食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测能力验证结果与分析

通过能力验证试验验证本实验室掌握食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检测能力情况,维护、巩固本微生物实验室能力及质量控制水平。参考ACAS-PT903 (2020)参试指导书、《食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验》(GB 4789.30—2016第一法),采用BAX system Q7全自动病原微生物检测系统进行筛检,API Listeria李斯特菌属鉴定试剂盒、VITEK 2 compact全自动微生物鉴定系统进行可疑菌株的鉴定。结果表明,参试编号为20-Y466、20-Y863的样品均检出单核细胞增生李斯特氏菌。本实验室参加中国检验检疫科学研究院测试评估中心组织的ACAS-PT903食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测能力验证结果评价为满意。     

食品中单核细胞增生李斯特氏菌能力验证结果分析与讨论

目的:通过检验食品中单增李斯特氏菌了解实验室关于食品中微生物的检验和检测水平,通过检验技术的更新和检测方法的不断优化,增强实验室整体竞争能力,提升食品检验检测机构检验能力,使微生物实验室外部质控水平得以维护和巩固。方法:利用BAX Q7对能力验证中的3个样品进行快速筛查,严格依据《食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验》(GB 4789.30—2016),对疑似菌进行鉴定。结果:编号为270的样品检出为单增李斯特氏菌,编号为318和159的这两个样品中均未检出该致病菌,经过进一步实验,发现这两个样品中的致病菌为英诺克李斯特氏菌。结论:本实验室顺利完成本次能力验证,结果较满意。综上表明本实验室具备检验检测单增李斯特氏菌的能力,且检测方法和结果具有一定的准确性。     

食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测能力验证

目的通过能力验证提升食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测能力和实验室质量管理水平。方法依据GB 4789.30-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验》进行检测,利用BAX system Q7全自动病原微生物检测系统对能力验证中的3个样品进行快速筛查,采用VITEK2COMPACT全自动细菌鉴定系统、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)和溶血素O基因(hlyA)序列比对分析鉴定可疑菌株。结果编号CODE1和CODE3的样品检出单核细胞增生李斯特氏菌,编号CODE2的样品未检出。结论本实验室参加了中国食品药品检定研究院组织的食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测能力验证测试,取得了满意的实验结果。     

食品中微生物检测能力验证结果与分析

目的提高实验室检验人员微生物检测能力和水平,增强实验室竞争力。方法实验室参加中国检验检疫科学研究院测试评价中心组织的食品中单核细胞增生李斯特氏菌、副溶血性弧菌2项检验能力验证。按照盲样作业指导书的要求对样品进行前处理后,依据GB4789.30-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验》和GB 4789.7-2013《食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》进行定性检测。结果样品17-P842鉴定出单核细胞增生李斯特氏菌,样品18-E886鉴定出副溶血性弧菌。结论本次能力验证结果满意,为今后实验室检测实际样品提供参考经验。     

实时荧光PCR法和国标法检测乳粉中单增李斯特菌的比较研究

目的 提升实验室检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌的速度和准确性。方法 依据《GBS4789.30-2016S食品安全国家标准S食品微生物学检验S单核细胞增生李斯特氏菌检验》和能力验证作业指导书对食品中单核细胞增生李斯特氏菌进行检测, 同时利用实时荧光PCR法对能力验证中的2个样品进行快速筛查,采用VITEK2 Compact30全自动微生物鉴定系统鉴定可疑菌落。结果 GB 4789.30国标法和实时荧光PCR快速筛查法检测,结果均为样品CODE:FC02220028单核细胞增生李斯特氏菌阳性, 样品CODE:FC02220098阴性。结论 本实验室参加了中国食品药品质量检定研究院组织的食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测能力验证,取得了满意的结果。     

乳粉中单核细胞增生李斯特氏菌能力验证结果分析

摘要：目的 对本实验室单核细胞增生李斯特氏菌检测能力进行验证,以提高或保证实验室能力验证工作中对单核细胞增生李斯特氏菌检测结果的准确性。方法 按照样品的作业指导书开启样品,按照GB 4789.30-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验》进行检验,同时用MALEI-TOF-MS质谱仪对可疑菌进行鉴定,对2种方法结果进行比对。结果 FC02220009样品检出单核细胞增生李斯特氏菌;FC02220080样品未检出单核细胞增生李斯特氏菌。国标方法和MALDI-TOF-MS方法鉴定结果一致。结论 为保证检验结果准确可靠,避免假阴性出现,可多种鉴定手段同时进行。     

