直接多肽反应试验在化妆品检测中的应用

以OECD指南为基础,在实验室建立直接多肽反应试验(DPRA)方法并进行实验室内验证,同时评估该方法对测试化妆品配方致敏反应的可能性。依据OECD TG 442C指南,将受试物(包括化学品和化妆水配方)分别与半胱氨酸多肽和赖氨酸多肽以10:1和50:1的比例避光孵育24h,采用高效液相色谱法分析两种多肽的消耗,计算多肽消耗率并依据DPRA预测模型对受试物致敏性进行判定。由试验结果可知,DPRA可准确区分16种化学品的致敏性,检测结果与OECD TG 442C指南及文献中小鼠淋巴结试验(LLNA)结果一致;DPRA对3种化妆水配方检测结果分别为致敏物、致敏物、非致敏物,与多肽反应程度分别为中、低和无。     

应用DPRA替代方法评价3种香豆素类化合物的皮肤致敏性

应用直接多肽反应试验（DPRA）方法,对化妆品植物提取物原料中存在的蛇床子素、滨蒿内酯、东莨菪内酯3种未知致敏性的香豆素类化合物进行评价。3种香豆素类化合物与半胱氨酸多肽和赖氨酸多肽模拟的皮肤蛋白共同孵育,使用高效液相色谱法检测3种化合物的多肽消耗率。在标准色谱条件下,蛇床子素和滨蒿内酯与两种多肽的反应体系峰型均正常,东莨菪内酯与赖氨酸反应体系峰型异常,以体积分数0.1%的甲酸水-乙腈流动相体系对标准流动相体系进行优化后检测。结果表明：蛇床子素与半胱氨酸反应体系在反应24 h前产生沉淀,致敏性结果为不确定;滨蒿内酯多肽消耗率均值为6.95%,判定致敏性为阳性,反应等级为弱反应;东莨菪内酯的半胱氨酸多肽消耗率为75.82%,优化色谱条件后的赖氨酸多肽消耗率为80.46%,判定致敏性为阳性,反应等级为中度反应。阳性和阴性对照化合物的结果均与小鼠淋巴结试验（LLNA）致敏性结果一致,实验结果可为3种香豆素类化合物的致敏性提供参考和依据。     

基于荧光定量的人细胞系激发试验评价皮肤致敏性的研究

建立基于荧光定量(QPCR)的人细胞系激发试验(h-CLAT),探讨其在化学物和化妆品原料皮肤致敏性评价中的适用性。体外培养人急性单核细胞白血病细胞株THP-1,选用8种已知皮肤致敏特性的参照物处理THP-1细胞,通过QPCR检测CD86和CD54共刺激分子的m RNA水平,判定受试物是否具有潜在皮肤致敏性。同时对正在开发的两个化妆品新原料以及致敏物加标的一个植物提取物原料进行了预测。结果显示,当判断标准设置为当THP-1细胞存活率高于50%,MIF CD86大于等于120%和/或MIF CD54大于等于150%,h-CLAT能准确区分致敏物和非致敏物。此外,对致敏物加标的植物提取物原料也能提示其致敏风险。     

组合应用替代方法评价5种化妆品中常用防腐剂的皮肤致敏性

采用基于不良反应结局路径（AOP）开发的体外致敏性检测方法对5种常用防腐剂进行皮肤致敏性评估。根据整合测试和评估方法（IATA）的3选2原则，使用直接多肽反应试验（DPRA）和人细胞系活化试验（h-CLAT）分别对化妆品中常用的防腐剂苯氧乙醇、4-羟基苯甲酸甲酯、4-羟基苯甲酸丙酯、咪唑烷基脲和DMDM乙内酰脲进行检测。其中，直接多肽反应试验和人细胞系活化试验参照OECD 442C/442E指南的内容进行。实验结果显示，苯氧乙醇、4-羟基苯甲酸甲酯在DPRA和h-CLAT中均为阴性；咪唑烷基脲和DMDM乙内酰脲在2个试验中均表现出阳性结果；而4-羟基苯甲酸丙酯在DPRA中为阴性，h-CLAT中为阳性。该研究结果表明，甲醛释放体类防腐剂咪唑烷基脲和DMDM乙内酰脲是皮肤致敏物，而苯氧乙醇和4-羟基苯甲酸甲酯不是皮肤致敏物，基于文献调研结合更多的实验数据判定4-羟基苯甲酸丙酯为非致敏物。DPRA和h-CLAT的组合测试弥补了单一方法检测的局限性，适用于化妆品原料皮肤致敏性的初筛。     

