纳豆芽孢杆菌液体发酵条件的优化

以纳豆芽孢杆菌为出发菌,以菌液浊度OD660nm值为指标,对纳豆芽孢杆菌液体发酵培养基的碳源、氮源、pH进行优化。并通过试验确定了纳豆芽孢杆菌的最适接种量和最优发酵条件。试验结果:最优培养基为2%葡萄糖、4%蛋白胨、0.5%NaCl,pH7。最佳接种量为5%培养16h的发酵液,最优培养温度和时间分别为35℃,18h。     

以豆粕为基质纳豆芽孢杆菌的固态发酵培养基的优化

以实验室选育的纳豆芽孢杆菌为出发菌株,以菌液浊度OD660NM为指标,通过单因素及正交试验法对纳豆芽孢杆菌的固态发酵培养基进行优化,确定了纳豆芽孢杆菌固体发酵的最佳培养基为:豆糖比7∶1,含水量1∶1.2(W/W),谷壳10g,NaCl0.5%,MgSO40.5%,K2HPO4,KH2PO40.5%,(NH4)2SO40.5%,pH:7.0。经37±1℃,培养48h,菌液浊度的OD660nm值最高,即培养的菌达最大生物量。     

纳豆芽孢杆菌固态发酵培养基的优化

为优化纳豆芽孢杆菌固态发酵培养基,采用微生物固态发酵技术,以固态发酵后的活茵数、芽孢教、蛋白酶及α-淀粉酶活力为指标,对纳豆芽孢杆茵固态发酵培养基组成及配比,添加碳源、氮源种类及浓度,培养基的含水量进行优化研究.试验结果表明,在玉米粉与麦麸配比3:7、葡萄糖2%、硝酸铵0.5%、本60%条件下发酵效果最好.     

纳豆芽孢杆菌的固态发酵条件

为了优化纳豆芽孢杆菌固态发酵条件,以活菌数和芽孢数为指标,采用微生物发酵技术,研究了种龄、接种量、培养基初始pH值和含水量对固态发酵的影响,并通过L9(34)正交试验确定了纳豆芽孢杆菌固态发酵最佳条件.试验结果表明:接种体积分数7%、种龄17 h、培养基初始pH值8.0、培养基初始水分质量分数70%,37℃固态发酵5 d效果最好,活菌数和芽孢数分别达到3.4×1010 cfu/g和1.8×109 cfu/g.     

以麦麸为原料固态发酵开发多菌种微生态制剂的研究

试验以麦麸为主要原料,采用固态发酵技术,以纳豆芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌为发酵菌种,以活茵数为指标,通过单因素和L9(34)正交试验确定了双菌混合发酵的最佳条件.结果表明:先接入纳豆芽孢杆菌,发酵3 d后接入嗜酸乳杆菌再共同培养3 d、培养基初始含水量80%、pH值7.0、纳豆芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌接种比例为4:6、接种量10%、发酵温度37℃的发酵效果最好.在此条件下发酵后,纳豆芽孢杆茵数为9.8×109cfu/g,嗜酸乳杆菌数为7.1×109cfu/g.     

动物肠道益生菌地衣芽孢杆菌的筛选及培养基的优化

为了研制新型微生态制剂,以常用益生菌株———地衣芽孢杆菌(bacillus licheniformis)为试验菌株,在测定了初发菌株的极限耐受性后,运用紫外诱变技术筛选到了一株耐酸性较强、耐胆汁、耐高温的地衣芽孢杆菌D-11。其极限耐受条件为:pH4·18,胆盐浓度0·4g/L,温度58℃。并通过试验对该菌株进行了形态和生理生化特征的鉴定。最后通过单因素和正交试验对地衣芽孢杆菌D-11的发酵培养基成分配比进行了选择和优化,为以后的工业化生产提供依据。结果显示当培养基的配比浓度为:玉米淀粉15g/L、豆粕粉90g/L、玉米浆6g/L时菌体的培养效果最好。     

