呋喃唑酮代谢物单克隆抗体和胶体金免疫层析试纸条的研制

本研究旨在建立一种快速检测呋喃唑酮代谢物残留的方法。试验用呋喃唑酮代谢物的衍生物（CPAOZ）与牛血清白蛋白（BSA）的偶联物免疫小鼠,利用单克隆抗体技术制备杂交瘤细胞,用间接ELISA和间接竞争ELISA法对阳性克隆进行筛选。单克隆细胞株诱生腹水后,经纯化即为单克隆抗体,用于胶体金标记,制备呋喃唑酮代谢物胶体金免疫层析试纸条。融合后得到2株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株,其中4G3纯化后的抗体效价达到1:100万,对CPAOZ的50%抑制质量浓度（IC50）为1.7 μg/L,亲和常数Ka=1.6×109 L/mol。该抗体制备的胶体金试纸条的检测限为4 μg/L,与其他3种硝基呋喃代谢物的衍生物CPAHD、CPSEM和CPAMOZ均不存在交叉反应,对样品的检测与高效液相色谱结果一致。本研究制备了抗呋喃唑酮代谢物特异性单克隆抗体,并研制了以单抗为基础的胶体金免疫层析试纸条,能够实现呋喃唑酮代谢物残留的快速、灵敏的检测。     

草甘膦胶体金免疫层析试纸条的研制

基于竞争抑制免疫层析原理,开展茶叶中草甘膦快速检测试纸条的研制.采用柠檬酸三钠还原氯金酸制备了 20 nm胶体金颗粒,然后以胶体金为标记物制备草甘膦单克隆抗体-胶体金偶联物,以硝酸纤维素膜为固相载体,包被草甘膦半抗原-卵清蛋白偶联物为检测线、羊抗兔二抗为质控线,建立草甘膦的胶体金快速检测试纸条.同时优化了胶体金最适pH...     

T-2毒素胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制

应用胶体金免疫层析技术,研制出一种快速检测T-2毒素的方法。采用柠檬酸三钠还原法制备20 nm胶体金,标记抗T-2毒素多克隆抗体并喷于玻璃纤维上,T-2毒素偶联抗原和羊抗兔二抗分别结合于硝酸纤维素膜上,经过试纸条层析条件优化,依次将样本垫、金标结合释放垫、硝酸纤维膜和吸水纸组装切割成胶体金试纸条。测试结果表明T-2毒素快速检测试纸条的灵敏度为50μg/L,检测时间为10 min,批内和批间重复性好,保存期为3个月。使用简单方便,非常适合现场快速检测T-2毒素。     

单增李斯特菌胶体金免疫层析试纸条的研制

以单增李斯特菌(LM)内化素A蛋白(InlA)单克隆抗体为基础,研制其胶体金免疫层析检测试纸条。方法 采用DNAStar软件对LM inlA全长基因编码蛋白进行抗原表位分析,截取部分inlA基因片段构建原核表达质粒,诱导表达和纯化获得重组蛋白。以该蛋白免疫BALB/c小鼠,筛选高效分泌抗InlA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体;以双抗体夹心的原理研制胶体金免疫层析检测试纸条,并对其特异性、敏感性、稳定性进行评价。结果 筛选到2株高效分泌抗InlA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,抗体属于IgG1亚类,小鼠腹水抗体效价为1∶64000;研制的试纸条可与LM发生阳性反应,而与非LM李斯特菌、链球菌、鼠伤寒沙门菌、大肠杆菌O157∶H7等食源性致病菌均不发生阳性反应;LM纯培养物敏感性为2.4×10^5cfu/ml,模拟猪肉样品敏感性为4.0×10⁶ cfu/ml;4℃保存期可达16周以上。结论 研制的胶体金免疫层析试纸条具有快速、特异、敏感等优点,可以用于样品中LM的快速检测。     

