硒化乳酸菌胞外多糖对小鼠腹腔巨噬细胞及肿瘤细胞内游离Ca~(2+)的影响

目的:研究硒化乳酸菌胞外多糖对小鼠腹腔巨噬细胞、SGC7901胃癌细胞及海拉细胞(Hela cells)内游离Ca2+的影响。方法:分离制备小鼠腹腔巨噬细胞,利用Ca2+荧光探针Fluo-3/AM及激光共聚显微镜测定加药后10 min细胞内Ca2+浓度的变化。结果:添加硒化多糖后,巨噬细胞内Ca2+浓度缓慢升高,而胃癌细胞与Hela细胞内Ca2+水平均有不同程度的下降。结论:通过对乳酸菌胞外多糖进行硒化修饰可增强其刺激巨噬细胞的能力,因而发挥其免疫功效。硒化多糖与肿瘤细胞表面受体结合后引起细胞内Ca2+内流的减少,提示硒化后的多糖可引起肿瘤细胞不同程度的细胞凋亡。     

黑灵芝多糖对S-180荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞cAMP/PKA、IP_3/Ca~(2+)及DAG/PKC信号通路的影响

目的:探讨黑灵芝多糖(polysaccharide from Ganoderma atrum,PSG-1)对S-180荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)/细胞蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)、三磷酸肌醇(inositol triphosphate,IP3)/Ca2+及甘油二酯(diacylglycerol,DAG)/蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)信号通路的影响。方法:将S-180细胞接种于BALB/c小鼠体内建立荷瘤小鼠模型,成模后收集腹腔巨噬细胞进行体外培养,用不同浓度的PSG-1干预;ELISA法分别检测巨噬细胞培养上清液中的IP3、DAG和AMP含量;流式细胞仪测定细胞内Ca2+含量;Western blotting测定细胞PKA及PKC蛋白表达。结果:PSG-1在20~160μg/mL质量浓度范围能促进S-180荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞产生cAMP、IP3和DAG,同时能增加细胞内Ca2+含量,并显著增强PKA及PKC蛋白表达量。结论:PSG-1能有效激活S-180荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞cAMP/PKA、IP3/Ca2+及DAG/PKC信号通路。由此推测,PSG-1可能通过cAMP/PKA、IP3/Ca2+及DAG/PKC信号通路促进S-180荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞抗肿瘤作用。     

阿魏侧耳胞外多糖对小鼠巨噬细胞的激活作用

利用巨噬细胞体外培养体系,研究阿魏侧耳胞外多糖对小鼠巨噬细胞的激活作用。无菌获得小鼠腹腔巨噬细胞,中性红吞噬实验检测细胞吞噬活性;荧光探针标记和Griess反应分别检测细胞内外NO的含量,酶联免疫吸附法检测细胞内一氧化氮合成酶(NOS)、培养上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)和白细胞介素12(IL-12)的含量。结果表明,与空白组相比,25~200 mg/L阿魏侧耳胞外多糖可显著增强巨噬细胞的吞噬活性(p0.05),增加细胞因子IL-1(p0.05)和IL-12(p0.05)的分泌量;50~200 mg/L阿魏侧耳胞外多糖可显著提高细胞NOS(p0.05)和NO(p0.05)的含量以及TNF-α的分泌量(p0.05)。因此,一定浓度阿魏侧耳胞外多糖对体外培养的小鼠巨噬细胞具有激活作用。     

鸡腿蘑多糖免疫功能的初步研究

对鸡腿蘑发酵液胞外多糖和胞内多糖进行分别提取,做其对小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性和过氧化物酶活性的影响的研究,发现具有一定的刺激作用。其中各不同剂量组的胞外多糖对小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性有明显的增强作用,并且在实验剂量范围内呈随剂量增加而上升的趋势。另外,胞内多糖也有增强作用,但效果不明显,其中16mg/kg•d剂量组效果最好。胞内、外多糖对小鼠腹腔巨噬细胞过氧化物物酶活性也都有增强作用,并且效果与剂量关系呈倒“U”型,其中胞内多糖8mg/kg•d剂量组的增强作用最明显,胞外多糖16mg/kg•d剂量组最明显。     