固态发酵生产复合纳豆芽孢杆菌制剂

为了探索复合益生菌剂多菌种混合发酵条件,作者以活菌数为指标,采用固态发酵技术,研究了接种比例、接种量、培养基初始pH值、含水量、发酵温度和时间对固态发酵的影响,并通过L9(34)正交试验确定了纳豆芽孢杆菌和啤酒酵母混合固态发酵最佳条件.结果表明:培养基初始含水量70 %、pH 6.5、纳豆芽孢杆菌和啤酒酵母接种比例为1∶1、接种体积分数10%、发酵温度34 ℃、发酵5 d的效果最好.在此条件下发酵后,纳豆芽孢杆菌数为1.96×1010 cfu/g,啤酒酵母数为1.68×109 cfu/g.     

低嘌呤、高酶活纳豆芽孢杆菌液态发酵条件的优化

采用比浊法连续测定OD660nm值,绘制菌种生长曲线,研究纳豆芽孢杆菌种子生长条件,确定最佳接种时间为12h。并用单因素和正交设计实验的方法对纳豆激酶发酵条件进行优化,确定发酵条件的最优组合(g/L):全豆豆粉20,乳糖20,酵母浸膏10,KH2PO40.1,K2HPO4·3H2O 0.1,MgSO4·7H2O 0.5,NaCl 10,CaCl20.3,发酵液初期pH7.0,接种量2%,装液量30mL/50mL,摇速100r/min,发酵温度37℃,发酵时间36h。同时,优化后酶活由1005.77IU/mL提升到2835.50IU/mL,嘌呤总量由65.56mg/L降低到29.36mg/L,优化结果较为显著。     

纳豆芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌混合发酵过程中营养物质变化的研究

以麦麸、豆粕、玉米粉为基质,纳豆芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌为试验菌株,采用固态发酵的技术,对其发酵过程中的活菌数和营养物质进行分析测定.结果表明:发酵后纳豆芽孢杆菌数为9.8×109cfu/g,嗜酸乳杆菌数为7.1×109 cfu/g,蛋白酶活力达到2 240.9 U/g,粗蛋白质含量比发酵前增加了1.3个百分点,肽和氨基酸含量均为发酵前的4.5和3.4倍.     

固态发酵条件对纳豆激酶活性的影响及发酵条件的优化

为获得在黄豆基质上生长良好的纳豆杆菌分泌的纳豆激酶最优的发酵条件,以A和B两种不同的纳豆芽孢杆菌为发酵菌种,在固体培养基上,在优化黄豆粉碎方式、纳豆杆菌接种量和发酵时间3个单因素条件下,通过Box–Behnken实验设计,优化纳豆激酶的发酵条件。结果表明,纳豆杆菌在黄豆固体培养的最佳发酵条件为:固体培养基于121℃,30 min灭菌,1/2粒黄豆上接种11%的纳豆杆菌,发酵45 h后,纳豆激酶酶活达到1408 U/g,较未优化之前酶活提高了668 U/g,说明通过优化发酵条件,可以提高纳豆激酶酶活。     

响应面法优化纳豆菌液态发酵产抗菌物质条件的研究

本文利用豆粕水解液为基质对纳豆菌液态发酵产抗菌物质进行研究。采用Plackett-Burman的实验方法对影响纳豆菌发酵产抗菌物质的因素进行综合评价,筛选出具有显著效应的三个因素:麸皮含量、温度、初始pH;通过最陡爬坡实验接近最大响应区域;利用响应面实验进一步确定主要影响因子的最优条件:麸皮含量29.6g/L、温度33℃、初始pH7.4,在此条件下对纳豆菌发酵,△OD值为0.416,抗菌粗提液抑菌率达56.6%。      

培养条件及表面活性剂的添加对纳豆芽孢杆菌生物膜形成的影响

采用改良的微孔板法培养纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtilis natto),通过结晶紫染色定量分析产生的生物膜。结果表明:培养条件为pH 7、温度37℃、培养72 h且在5 g/100 mL葡萄糖-5 g/100 mL NaCl条件下成膜能力最佳。柠檬酸二铵和聚乙二醇-200(polyethylene glycol-200,PEG-200)随着质量浓度的增加对生物膜的形成量呈现先下降后上升的趋势,十二烷基磺酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)抑制生物膜的形成,十六烷基三甲基溴化铵(cetyl trimethyl ammonium bromide,CTAB)促进生物膜的形成。所以低温抑制生物膜的形成,一定浓度的NaCl和葡萄糖促进生物膜形成,不同的表面活性剂对其生物膜的影响机制不同,为纳豆芽孢杆菌生物膜的研究提供理论基础。     

