 其中热加工、超声波、超高压和紫外辐照等技术已被广泛应用于食品加工。近年来多个报道显示, 在物理场加工中细菌可进入活的非可培养状态(viable but non-culturable, VBNC)。VBNC状态指微生物为了适应逆境而进入的一种特殊休眠状态, 在合适条件下能复苏, 甚至可能依然保持致病能力, 这提示我们应该对物理场加工食品的微生物安全予以高度重视。本文主要综述了物理场加工中食源性致病菌和腐败菌VBNC状态的研究进展, 并从共性机制的角度出发分析其形成原因。本文旨在为更好的应用物理场加工技术并保障食品安全提供新思路和新方向。     

啤酒腐败有害片球菌生物被膜形成活的不可培养状态研究

有害片球菌是啤酒酿造环境中较为常见且危害较大的腐败菌。作者比较了啤酒腐败有害片球菌生物被膜和浮游细胞进入活的不可培养（VBNC）状态的能力差异。将5种有害片球菌的浮游细胞和生物被膜细胞在啤酒中于26 ℃下进行培养,结果发现,生物被膜细胞和浮游细胞均可以被诱导进入VBNC状态,但形成VBNC状态的时间有所不同。生物被膜细胞进入VBNC状态至少需要70 d,而浮游细胞进入VBNC状态的时间为126~189 d。作者还用单叠氮丙啶与PCR相结合来扩增16S rDNA和horA基因,以证实生物被膜中VBNC细胞的存在。另外,与浮游细胞相比,生物被膜细胞对0.025 mol/L NaOH具有更强的抵抗力,而VBNC状态生物被膜又比同样状态下的浮游细胞具有更强的耐受力。综上所述,在啤酒酿造过程中,相比于浮游细胞,有害片球菌生物被膜在低pH、高浓度的啤酒花苦味物质、乙醇等压力条件下更易被诱导进入VBNC状态,而且还拥有更强的碱耐受力。     

食品中病原微生物快速检测方法研究进展

食品中病原微生物是影响食品安全性的最主要生物因素。本文综述了食品中病原微生物的快速检测方法研究进展，并对微生物培养法、免疫学方法和核酸分子杂交等现优检测方法进行了比较和评述。     

食源性微生物VBNC状态检测与分离方法的研究进展

在环境胁迫下,部分食源性微生物(大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、乳酸菌和酵母等)会进入活的非可培养状态(Viable but non-culturable,VBNC)得以存活。进入VBNC状态的微生物在细胞形态、代谢活性以及致病性等方面发生了变化,并且不能用常规的方法将其检出,因此给食品质量与安全带来了极大的挑战。本文总结了食源性微生物VBNC状态的发展趋势;简单介绍了食源性微生物VBNC状态的各种环境诱导因素、生理生化特性和复苏条件;着重论述了应用于食源性微生物VBNC状态的分子检测技术和噬菌体检测法,并讨论了方法的优缺点及优化方案。此外,本文还总结了分离和纯化VBNC状态微生物的方法并分析了方法的可行性,以期为进一步探究食源性微生物VBNC状态的生理特性,研发更加快速、简便和高效的检测分离方法提供参考。     

食源性致病菌核酸检测技术研究进展

近年来,食源性疾病的发病率逐年升高,已成为全球范围内的重大公共卫生问题。致病菌广泛存在于各种食品中,快速检测食源性致病菌,对提供安全的食物和预防食源性疾病具有重要的现实意义。由于传统食源性致病菌检测方法耗时耗力,因此建立食源性致病菌的快速检测技术尤为重要。食源性致病菌的核酸检测技术具有简便、耗时短、特异性强、灵敏度高等优点,已被广泛应用于食源性致病菌的检测。着重介绍近年来用于食源性致病菌检测的核酸检测技术,包括常规聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、多重聚合酶链式反应(multiplex-PCR,mPCR)、实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time PCR,qPCR)、环介导等温扩增反应(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)、聚合酶螺旋反应(polymerase spiral reaction,PSR)、重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA),并对其优缺点,以及适用范围进行总结,旨在为开发出简单、快速、有效、准确的检测方法提供一定的理论依据。     

一种检测活的非可培养状态空肠弯曲菌的新方法

为提高活的非可培养状态空肠弯曲菌的检出率,建立了一种免疫磁珠捕获-荧光聚合酶链式反应法。该法包括应用免疫磁珠技术制备弯曲菌免疫磁珠,以直接捕获受检样品中的空肠弯曲菌,并设计了检测空肠弯曲菌马尿酸酶(hipO)基因的引物与荧光标记探针。结果表明:磁捕获-荧光聚合酶链式反应法可直接检测空肠弯曲菌,无需增菌培养,具有灵敏度高、选择性好、简便、快速等特点,可在24h内完成样品中活的非可培养状态空肠弯曲菌的检测。     