硒化低聚氨基多糖对RAW264.7细胞的免疫调节作用

本实验旨在研究硒化低聚氨基多糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫功能的影响。用噻唑蓝比色法分别考 察硒化低聚氨基多糖、Na2SeO3对巨噬细胞RAW264.7增殖能力的影响,并观察巨噬细胞形态的变化。通过中性红 法、酶联免疫吸附测定法及实时荧光定量反转录聚合酶链式反应法分别检测巨噬细胞的吞噬能力、肿瘤坏死因子 （tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白介素（interleukin,IL）-6及IL-10细胞因子的分泌量及其mRNA表达水平。 结果表明：硒质量浓度为100～1 000 μg/L时,硒化低聚氨基多糖对细胞的相对增殖率无显著影响;而Na2SeO3的硒 质量浓度超过200 μg/L即对巨噬细胞RAW264.7产生细胞毒性作用。硒化低聚氨基多糖能增强巨噬细胞吞噬活性, 显著提高RAW264.7细胞TNF-α、IL-6及IL-10分泌量及其mRNA表达水平,且效果比Na2SeO3处理组、低聚氨基多糖 处理组及Na2SeO3＋低聚氨基多糖复合添加组好。实验结果提示硒化低聚氨基多糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7具有一 定的免疫调节作用。     

硒化乳酸菌胞外多糖对体外培养小鼠脾淋巴细胞分泌NO、IL-4及IL-12的影响

目的:研究硒化乳酸菌胞外多糖对体外培养小鼠脾淋巴细胞分泌NO,IL-4及IL-12的影响。方法:分离制备了小鼠脾淋巴细胞,用Griess法检测NO含量,双抗体夹心酶联免疫法检测IL-4和IL-12含量。结果:当多糖质量浓度为400μg/mL时,硒化EPS对ConA刺激的T淋巴细胞NO分泌量高于EPS。培养4 h后上清液中NO浓度显著升高,培养8 h达到最高。硒化EPS可抑制小鼠脾淋巴细胞分泌IL-4,400μg/mL硒化EPS对于ConA刺激的小鼠T淋巴细胞IL-12生成量影响最为显著。结论:硒化EPS在一定程度上影响小鼠脾淋巴细胞免疫功能,这可能是其免疫调控机理之一。     

阿魏侧耳胞外多糖对荷瘤小鼠免疫能力的影响

通过皮下注射小鼠腹水瘤细胞构建荷瘤小鼠模型,灌胃法给药,采用血液分析仪、细胞培养、酶联免疫吸附等设备和方法测定血液中白细胞和淋巴细胞数量、腹腔巨噬细胞吞噬能力、脾淋巴细胞增殖能力、免疫器官指数、血浆中肿瘤坏死因子-α含量等来研究阿魏侧耳胞外多糖对荷瘤小鼠免疫功能的调节作用。结果显示：与荷瘤对照组相比,灌胃100、200 mg/kg的阿魏侧耳胞外多糖可显著降低荷瘤小鼠瘤体质量（P＜0.05）、提高血液中白细胞和淋巴细胞数量（P＜0.05）、促进脾淋巴细胞的增殖（P＜0.05）,增加免疫器官指数（P＜0.05）和血浆中肿瘤坏死因子-α的含量（P＜0.05）;灌胃200 mg/kg的阿魏侧耳胞外多糖可以显著增强荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力（P＜0.05）。因此,一定浓度的阿魏侧耳胞外多糖可提高荷瘤小鼠的免疫能力。     

芦笋多糖对肿瘤小鼠红细胞离子通道活性的影响

目的:研究芦笋多糖对肿瘤小鼠红细胞离子通道活性的影响。方法:建立了肿瘤动物模型,分高、中、低剂量腹腔给予芦笋多糖7 d,采集并制备红细胞悬液,用试剂盒结合分光光度计测定肿瘤小鼠红细胞膜Na+,K+-ATPase、Ca2+,Mg2+-ATPase活性,采用Fluo-3/AM、MQAE、BCECF-AM荧光探针染色,使用激光共聚焦显微镜和荧光分光光度计分别测定小鼠红细胞内[Ca2+]、[CI-]、[H+]浓度的变化。结果:芦笋多糖能升高肿瘤小鼠红细胞膜Na+,K+-ATPase、Ca2+,Mg2+-ATPase活性,降低肿瘤小鼠红细胞内[Ca2+]浓度,增强红细胞阳离子通道转运活性。芦笋多糖能够降低肿瘤小鼠红细胞内[CI-]浓度,增强红细胞阴离子通道转运活性。芦笋多糖还能够降低肿瘤小鼠红细胞内的[H+]浓度,升高红细胞内pH,维持红细胞酸碱平衡。结论:芦笋多糖通过提高肿瘤小鼠红细胞膜离子通道的功能,稳定细胞内环境,从而有助于保护红细胞膜结构,维持红细胞发挥正常功能。     