纺织品中镉的胶体金免疫层析试纸条快速检测法

基于重金属镉单克隆抗体,研制了一种能简便快速筛查和检测纺织样品中镉的胶体金免疫层析试纸,优化了确定试纸的监测条件,并阐述该试纸的灵敏度、特异性和稳定性。结果表明,该试纸对纺织品中总镉含量和汗液中可萃取镉含量的检测限分别达到1 mg/kg和0.1 mg/kg,可在3~5 min内完成样品的定性或半定量测试;其灵敏度、特异性和稳定性均能满足实际样品的测试要求,适用于样品现场快速筛查和检测。     

一种检测盐霉素胶体金试纸条的研制及其应用

本研究应用盐霉素单克隆抗体研制出一种能够检测动物源性食品中盐霉素的胶体金免疫层析试纸条,检测限为20μg/kg,检测时间仅为15min,假阳性率和假阴性率均为0,符合《兽药残留检测试剂盒(条、卡)备案技术资料要求及审查工作程序》的要求.该试纸条能够应用于基层实验室的大批量样本检测,具有实际意义,并且未见免疫方法相关文献...     

免疫层析试纸条在食品安全检测中的应用

随着现代食品安全问题的日益凸显,研发快速、准确、低成本的食品安全检测方法具有重要意义。免疫层析试纸条作为一种常用的检测工具,已被广泛应用于食品安全领域。本研究旨在探究免疫层析试纸条在食品安全检测中的应用潜力。通过对相关文献进行综述,可知免疫层析试纸条具有高度的选择性和敏感性,能够迅速检测出食品中的有害物质和致病菌。此外,免疫层析试纸条还具有操作简便、不需要复杂仪器设备、检测周期短等优点,适用于在实验室和现场进行食品安全快速检测。     

一种多氯联苯胶体金免疫快速检测试纸条的研制

该研究制备了多氯联苯（PCB118）半抗原,基于该半抗原研制出一种能够检测饲料中多氯联苯的胶体金免疫层析试纸条。结果表明,该试剂条检测限为10 μg/kg,检测时间约为15 min,假阳性率和假阴性率均为0。与多氯联苯PCB52、PCB101、PCB28、PCB138、PCB153、PCB180等药物无交叉反应,特异性较好,12个月内稳定性指标均符合要求,技术指标均符合《农残办技术材料要求及审查程序》对快速检测产品的要求,该试纸条适用于基层实验室的大批量样本检测,具有实际意义。     

胶体金免疫层析试纸条技术及其在食品安全检测中的应用研究进展

本论文介绍了胶体金免疫层析试纸条技术的基本原理和制备方法,并概述了该技术在医疗检测、食品检测和重金属检测领域的应用研究进展,展现了胶体金免疫层析技术所具有的敏感性和特异性高、操作便捷及可快速判读结果等特点,同时也提出了此项技术目前所存在的一些局限性,并探讨了其在未来研究应用中的发展方向,为我国食品安全快速定量检测技术发展提供文献支持。     

一种异丙威胶体金免疫快速检测试纸条的研制

农产品的农药残留检测方法较多,异丙威作为速效性农药,应用较为广泛,但是检测异丙威的快速检测方法极少。该研究通过制备异丙威半抗原,研制出一种能够检测蔬菜、水果中异丙威的胶体金免疫层析试纸条。结果表明,该试纸条对蔬菜、水果等农产品中异丙威的最低检出限为10 μg/kg,检测时间仅为15 min,假阳性率和假阴性率均为0。与甲草胺、亚胺菌、乙霉威和异丁草胺等药物无交叉反应,技术指标均符合《农残办技术材料要求及审查程序》要求。该试纸条检测快速、便捷,能够应用到基层实验室的大批量样本检测,具有实际意义。     