我国冷藏熟制米面制品标准中微生物指标及限量要求的现状分析及制定建议

冷藏熟制米面制品属于近年来发展较快的冷藏类工业化餐饮食品,但目前行业标准尚属于空白,亟待制定。由于产品保存和食用特性,该产品微生物风险较高,在制定产品标准中需要重点关注微生物指标及限量要求。通过分析我国现有冷藏熟制米面制品领域的行业标准和地方标准,以及国际食品微生物标准委员会、国际食品法典委员会、欧盟、美国、加拿大、英国、澳大利亚和新西兰等国家、地区、组织标准或法规,对冷藏熟制米面制品中菌落总数、指示菌和致病菌等微生物指标设定特点和限量要求,提出了对冷藏熟制米面制品标准制定中微生物指标选择、限量要求和检测规则等思考和建议,为我国制定冷藏熟制米面制品行业标准等相关标准提供技术依据。     

单增李斯特菌非可培养状态的诱导与PMA-qPCR检测

在9%（w/v）NaCl条件下,通过温度、pH两种因素诱导一株单增李斯特菌进入\     

金黄色葡萄球菌活的非可培养状态的诱导和复苏

研究金黄色葡萄球菌活的非可培养状态（viable but non-culturable state,VBNC）的诱导和复苏方法。采用不同pH、温度、盐度、不同浓度的食品防腐剂山梨酸钾处理进行诱导;复苏则采用了直接升温处理、添加液体培养基升温处理、添加酵母液升温处理、添加吐温升温处理的方法。结果表明,经过不同温度和山梨酸钾诱导后的金黄色葡萄球菌进入了VBNC状态;其中诱导时间最短（76d）的条件是0.5mmol/L山梨酸钾、-20℃寡营养条件;采用BHI培养基升温的方法,以及添加0.5%和1%的吐温20和吐温80的培养液升温方法使进入VBNC状态的金黄色葡萄球菌得到复苏。VBNC状态的金黄色葡萄球菌在形态上发生了变化;复苏后的菌株除尿素酶阴性外,其他代谢特征均与标准菌株相同。      

油酸对米粉食味品质的影响研究

为改善米粉的食味品质,在制粉调浆过程中选择油酸作为食味品质的改良剂,通过改变油酸添加量、调浆温度、调浆速度、调浆时间,研究油酸对米粉质构、吸盐率、吸油率的影响.发现油酸添加量与米粉吸盐率、吸油率呈极显著正相关;添加0.9％的油酸,且在调浆温度为40℃、调浆速度为800 r/min、调浆时间6 min时,所得到的米粉的食...     

次氯酸钠诱导肠炎沙门氏菌活的非可培养状态形成及复苏过程研究

目的 研究不同有效氯浓度次氯酸钠溶液诱导肠炎沙门氏菌进入活的非可培养状态（viable but non-culturable state: VBNC）及复苏条件研究。方法 以不同有效氯浓度次氯酸钠处理肠炎沙门氏菌,分析肠炎沙门氏菌活的非可培养状态菌数及VBNC发生率的变化,结合扫描电镜观察肠炎沙门氏菌VBNC态细胞与正常细胞的形态差异,而后比较不同复苏条件的复苏效果,同时对复苏后的细胞生理活性进行评价。结果 40 mg/L有效氯浓度处理20 min可使活菌全部进入VBNC状态,细胞表面出现褶皱塌陷;高于60 mg/L有效氯浓度可全部杀灭,细胞出现断裂、破损;进入VBNC态的肠炎沙门氏菌在5种复苏处理下,均可恢复可培养性;在20 mmol/L丙酮酸钠×热激条件下恢复效果较好。pHi和胞内ATP显示复苏后细胞活性较正常细胞有所降低。结论 在食品生产、环境清洁中应注意次氯酸钠使用浓度,否则极易造成肠炎沙门氏菌VBNC态的形成和复苏,导致食品污染,从而增加食品安全风险。     