豆粕混菌液体发酵制种技术试验研究

利用热带假丝酵母和枯草芽孢杆菌混菌发酵进行液体制种。结果表明:受接种量、豆粕含量和培养温度的影响,两株菌种菌数的增长速度具有相对一致的变化趋势;受培养时间的影响,热带假丝酵母菌先增后降,枯草芽孢杆菌先降后增;热带假丝酵母在pH3.5时菌数最大,枯草芽孢杆菌在pH4.5～7.5范围内适宜生长。在豆粕质量分数15%、葡萄糖质量分数1%、初始pH4.5的液体培养基上,两菌分别接种10%,在发酵温度28℃、摇床转速160r/min条件下培养5d,热带假丝酵母菌和枯草芽孢杆菌菌数达到最大,分别为752.5×106和264.2×107 cfu/ml。     

植物乳杆菌YSQ 规模化生产的低成本培养基配方优化

通过单因素试验、Plackett-Burman试验设计及响应面法筛选适于植物乳杆菌YSQ株大规模发酵的低成本培养基。结果表明：单因素试验确定培养基成分：碳源为玉米粉、次粉+蔗糖;氮源为豆粕;番茄汁作为生长因子供体。利用Plackett-Burman试验设计筛选出影响植物乳杆菌生长的4个主要因子：次粉、豆粕、K2HPO4和MnSO4。最陡爬坡、中心优化组合及响应面分析确定培养基各组分的最适添加量为：玉米粉10g/L、豆粕15.5g/L、次粉1.2g/L、蔗糖5g/L、番茄汁150mL/L、K2HPO4 1.1g/L、MnSO4 0.28g/L、MgSO4 0.3g/L。优化后,植物乳杆菌发酵18h的菌落总数从优化前的8.73×108CFU/mL(玉米粉、豆粕、次粉的混合料)提高到2.68×1010CFU/mL。     

纳豆芽孢杆菌液态发酵生产γ-聚谷氨酸

对纳豆芽孢杆菌CICC 20643液态发酵生产γ-聚谷氨酸(γ-PGA)的工艺进行了研究。采用单因素实验和正交实验获得了生产γ-PGA的优化培养条件:蔗糖25g/L,酵母膏5g/L,谷氨酸钠40g/L,装液量70mL/250mL锥形瓶,起始pH6.5,菌种在37℃、120r/min培养24h后,于培养基中添加5%NaCl,继续培养24h,γ-PGA的产量达到18.04g/L。实验结果表明:纳豆芽孢杆菌CICC20643是一株产γ-PGA优良菌种,在发酵过程中添加NaCl的工艺能明显提高γ-PGA的产量。     

Actinobacillus succinogenes NJ113利用豆饼粉为氮源发酵制备丁二酸

考察了不同廉价氮源对A.succinogenes NJ113发酵产酸的影响,结果显示豆饼粉效果较佳。考察A.succi-nogenes NJ113以豆饼粉为氮源发酵制备丁二酸对菌体生长和产酸的影响。结果表明,A.succinogenes NJ113能够利用豆饼粉作氮源发酵制备丁二酸。单独以豆饼粉为氮源时菌体最多能消耗50 g/L初糖。在3 L发酵罐上进行分别以15.53 g/L豆饼粉和10 g/L酵母粉为氮源对A.succinogenes NJ113进行发酵,其中以豆饼粉为氮源时丁二酸产量为35.20 g/L,收率为70.40%,与酵母粉发酵效果相当,副产物甲酸、乙酸浓度分别由9.49 g/L和6.27 g/L降至4.44 g/L和1.14 g/L,乳酸浓度由0.44 g/L增加至2.91 g/L,发酵时间由20 h延长至48 h。以葡萄糖为碳源时,豆饼粉最多能替代6 g/L酵母粉进行发酵,并且最多能消耗100 g/L初糖,丁二酸产量达71.30 g/L。     