FAPAS乳粉中单核细胞增生李斯特菌能力验证结果分析与讨论

为了提升食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测能力,本实验室参加了FAPAS分析实验室能力验证机构组织的实验室能力验证,分别运用国标方法、分子生物学方法和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法对样品进行检测鉴定。结果表明,M224d02-A样品检出单核细胞增生李斯特氏菌,M224d02-B样品检出英诺克李斯特菌,属于李斯特氏菌属。2个样品检验结果均取得满意结果。     

单核增生李斯特氏菌检测能力验证结果分析

目的验证本实验室对食品中单增李斯特氏菌的检出能力。方法按照能力验证作业指导书、GB4789.30-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌》和SN/T 1870-2016《出口食品中食源性致病菌检测方法实时荧光PCR法》进行检验。首先进行2次前增菌,再按照国标法进行选择分离、纯化、生化鉴定进行检验;同时利用增菌液进行实时荧光PCR方法检验。结果国标法和实时荧光PCR法检验结果均为CODE 40样品检出单增李斯特氏菌,CODE 61样品未检出单增李斯特氏菌。结论组织者对本实验室此次能力验证试验结果评价满意,说明本实验室同时具有传统国标法和实时荧光PCR法检测单增李斯特氏菌的能力。     

食品中单增李斯特菌检出的能力验证

能力验证是利用实验室间比对来判定实验室或检查机构能力的活动,能够有效评价参加实验室或检测机构的检测能力水平,也是实验室或检测机构进行自查和外部质量控制的一种重要方式~([1])。本文通过探讨食品中单核细胞增生李斯特氏菌(以下简称单增李斯特氏菌)检出能力验证的过程,为今后实验室致病性微生物的检出能力提供参考依据。方法:依据食品安全国家标准《食品微生物学检验食品中单核细胞增生李斯特氏菌检验》(GB 4789.30-2016)。结果:两个考核盲样结果均为检出。结论:本次能力验证结果经考核组织机构反馈为"首次满意"。     

单核细胞增生李斯特氏菌国家标准检验方法的验证与探讨

本文旨在验证、分析和探索食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检验方法。方法:依据GB4789.30-2016,首先将实验样品预增菌24 h后,之后,用李斯特氏菌显色培养基和PALCAM琼脂分离培养,将菌株进行染色显微镜观察、动力试验、生化鉴定、溶血试验、协同溶血试验、李斯特氏菌属鉴定试剂盒、全自动微生物生化鉴定仪等鉴别菌种的方法。结果:实验样品和单核细胞增生李斯特氏菌以及伊氏李斯特氏菌菌落均在李斯特氏菌显色培养基上呈蓝绿色,周围环绕着白色晕圈,实验样本及4种李斯特氏菌标准菌株均是革兰氏阳性,短杆状,不产芽孢和荚膜;生化反应中与葡萄糖、MRVP、麦芽糖、七叶苷、甘露醇等发酵反应结果一致。除了伊氏李斯特氏菌在木糖发酵管中反应呈黄色,为阳性外,其他李斯特氏菌菌株都呈绿色,为阴性。在溶血反应中,英诺克李斯特氏菌在血平板上没有溶血,为阴性,而其他菌株产生透明溶血圈,为阳性;由全自动微生物生化鉴定仪鉴定菌株均为李斯特氏菌属。结论:通过对国家标准测试方法—单增李斯特氏菌的验证,建议通过选择性培养基进行分离后,用木糖、鼠李糖生化反应区分单增李斯特氏菌与其他李斯特氏菌,最后用单增李斯特氏菌生化鉴定试剂盒验证,使检测效率提高同时也提升了检测的准确度。     

多方法分离鉴定食品中单核细胞增生李斯特菌

参加中国检验检疫科学研究院编号为ACAS-PT1343 (2022)的能力验证,该能力验证考核能否从人工污染的样品中检出单核细胞增生李斯特菌检验。对随机人工污染样品22-D378、22-G483进行单核细胞增生李斯特菌检验,采用国标法、酶联免疫法和荧光定量PCR技术3种检测方法,探讨食品中单核增生李斯特菌的快速检测及鉴定。试验结果表明,编号22-D378样品检出单增李斯特菌,22-G483未检出。在国标方法的基础上,辅助酶联免疫和荧光定量PCR技术进行检测,缩短了检测时间,特异性和敏感性均较好,3种方法互相补充可确保试验结果的准确性。     