采用DPRA替代方法评价3种香料的皮肤致敏性

采用直接肽反应试验(DPRA)对新铃兰醛、氯化苔黑醛和苔黑醛3种香料的致敏性进行评价.在本实验室建立DPRA方法,采用高效液相色谱仪测定新铃兰醛、氯化苔黑醛和苔黑醛及其他6种已知致敏性化合物的多肽消除率,并进行皮肤致敏性的预测判定.通过比较DPRA和小鼠局部淋巴结试验(LLNA)结果的一致性,判断方法的可行性,并最终判...     

氨基酸衍生物结合试验在化妆品检测中的应用

以OECD指南为基础，在实验室建立氨基酸衍生物结合试验（ADRA）方法并进行实验室内验证，同时评估该方法对测试化妆品配方致敏反应的可能性。依据OECD 442C指南，将受试物（包括化学品和化妆水配方）分别与半胱氨酸衍生物和赖氨酸衍生物以50∶1的比例避光孵育24 h，采用高效液相色谱法分析两种氨基酸衍生物的消耗，计算氨基酸衍生物消耗率并依据ADRA预测模型对受试物致敏性进行判定。同样条件下使用商业化ADRA试剂盒按照操作规程检测相同受试物的致敏性。由试验结果可知，实验室建立的ADRA方法可以准确区分13种化学品的致敏性，检测结果与OECD442C指南及文献中小鼠淋巴结试验（LLNA）结果一致，也与商业化试剂盒检测结果一致；ADRA对5种化妆水配方检测结果显示4种为致敏物、1种为非致敏物。     

ARE-Nrf2荧光素酶报告细胞株KeraSens构建及其在皮肤致敏预测中的应用

用分子生物学和基因工程技术,构建含人GSTP1抗氧化反应元件（antioxidant response element,ARE）和荧光素酶报告基因的HaCaT基因工程细胞株——KeraSens致敏细胞株,用于化妆品原料的皮肤致敏性预测。通过对20种化学品进行测试,并将预测结果与已知LLNA数据进行比较,该细胞株预测皮肤致敏物的灵敏度为100%,特异度为62.5%,准确度为85%,初步证明KeraSens细胞株具有预测皮肤致敏物的能力。通过与DPRA和h-CLAT试验方法组合使用,能够准确识别皮肤致敏物,结果与已知人体数据高度一致。     

超高效液相色谱串联三重四极杆质谱法检验婴儿护肤品中氟康唑等7中禁用组分

本工作将超高效液相色谱联用三重四极杆质谱技术应用于婴幼儿护肤品中氟康唑等7种禁用抗生素检验,即检测氟康唑,萘替芬,联苯苄唑,克霉唑,益康唑,灰黄霉唑,咪康唑等7种禁用抗生素组分。样品经过前处理后,过滤,用超高效液相色谱串联三重四级杆质谱法检测。超高效液相串联质谱法使用C_8柱分离;以及采用基于离子质荷比使离子轨道在震荡场中趋于稳定的四极杆质量选择器,实现多重质谱分析,从而获得上述待测物的结构信息。结果未检出上述禁用组分,检测结果为阴性,20批样品结果一致。本文建立的方法准确,可靠,快速,灵敏度高,可以提高检验员的工作效率,非常适合各行各业微量物质的检测。液质联用技术适合配有超高效液相色谱仪和质谱仪的实验室使用。     

皮肤致敏替代方法LuSens的建立与应用

建立皮肤致敏性体外检测方法 LuSens试验，同时评估该方法对我国化妆品原料致敏反应应用的可行性。参考OECD TG442D(Test Guideline No. 442D)标准指南建立方法，确定试验可转移性。对13种化妆品原料组分进行检测，其中10种受试物结果与小鼠局部淋巴结试验（local lymph node assay,LLNA）方法的结果一致，与LLNA相比总体准确性为83%(10/12);11种受试物结果与人体数据一致，与人体数据相比总体准确性为100%(11/11)。成功建立了LuSens检测方法并用于部分化妆品原料的致敏性检测，可较好地筛选皮肤化学致敏原。     