树脂吸附结合近红外光谱同时检测小龙虾中铅、镉模型的建立

目的 建立树脂吸附结合近红外光谱模型同时检测大批量小龙虾中铅、镉含量的方法。方法 小龙虾经微波消解后, 用D405大孔吸附树脂吸附小龙虾消解液中的铅、镉, 采集吸附树脂的近红外光谱, 并采用一阶导数、小波变换、标准正态变换和多元散射校正进行光谱预处理, 选取较佳预处理方法, 结合竞争自适应重加权采样法进行最优波段选择; 利用偏最小二乘法建立最优定量预测模型, 并对模型进行外部验证, 探究模型预测准确度; 收集6个地区的小龙虾对模型进行应用验证, 探究模型实际应用可靠性。结果 D405树脂对小龙虾消解液中铅、镉的吸附率均达98.5%以上。经小波变换光谱预处理, 结合波段选择, 建立的铅、镉定量模型预测准确度较高, 校正集交叉验证均方根误差和相关系数分别为0.08、0.12及0.98、0.95; 外部验证集的预测均方根误差和相关系数分别为0.07、0.10及0.98、0.98。模型实际应用可靠, 铅、镉含量参考值与预测值之间偏差的标准差和相关系数分别为0.01、0.01及0.99、0.98。结论 建立的小波变换-竞争自适应重加权采样-偏最小二乘定量模型对小龙虾样品中的铅、镉含量都具有更好的预测效果, 树脂吸附结合近红外光谱可以用于同时检测大批量小龙虾中的铅、镉。     

玉米赤霉烯酮胶体金试纸条质量验证试验

目的验证玉米赤霉烯酮胶体金试纸条对玉米基质、小麦基质样品中玉米赤霉烯酮检测的准确性。方法根据试纸条说明书方法,将不同浓度系列的玉米基体和小麦基体质控样品进行前处理后,用试纸条测定其浓度。结果检测样品为玉米基体时试纸条间无显著性差异,相对准确率为99.5%,检测结果准确;小麦基体时,试纸条显著性差异为39.03(自由度df=1),相对准确率为80.5%,检测结果差异较大。结论该方法基本可行,适合对玉米中玉米赤霉烯酮的含量进行定性检测,不适合对小麦中玉米赤霉烯酮含量进行定性检测。     

野生与养殖克氏原螯虾游离氨基酸的组成及比较研究

为了研究克氏原螯虾水溶性滋味物质游离氨基酸的含量、组成及其呈味效果,分别对野生和养殖克氏原螯虾的虾肉和虾头中的游离氨基酸进行测定。结果显示：对克氏原螯虾虾肉呈味贡献最大的是精氨酸（Arg）,其含量占游离氨基酸总量的43.7%～48.6%,味道强度值（taste active value,TAV）为4.18～6.77,远高于其他游离氨基酸,提高鲜度的同时增加了呈味复杂性,其次是丙氨酸（Ala）和组氨酸（His）,其TAV值分别在1～2之间;对克氏原螯虾虾头呈味贡献最大的是赖氨酸（Lys）、Arg和谷氨酸（Glu）,其TAV值均在1.68～2.61之间。野生与养殖克氏原螯虾虾肉和虾头中主要游离氨基酸（free amino acid,FAA）的组成成分、含量和对呈味的贡献存在显著差异。     