食品中单核细胞增生李斯特氏菌的能力验证结果分析

为了提升实验室综合检测能力,保证日常出具的抽检结果准确可靠,本实验室参加了2022年南京市食品药品监督检验院组织的能力验证,能力验证结果评价为满意,表明实验室具备单核细胞增生李斯特氏菌的检验能力。     

食源性沙门氏菌鉴定和血清分型能力验证

目的验证本实验室在国家食品安全风险监项目中微生物检验能力和实验室质量控制水平。方法实验样品按照考核方作业指导书要求进行样品前处理后,参照GB 4789.4-2016《食品安全国家标准食品微生物学沙门氏菌检验》进行沙门氏菌检验,同时取增菌液与预增菌液使用全自动病原微生物检测系统进行鉴定。将全自动病原微生物检测系统鉴定结果与生化试验相结合进行对比,结果均符合沙门氏菌属的样品再进行血清学鉴定。结果编号2017S-16(3)-1样品检出鼠伤寒沙门氏菌,2017S-16(3)-2样品检出阿贡纳沙门氏菌,2017S-16(3)-3样品未检出沙门氏菌。本实验室顺利完成考核,结果与考核方一致。结论本实验室通过参加能力验证和质控考核,提升食品检验机构检验能力和实验室质控水平。     

巧克力中沙门氏菌检验能力验证的结果与分析

目的 参加由中国食品药品检定研究院负责实施的NIFDC-PT-135巧克力中沙门氏菌检验能力验证活动, 提高微生物实验室沙门氏菌的检验检测能力,对实验室进行质量控制。方法 按照NIFDC-PT-135《巧克力中沙门氏菌检验作业指导书》和GB 4789.10-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》条目要求对3件样品进行检验, 利用沙门氏菌生化鉴定盒和API20E生化鉴定试剂条进行鉴定。结果 样品编号为CODE: 0024的样品未检出沙门氏菌, 编号为CODE: 0754的样品检出沙门氏菌, 编号为CODE: 0883的样品未检出沙门氏菌。结论 本次实验室的能力验证试验结果为“满意”, 通过参加沙门氏菌的能力验证, 促进检测技术水平的提升, 为以后的工作开展提供技术储备。     

单核细胞增生李斯特氏菌能力验证样品的 制备与验证

目的研究制备适用于验证、评价实验室或检测机构检测能力的单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,LM)的能力验证冷冻干燥样品。方法对目标菌与干扰菌进行10倍梯度稀释,对不同稀释度的菌液进行菌落计数得到菌含量,确定单核细胞增生李斯特氏菌与干扰菌的添加量;对保护剂和预冻条件进行筛选优化,制备单核细胞增生李斯特氏菌能力验证样品。冻干样品采用西林瓶真空包装,4℃条件下冷藏保存,随机取样检测评估样品均匀性,并在210 d期间内定期抽样检测不同贮存温度下的冻干样品,检测评估样品的稳定性。结果每个冷冻干燥阳性样品最终添加目标菌单增李斯特菌和干扰菌分别为10~2 CFU/m L和10~4 CFU/m L;每个阴性样品添加干扰菌10~4 CFU/m L;最佳冻干保护剂的组合为海藻糖3%,脱脂奶粉8%,谷氨酸钠1.5%。检测结果显示PT冻干样品具有较好的均匀性和稳定性。结论建立的单核细胞增生李斯特氏菌能力验证样品制备方法与评估程序均为有效,适用于验证与评价实验室或检查机构检测能力,满足能力验证活动的要求。     

食品中李斯特氏菌的分离鉴定

英诺克李斯特氏菌与有毒性单核细胞增生李斯特氏菌的菌落特征和生化特征相似,仅溶血试验结果不同。本文通过对河南省濮阳市市售凉皮进行检验,分离纯化出一株李斯特氏菌,利用单增李斯特氏菌生化鉴定条进行检验,结果显示木糖和甘露醇两项生化试验结果为阴性,且溶血试验结果为阴性,符合英诺克李斯特氏菌的判定标准。同时,VITEK 2 Compact全自动微生物鉴定系统也准确鉴定出该菌为英诺克李斯特氏菌(概率为99%)。     