不同有机氮源对发酵法生产肌苷影响的研究

以枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）HX1026为研究对象,研究大豆蛋白胨、酵母粉、玉米浆干粉和豆粕水解液4种有机氮源对 发酵法生产肌苷产量的影响。 结果表明,以豆粕水解液为有机氮源时,肌苷产量高于其他有机氮源,其中山东1号豆粕水解液摇瓶发 酵肌苷产量最高,达到31.2 g/L。在20 L发酵罐验证实验中,肌苷产量达到51.2 g/L,发酵罐中肌苷晶体的形成过程清晰可见,进一步证 实山东1号是最适合B. subtilis HX1026发酵生产肌苷的有机氮源。 山东1号的主要技术参数如总氮含量、氨基氮含量、氨基氮/总氮比 值分别是3.22%、2.06%、0.639,可以作为肌苷发酵生产过程中选择有机氮源的标准,以确保肌苷发酵过程的稳定性。     

Growth characteristics of Bacillus subtilis (natto) in milk

In this paper, Bacillus subtilis (natto) was incubated to develop a possible functional ingredient in ice cream. A lab‐scale culture revealed that incubation in the sterilised milk without dilution and concentration at 37°C for 28 h could obtain ideal growth characteristics of Bacillus subtilis (natto), especially with continuous aeration. Following freezing operation of the cultured milk, survival content of Bacillus subtilis (natto) was at 49–92%, while nattokinase activity was conserved at 62–98% comparing with the initial contents, which indicating a potential for application of natto functional ingredient in frozen milk products.     

纳豆菌液态发酵荞麦产纳豆激酶及其代谢特性分析

对纳豆枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis natto）液态发酵荞麦产纳豆激酶揺瓶、2.5 L发酵罐条件进行优化。对比自制大豆分离蛋白酶解物与商业大豆蛋白胨作为补充氮源时菌体生长规律以及代谢物质（酶、可溶性蛋白、还原糖、多酚及抗氧化物质）变化规律。纳豆菌液态发酵荞麦产纳豆激酶2.5?L发酵罐最优条件为荞麦浸泡6?h后,按料液比1∶10（g/mL）加水打浆,加入0.4%?α-淀粉酶,90?℃加热40?min,补充NS37071酶解12?h时所得酶解物,调节发酵培养基pH?7.0,接种量3%,通气量3.5?L/min,转速300?r/min,装液量1.2?L,发酵36?h。与商业大豆蛋白胨相比,补充大豆分离蛋白酶解物时,纳豆菌生长对数期较长,可溶性蛋白与还原糖的消耗量较大,在36?h趋于平稳,纳豆激酶活力持续上升至36?h达到最大值,酚类物质比溶出速率在12?h达到最大值,抗氧化物质比生成速率在6?h达到最大值。以荞麦为原料,补充自制大豆分离蛋白酶解物,通过优化纳豆菌液态发酵条件,可制备具有高纳豆激酶活力（152.5?FU/mL）、富含谷物多酚（0.109?mg/mL）且具有强抗氧化活性（27.43?μmol/mL）的发酵产物。     

具纤溶活性菌株ND2的筛选及其纳豆激酶基因的克隆、表达

从市售的纳豆制品中分离并纯化出一株具有高效纤溶活性的菌株ND2,经生理生化特性及16SrRNA序列分析鉴定为芽孢杆菌属的枯草芽孢杆菌。通过正交试验优化菌株ND2的发酵条件,得到ND2产纳豆激酶的最佳条件:氮源-大豆蛋白胨,碳源-淀粉,碳氮比3:1,37℃,pH6.0。经PCR扩增得到825bp的纳豆激酶成熟肽基因,采用pET32a(+)表达载体和BL21(DE3)为宿主菌,在温度为37℃、1‰IPTG浓度下可诱导获得较高表达量的重组纳豆激酶。