重金属Cd与Cu在克氏原螯虾体内富集与释放规律

研究克氏原螯虾分别在Cd2+质量浓度为0、0.05、0.10 mg/L和Cu2+质量浓度为0、0.5、1.0 mg/L的单一水环境中暴露时,肝胰腺、鳃和肌肉对Cd和Cu的生物富集和释放特性。通过非线性拟合得到克氏原螯虾对Cd和Cu的生物富集动力学参数：富集速率常数k1、排出速率常数k2、生物富集系数（bioconcentration factors,BCF）和生物半衰期（T1/2）,并得出理论富集平衡状态时生物体内Cd和Cu富集量（ρAmax）。结果表明：克氏原螯虾的肝胰腺和鳃对水体中Cd2+和Cu2+都有很强的富集特性,且富集量与富集时间、水体中Cd2+和Cu2+的质量浓度成正相关;肌肉组织中富集规律则不明显。同种重金属在不同组织中的富集量不同,即重金属富集具有组织选择性：在分别含Cd2+和Cu2+的水体中暴露实验9 d后,3 种组织对Cd的富集量顺序为鳃＞肝胰腺＞肌肉;对Cu的富集量顺序为肝胰腺＞鳃＞肌肉。克氏原螯虾对Cu和Cd的富集代谢都较缓慢,暴露9 d仍未达到稳定。克氏原螯虾体内Cd和Cu的BCF范围分别约为2～207、3～226;T1/2分别约为3～29、7～36 d;在理论平衡状态下,鳃、肝胰腺和肌肉中Cu和Cd的ρAmax随着环境中Cu2+和Cd2+质量浓度的增大而增大,且呈正相关。     

东北鳌虾与克氏原鳌虾营养成分比较

为评估东北螯虾和克氏原螯虾的营养价值,采用常规营养指标测定方法对东北螯虾和克氏原螯虾肌肉营养成分进行测定,分析比较一般营养成份、脂肪酸和氨基酸组成。结果表明：东北螯虾的粗脂肪和粗蛋白含量略高于克氏原螯虾;东北螯虾和克氏原螯虾均含17 种氨基酸,氨基酸总量分别为15.18%、17.13%,必需氨基酸含量分别为6.25%、6.46%;东北螯虾和克氏原螯虾肌肉中脂肪酸以多不饱和脂肪酸为主,EPA 和DHA 总量分别为7.24% 和3.69%。东北螯虾和克氏原螯虾均是营养价值较高的淡水虾类,从必需氨基酸组成来看,克氏原螯虾肌肉营养高于东北螯虾,从EPA 和DHA 的含量来看,东北螯虾的脂肪酸营养价值高于克氏原螯虾。     

小龙虾主要过敏原精氨酸激酶的表达、纯化及 免疫原性鉴定

目的对纯化后的原核表达小龙虾主要过敏原蛋白精氨酸激酶进行免疫学鉴定。方法将化学合成的精氨酸激酶基因克隆至pET-28a(+)表达质粒上,转化进入大肠杆菌Rosetta(DE3)中,使用异丙基硫代半乳糖苷进行目的蛋白的诱导表达,用Ni~(2+)亲和层析柱对重组过敏原蛋白进行纯化,使用小龙虾过敏病人混合血清对纯化后的蛋白进行免疫印迹鉴定。结果纯化得到了分子量大小约为40 kDa的重组小龙虾精氨酸激酶,并且重组蛋白与过敏病人血清IgE有明显的特异性结合。结论本实验建立了小龙虾精氨酸激酶的原核表达方法,并鉴定了其免疫原性,为小龙虾过敏的基础研究、临床诊断与治疗奠定了基础。     

过氧乙酸和二氧化氯清洗剂对熟制小龙虾贮藏品质的影响

目的 研究过氧乙酸和二氧化氯清洗剂对熟制小龙虾贮藏品质的影响。方法 将小龙虾分别置于自来水(对照)、0.3 % 的过氧乙酸(Peroxyacetic acid,PA)、100 mg/L的二氧化氯(Chlorine Dioxide ,ClO2)中鼓泡清洗,清洗后的小龙虾熟制后在4℃贮藏,以菌落总数、挥发性盐基氮(TVB-N)、硫代巴比妥酸(TBA)、质构、色度、羰基含量、巯基含量为指标,分析清洗剂对熟制小龙虾贮藏品质和蛋白质氧化的影响。结果 贮藏24 d,对照组、 PA组和ClO2组 TVB-N值分别是35.03、29.39和30.74 mg/100g,TBA值分别是0.15、0.16、0.17 mg/kg;在贮藏过程中,结合水占比下降,不易流动水和自由水上升,羰基含量上升,总巯基含量下降,肌肉内部硬度上升;菌落总数结果表明PA和ClO2清洗能使小龙虾货架期延长6 d;与ClO2组相比,PA组的小龙虾尾肉硬度值偏大,蛋白羰基含量上升速率快。结论 综合菌落总数和理化指标结果考虑,推荐使用100 mg/L的ClO2进行小龙虾加工前清洗为宜。     