乳酸菌胞外多糖硒化修饰及其抗氧化活性研究

探讨了乳酸菌胞外多糖硒化修饰的最佳工艺条件,以及硒化胞外多糖的抗氧化活性。通过单因素试验确定反应温度、反应时间、硒化剂添加量的取值范围,再用响应面设计法确定最佳硒化修饰条件。试验结果表明:反应温度、反应时间、硒化剂添加量显著影响乳酸菌胞外多糖硒化的程度,当反应温度50℃、反应时间13.5h、硒化剂添加量0.55mg时硒含量和硒转化率达到最大值。在此条件下,所得硒多糖硒含量169.228μg/g,硒转化率32.37%;硒化后的多糖总抗氧化能力及对羟自由基的清除能力显著增强,而对超氧阴离子自由基的清除能力变化不大。     

蜜环菌对硒的富集及多糖中硒的分布

采用不同的硒浓度对蜜环菌进行了补硒培养,研究了蜜环菌对硒的积累和存胞内外多糖中的分布.结果表明:菌丝体硒含量与多糖硒含量随着硒处理浓度的增加而增加,但硒积累量达到20mg/L后趋于稳定,胞内多糖的硒积累量达到10mg/L后趋于稳定,而胞外多糖硒积累量在硒处理浓度超过5mg/L后仍有增长趋势.     

镉胁迫下泡菜乳酸乳球菌的形态变化

通过扫描电镜和透射电镜分别观察不同质量浓度水平的Cd2+对泡菜乳酸乳球菌（Lactococcus lactis subsp.lactis）细胞的影响,扫描电镜结果显示：Cd2+质量浓度在0、10 mg/L时,泡菜乳酸乳球菌呈椭圆形、表面光滑、菌体生长繁殖旺盛,随着Cd2+质量浓度的增加菌体细胞表面产生白色颗粒状物质、菌体细胞存活数量大幅下降（OD600 nm值由1.336下降到0.515）。当添加200 mg/L Cd2+时,几乎没有见到明显的菌体、显示有少量棱形晶状物。透射电镜结果显示：当Cd2+质量浓度为0～50 mg/L时泡菜乳酸乳球菌结构完整、细胞内容物分布均、菌体生长较为正常,当菌体暴露于100、200 mg/L Cd2+时菌体细胞出现异常现象,如细胞破裂、内容物从薄膜穿孔中释放、质壁分离等。两类电镜结果均表明：在低质量浓度Cd2+（≤50 mg/L）胁迫下,对泡菜乳酸乳球菌的生长几乎不产生影响,添加Cd2+质量浓度上升到100、200 mg/L时泡菜乳酸乳球菌正常生长受到抑制。     

金雀异黄素对iNOS表达影响与抑制胃癌细胞增殖作用研究

为研究金雀异黄素对人胃腺癌细胞SGC 790 1增殖、DNA合成、一氧化氮产生量、一氧化氮合酶活性及其对诱导型一氧化氮合酶 (inducednitricoxidesynthase ,iNOS)基因表达的影响 ,应用MTT、3 H TdR掺入、DNA琼脂糖电泳、分光光度法、免疫组化及RT PCR方法 ,研究Gen抑制癌细胞生长的机制。结果表明Gen抑制SGC 790 1细胞的增殖、DNA合成 ,诱导细胞凋亡 ,并可显著诱导iNOSmRNA转录、增加iNOS蛋白表达 ,促进一氧化氮产生 ,提高一氧化氮合酶活性。为将Gen应用于胃腺癌的化学防治提供了实验依据     

Antioxidant and immunomodulatory activity of selenium exopolysaccharide produced by Lactococcus lactis subsp. lactis