化妆品原料的过敏性体外方法——氨基酸衍生化反应法（ADRA）方法转化与验证

在皮肤致敏不良结果通路（AOP）的第一个关键事件中化学反应为亲电物质与皮肤蛋白中的亲核中心共价结合，即皮肤与物质接触后，可能与皮肤上的蛋白结合形成抗原，导致不良反应。采用半胱氨酸和赖氨酸衍生物替代皮肤组织，模拟皮肤蛋白与化合物结合，通过计算半胱氨酸和赖氨酸衍生物反应后耗竭值（百分比）将物质分类，以此区分皮肤敏化剂和非敏化剂，此种方法称之为氨基酸衍生化反应法（ADRA）。本实验选择10种致敏性已知的物质，探究ADRA方法用于化合物致敏性评价的准确度，并在10种物质中随机选取几种物质采用国内已转化验证过的方法直接反应多肽法（DPRA）对结果进行验证。结果表明，10种物质致敏性判定结果符合样品自身致敏性，认定ADRA致敏性判定准确度较好，可作为皮肤致敏AOP的第一个关键事件替代实验方法。     

皮肤致敏测试动物替代方法DPRA的建立和应用

皮肤致敏是化妆品原料安全性评估中的一项重要内容。按照ECVAM(European Centre for the Validation of Alternative Methods)的标准,通过对16个标准品进行检测,成功建立了DPRA(Direct Peptide Reaction Assay,直接肽链反应分析)实验方法。其检测结果的敏感性,特异性,准确性,S/NS的判定以及4 Class分别为81.82%,100%,77.8%,100%和94.7%。目前该方法已成功运用在实际工作中,并检测出多款具有引起皮肤致敏潜在能力的化妆品原料。     

基于皮肤模型与THP-1细胞共培养建立皮肤致敏体外检测方法的初步研究

建立了皮肤模型与THP-1细胞共培养方法,对石化产品进行了致敏性评价。不同浓度测试物与表皮模型作用15 min,去除受试物后孵育6 h,使用MTT法检测皮肤模型组织活率,利用流式细胞法检测THP-1细胞表面标志物CD86、CD54表达变化情况以及细胞活率。对上述参数进行统计学分析及是否存在剂量效应关系,判定测试物是否具有潜在致敏特性。对SLS、肉桂醛、柠檬醛的测试表明,该方法可以正确区分刺激物和致敏物;对4种未知润滑油添加剂的预测结果表明,HVI60、Cuvan826、ATM PAN为非致敏物,Irgamet30为致敏物,高浓度时可导致表皮组织和THP-1细胞活性降低及表面标志物CD86、CD54的特异性升高。     

A Rapid,Sensitive, and Selective Method for Quantitation of Lamprey Migratory Pheromones in River Water

The methodology of using fish pheromones, or chemical signatures, as a tool to monitor or manage species of fish is rapidly gaining popularity. Unequivocal detection and accurate quantitation of extremely low concentrations of these chemicals in natural waters is paramount to using this technique as a management tool. Various species of lamprey are known to produce a mixture of three important migratory pheromones; petromyzonol sulfate (PS), petromyzonamine disulfate (PADS), and petromyzosterol disulfate (PSDS), but presently there are no established robust methods for quantitation of all three pheromones. In this study, we report a new, highly sensitive and selective method for the rapid identification and quantitation of these pheromones in river water samples. The procedure is based on pre-concentration, followed by liquid chromatography/tandem mass spectrometry (LC/MS/MS) analysis. The method is fast, with unambiguous pheromone determination. Practical quantitation limits of 0.25 ng/l were achieved for PS and PADS and 2.5 ng/l for PSDS in river water, using a 200-fold pre-concentration, However, lower quantitation limits can be achieved with greater pre-concentration. The methodology can be modified easily to include other chemicals of interest. Furthermore, the pre-concentration step can be applied easily in the field, circumventing potential stability issues of these chemicals.     