广州市市售食品中单核细胞增生李斯特氏菌监测结果分析

目的 分析广州市市售食品中单核细胞增生李斯特氏菌污染分布情况。方法 2013—2019年共采集16类共4905份食品样品，开展单核细胞增生李斯特氏菌监测分析。结果 按照食品安全国家标准（GB4789.30）中规定的食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检验方法开展检测。单核细胞增生李斯特氏菌检出阳性样品共71份，总体检出率为1.45%。不同食品类别中进口生畜禽肉检出率最高，达到了13.19%， 其次为国产生鸡肉 （5.51%）、水产肉糜（2.50%）、凉拌菜（1.67%）。第1季度检出率最高，为2.14%，最低的是第4季度（0.82%）。不同采样场所中采自网店的食品单核细胞增生李斯特氏菌检出率最高(26.04%)，其次为超市（2.38%），小摊贩所售商品无检出。预包装食品单核细胞增生李斯特氏菌检出率（5.78%）高于散装食品（0.86%）。结论 广州市市售食品存在不同程度的单核细胞增生李斯特氏菌污染，生畜禽肉是主要污染食品，相关政府部门应更有针对性加强监管，预防单核细胞增生李斯特氏菌食源性疾病的发生。     

可视化跨越式滚环扩增技术检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌

建立一种新型的单核细胞增生李斯特氏菌检测方法,即通过可视化跨越式滚环等温扩增（saltatory rolling circle amplification,SRCA）技术检测单核细胞增生李斯特氏菌。根据单核细胞增生李斯特氏菌hlyA基因序列设计引物,进行特异性验证,对灵敏度和人工污染样品的检出限进行测定。通过检测70?种实际食品样品对SRCA方法的敏感性、特异性和符合率进行评价。结果表明：所有单核细胞增生李斯特氏菌呈阳性结果,非单核细胞增生李斯特氏菌呈阴性结果,说明该方法特异性良好。SRCA方法的灵敏度为8.9×100?fg/μL,是传统聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）方法的1?000?倍,检出限为2.8×100?CFU/g,是传统PCR方法的1/1?000。在实际样品的检测中,SRCA方法与GB?4789.30—2016《食品微生物学检验?单核细胞增生李斯特氏菌》方法进行比较,其敏感性、特异性和符合率分别为100%、97.01%和97.14%。可视化SRCA技术具有操作简便、设备简单、特异性强、灵敏度高、检出限低、检测成本低等优点,适合在基层单位和中小型食品企业中推广应用。     

部分市售农副产品李斯特菌污染情况调查及毒力基因检测

目的了解上海市闵行区农贸市场食品中李斯特菌的污染情况及其毒力基因的携带情况。方法按国标方法GB/T4789.30—2008《食品卫生微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验》,采用科玛嘉显色培养基,对食品进行李斯特菌的分离、API试剂条进行生化鉴定,PCR扩增进行hly、prfA、plcB、actA、inlA和iap6种毒力基因的检测。结果320份样品中共检出李斯特菌36株,其中单核细胞增生李斯特菌10株;英诺克李斯特菌23株,其余3株。10株单核细胞增生李斯特菌hly、prfA、plcB、iap、inlA、actA6种毒力基因携带率分别为100%、100%、100%、100%、100%和0,即10株菌株actA基因全部缺失。结论本地区农贸市场食品存在李斯特菌的污染,生肉禽类食品中李斯特菌污染比较严重,应加强监督管理;单核细胞增生李斯特菌菌株actA毒力基因均表现为缺失,是否为本地区特性,还有待研究。     

双抗夹心ELISA方法检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌

采用0.5% 福尔马林灭活的单核细胞增生李斯特氏菌作为免疫原免疫日本大耳兔,获得抗单核细胞增生李斯特氏菌多克隆抗体,并以此多克隆抗体作为捕获抗体,以抗单核细胞增生李斯特氏菌Internalin A(InlA)单克隆抗体作为检测抗体,建立快速、特异的检测该菌的双抗夹心ELISA 方法。结果表明：该方法对单核细胞增生李斯特氏菌纯培养液的最低检测量为1.7 × 105CFU/mL。在检测食品样品的实验中,食品样本对本方法干扰较小,运用选择性增菌液进行前增菌可提高该方法的准确性。