香辣克氏原螯虾头酱制备及其风味物质研究

为了提高克氏原螯虾加工副产品的利用率,开发一款香辣克氏原螯虾头酱。以克氏原螯虾头与鲜辣椒为原料,添加复合发酵剂,通过单因素与正交试验确定其最佳工艺为:克氏原螯虾头酶解液500g,鲜辣椒40%,复合发酵剂20%,发酵25h,发酵温度33℃。结合理化指标分析其风味物质,研究发现:成品香辣虾头酱共有51种挥发性风味物质,游离氨基酸共有16种,其中呈鲜味氨基酸4种,占游离氨基酸总量的24.13%,核苷酸以及关联化合物含量丰富。通过添加复合发酵剂制备的香辣克氏原螯虾头酱发酵周期短,感官品质佳,风味物质含量丰富,可以作为一款美味的调味品使用。     

不同炸制方式对克氏原螯虾脂肪氧化和挥发性风味物质的影响

通过测量过氧化值、酸值、茴香胺值、多稀释指数、脂肪酸和挥发性成分,研究了常压油炸（DF）和空气炸（AF）小龙虾在不同温度下（160、170、180、190 ℃）对脂肪氧化和挥发性风味物质的影响。结果表明：随着油炸温度的上升,过氧化值、酸价、多稀指数值都有上升趋势。在190 ℃时,常压油炸的过氧化值、酸价、茴香胺值、多烯指数显著高于空气炸制。特别是酸值达到了5.05 g/100 g。新鲜虾肉内存在大量不饱和脂肪酸,主要以油酸、亚油酸、DHA为主,通过常压油炸,虾肉内不饱和脂肪酸含量显著增长,空气炸虾肉内不饱和脂肪酸含量显著降低。在常压油炸虾肉中分别检测出17种、15种、20种、20种风味物质,而在空气炸油炸虾肉中分别检测出16种、13种、14种、17种风味物质,油炸虾肉风味主要是醛、醇类物质结合的贡献,而空气炸虾肉风味主要是醛类和烯烃类物质的贡献。常压油炸风味比空气炸制风味更为丰富,但从健康方面选择低温空气炸制方式较为可靠。该研究为优化克氏原螯虾炸制方式和温度的选择提供了理论依据。     

超声波协同流水净化对克氏原螯虾中菌落总数及菌相构成的影响

目的:研究超声波协同流水净化对活体克氏原螯虾携带的细菌数量及菌相构成的影响。方法:测定了净化过程中克氏原螯虾壳+肉、腮部和肠道部位菌落总数变化,并应用随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD)指纹图谱结合16S rDNA测序鉴定分析龙虾在净化处理前后不同部位的菌相构成。结果:超声波协同流水处理能够显著减少虾壳+肉、腮和肠道部位的细菌载量,降低量分别达到2.18、2.23、1.01(lg(CFU/g))。挑取的218个单菌落中存在21种不同的RAPD谱型,不同谱型的细菌属于9个属18个种,其中气单胞菌属、黄杆菌属、嗜冷杆菌属、希瓦氏菌属和肠杆菌属细菌为虾壳肉和腮中的优势菌群,净化处理后虾中分布的细菌种群数降低为6个属9个种,其中温和气单胞菌(Aeromonas sobria)、阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)、黄杆菌(Flavobacterium granuli)和腐败希瓦氏菌(Shewanella putrefaciens)是残留的优势细菌种群。结论:超声波协同流水净化对活体克氏原螯虾具有良好的减菌效果。