30%噻嗪酮·啶虫脒可湿性粉剂超高效液相色谱定量分析

建立了在同一色谱条件下测定混剂中噻嗪酮和啶虫脒含量的超高效液相色谱法。采用ACQUITY UPLC BEHC18 1.7μm 2.1×50 mm（i.d.）柱分离,以甲醇＋水为流动相,在245 nm紫外检测波长下,经保留时间定性确证,峰面积外标法进行定量分析。结果表明：噻嗪酮与啶虫脒的线性相关系数分别为0.999 9和0.999 5;变异系数分别为0.31%和0.38%;平均回收率分别为98.69%和99.53%。     

Design and study of the potential of crosslinked cationic polymers as drug delivery systems for dermal application

Crosslinked carriers based on cationic monomer [2‐(acryloyloxy)ethyl]trimethylammonium chloride or 2‐(dimethylamino)ethyl methacrylate were developed and investigated as new platform for ibuprofen transdermal delivery. Series of networks of varied composition and structure were synthesized and characterized by FTIR spectroscopy and following swelling kinetics in different solvents. Dermal safety tests to examine the skin irritation and sensitization potential of the network films were performed in vivo. Chosen network compositions were loaded with ibuprofen by swelling in its ethanol solution. The structures of the drug carriers were investigated by scanning electron microscopy. Ibuprofen release from the developed drug delivery systems was followed in phosphate buffer solution at 37 °C. The investigation proved the feasibility of the developed cationic copolymer networks as effective platforms with modified ibuprofen release for potential dermal application. © 2018 Wiley Periodicals, Inc. J. Appl. Polym. Sci. 2018 , 135, 46420.     

温度对还原增感立方体氯化银乳剂中光电子衰减的影响

利用微波介电检测技术,测得还原增感立方体氯化银乳剂中自由光电子与浅束缚光电子衰减行为随还原增感温度的变化。实验发现还原增感温度变化会引起增感中心陷阱作用的变化:当还原增感温度较低时,增感中心起空穴陷阱作用,延缓光电子衰减;还原增感温度较高时,增感中心起深电子陷阱作用,加速光电子衰减。由此,我们得到了确定最佳增感温度的依据。     

嘧菌酯·戊唑醇悬浮剂超高效液相色谱定量分析

建立了在同一色谱条件下测定混剂中嘧菌酯和戊唑醇含量的超高效液相色谱法。采用ACQUITY UPLC BEH C18 1.7μm 2.1×50mm(i.d.)柱分离,以甲醇+水为流动相,在225 nm紫外检测波长下,经保留时间定性确证,峰面积外标法进行定量分析。结果表明:嘧菌酯与戊唑醇的线性相关系数分别为0.9999和0.9999;变异系数分别为0.46%和0.40%;平均回收率分别为99.34%和99.40%。     

超高效液相色谱法测定天然原料中的香豆素含量

建立了超高效液相色谱法测定天然原料中香豆素的方法。以无水乙醇作溶剂,超声萃取5min,萃取液经0.22μm滤膜过滤后,用配置TUV检测器的超高效液相色谱仪于274nm波长下对6种天然原料中香豆素进行测定,结果表明：香豆素在0.5～8.0μg间呈线性关系（R=0.9999）。相对标准偏差为1.06%,回收率在97.3%～99.0%之间,检测限为11.02ng/g。     

Co-Application with Tannic Acid Prevents Transdermal Sensitization to Ovalbumin in Mice

Transdermal sensitization to allergens is of great concern as a sensitization route for food allergies. This skin-mediated invasion and sensitization to allergens is involved in skin barrier breakdown and inflammation, followed by the production of several kinds of cytokines. Cytokines such as thymic stromal lymphopoietin and thymus and activation-regulated chemokine are also involved. In this study, we investigated the suppressive effect of tannic acid (TA) on transdermal sensitization using ovalbumin (OVA), a major egg-white allergen. We also analyzed the mechanisms associated with the inhibitory effects of TA. The results showed that the co-application with TA prevents transdermal sensitization to OVA. As possible mechanisms, its anti-inflammatory and astringent effect on the skin and binding ability with the protein were considered. These results indicate that TA could be applied to cosmetics and lotions, which could suppress the transdermal sensitization to allergens.