肉制品生产工艺对沙门氏菌活的非可培养状态的诱导及检测方法研究

目的 探索肉制品生产工艺对活的非可培养(viable but non-cultruable, VBNC)状态沙门氏菌的诱导因素,并建立一种快速检测肉制品中VBNC状态沙门氏菌的检测方法加以应对。方法 通过高温、低温、高渗透压、防腐剂、杀菌剂等生产工艺处理获取VBNC状态沙门氏菌,使用脱氧胆酸钠(sodium deoxycholate, SD)和PMAxx处理菌液,依据ttr基因进行荧光定量PCR(quantitative polymerase chain reaction, qPCR)建立SD-PMAxx-qPCR法进行检测。采用人工污染的方式对VBNC状态沙门氏菌进行检测和验证。结果 65℃处理40 min可使沙门氏菌快速进入VBNC状态,添加0.1 g/L山梨酸冷藏状态可使少量沙门氏菌缓慢进入VBNC状态。。SD-PMAxx-qPCR法能显著区分沙门氏菌的存活状态,最佳条件为0.08% SD,20 μmol/L PMAxx,黑暗孵育10 min,光解10 min。纯培养时活菌的检出灵敏度为100 CFU/mL,添加高浓度死菌时,检出灵敏度不变。通过人工污染添加至样品时,需要对样品进行涂布确认其沙门氏菌不可培养,通过100℃加热样品10分钟作为阴性对照,从而对比Ct值实现样品中VBNC状态沙门氏菌的检测。结论 沙门氏菌在肉制品生产过程中容易受到多种因素诱导进入VBNC状态,本研究建立了SD-PMAxx-qPCR法快速区分沙门氏菌的存活状态,可用于肉制品中VBNC状态沙门氏的检测,为肉制品安全生产提供技术保障。     

CRISPR-Cas12a在食源性致病菌检测中的应用

食源性致病菌快速检测方法对食源性疾病的高效预防和控制具有重要意义。CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)及相关蛋白(CRISPR-associated protein, Cas)构成的CRISPR-Cas系统是一种强大的基因编辑工具, 基于其对靶标核酸的特异性识别及切割活性, 应用于食源性致病菌检测中, 已成为快速检测方法研究的热点。CRISPR-Cas12a检测技术具有特异性强、灵敏性高的优点, 在食源性致病菌的检测中有着巨大的应用前景。本文主要介绍了CRISPR-Cas12a的作用机制, 重点综述了CRISPR-Cas12a结合多种核酸扩增技术在食源性致病菌检测中的研究进展, 进一步讨论了CRISPR-Cas12a在致病菌检测中存在的问题和不足, 对未来的研究前景进行了展望, 以期为更好地开发准确、快速灵敏的食源性致病菌检测技术提供参考和依据。     

Effects of potato starch on the characteristics,microstructures and quality attributes of indica rice flour and instant rice noodles

The effects of partial replacement (0%–20%, w/w) of rice flour by potato starch (PS) on the physicochemical properties, microstructures, texture and in vitro digestibility of indica rice flour (IRF) and instant rice noodles (IRN) were systematically investigated. Accordingly, the addition of PS significantly increased the peak viscosity (2876.00–3221.00 mPa·s) and tan δ values (0.14–0.22) but lowered the setback values (2169.00–1036.50 mPa) of the pastes. Rice noodles with 5%–15% PS (PS and IRF at the mixing ratios of 5:95, 10:90, 15:85 and 20:80, respectively) addition exhibited modulated appearance and textural properties. The mutually exclusive phosphate groups of PS facilitated the expansion of starch granules, contributing to the formation of more compact microstructure and higher-ordered crystalline structures (confirmed by scanning electron microscope and X-ray diffraction), endowing rice noodles with better cooking and digestive attributes, and visibly increased slowly digestible starches content (26.09%–31.34%). The quality attributes of rice noodles could be accurately predicted by the physicochemical properties of rice flour referring to Pearson’s correlation analysis. The study demonstrates that the blending of PS is both an effective and economical pathway in improving the nutritional and textural properties of IRN.     

超高效液相色谱-串联质谱法测定米粉和 河粉中的米酵菌酸

目的建立超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry, UPLC-MS/MS)测定河粉和米粉中米酵菌酸(bongkrekic acid, BA)的含量。方法试样经提取、净化、浓缩及过滤后,以0.1%甲酸水和乙腈作为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾离子源负模式检测,外标法定量。基于米酵菌酸色谱和质谱行为的研究,对其仪器测定条件进行优化,并对优化后的方法进行方法学验证。结果米酵菌酸在1～100μg/L浓度范围内线性良好,相关系数大于0.999。在2种基质不同加标浓度下,回收率80.6%～104.8%,相对标准偏差小于5%。米酵菌酸在2种基质中的检出限为0.1μg/kg,定量限为0.2μg/kg。结论方法灵敏度高、专属性好、准确可靠,适用于米粉和河粉基质中米酵菌酸的测定。     

弧菌VBNC状态的研究进展

细菌的活的非可培养(VBNC,VNC)状态是在不良环境下细菌具有生物活性和毒性,用常规培养法无法检出,却在一定条件下可以复苏并保存致病性的一种特殊生理状态。本文综述了三种常见致病性弧菌的活的非可培养状态下的生物学特性、形成机制及其复苏的研究。运用现代生物技术手段,深入地研究细菌的VBNC状态,对食品卫生与安全具有重要的意义。