Exopolysaccharide (EPS) was isolated and purified from Lactococcus lactis subsp. Lactis culture broth. Selenium chloride oxide (SeCl₂O) was added to the EPS to synthesize selenium-exopolysaccharide (Se-EPS). The in vitro and in vivo antioxidant and in vivo immunomodulatory activity of EPS and Se-EPS were compared. EPS and Se-EPS scavenged superoxide anions and hydroxyl radicals. They also increased catalase (CAT), superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GSH-Px) activity, while decreasing malondialdehyde (MDA) levels in serum and in the livers of mice. Se-EPS showed stronger in vitro and in vivo antioxidant activity than were shown by EPS. The in vivo immunoenhancement activity of EPS and Se-EPS induced by cyclophosphamide (CY) treatment in immunosuppressed mice was researched. EPS and Se-EPS treatments increased macrophage phagocytosis, spleen and thymus indices and haemolytic complement activity (HC₅₀). Se-EPS showed stronger immunomodulatory activity than did EPS.     

西藏灵菇发酵乳胞外多糖的流变学特性

以西藏灵菇发酵乳中分离纯化所得胞外多糖为研究对象,对其流变学特性进行了系统研究。结果表明,该胞外多糖的水溶液表现为典型的非牛顿假塑性流体特性,且其流动行为受胞外多糖的质量浓度、pH值、温度、离子种类和浓度的影响,具体表现为：胞外多糖溶液的黏度随胞外多糖质量浓度的升高而增加,质量浓度越高剪切稀释现象越明显;pH 4.0和pH 10.0时胞外多糖溶液黏度明显低于pH 7.0。Na＋可使胞外多糖溶液的黏度显著增大,且Na＋浓度越高,溶液黏度越大;Ca2＋可使胞外多糖溶液的黏度明显下降,但其下降幅度与Ca2＋浓度无关;温度在10～85 ℃范围内胞外多糖溶液的黏度变化很小,有很好的耐温性。加入10 mg/mL的该胞外多糖能够明显增加脱脂乳的黏度。     

双歧杆菌胞外多糖对酸豆乳品质的影响

为探索益生菌及其胞外多糖对酸豆乳的影响,利用产胞外多糖双歧杆菌及其活性多糖与传统发酵剂共同发酵豆浆,研究其对酸豆乳理化、感官及质构特性的作用。结果表明：添加双歧杆菌（107 CFU/mL）和其活性胞外多糖（质量分数0.3%,下同）均对酸豆乳凝乳速度及后酸化无显著影响（P＞0.05）。添加0.3%胞外多糖能显著提高酸豆乳的黏度、持水力和质构特性（P＜0.05）。添加产胞外多糖双歧杆菌107 CFU/mL,对发酵期间酸豆乳发酵速率及凝胶特性影响不大;在后酵期间产生86 mg/L 胞外多糖,显著提高酸豆乳的黏度和质构特性（P＜0.05）,但对产品持水力的影响并不显著（P＞0.05）。双歧杆菌胞外多糖可有效改善酸豆乳凝胶特性,提高产品品质。     

苦荞异槲皮苷对人胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的影响

从苦荞中提取制备异槲皮苷,研究其对人胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡、迁移和细胞周期的影响。将异槲皮苷作用于人胃癌SGC-7901细胞和人肾上皮细胞系293T,通过噻唑蓝法检测异槲皮苷对其增殖的影响;4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(4’,6-diamino-2-phenyl indole,DAPI) 荧光染色法观察细胞核的形态学变化;划痕擦伤迁移实验检测异槲皮苷对SGC-7901细胞迁移能力的影响;流式细胞术检测异槲皮苷对SGC-7901细胞凋亡及细胞周期的影响。结果表明：苦荞异槲皮苷可以抑制SGC-7901细胞的增殖,并呈时间和剂量依赖性,当用100 μmol/L异槲皮苷作用细胞48 h后,对SGC-7901细胞的增殖抑制率达到35.92%, 而对人肾上皮细胞系293T的增殖抑制率仅为 3.15%;DAPI荧光染色法观察异槲皮苷处理细胞后,染色体凝聚,有凋亡小体产生;划痕擦伤实验显示,异槲皮苷能抑制SGC-7901细胞的迁移;流式细胞术检测结果表明,异槲皮苷可使G1和S期细胞减少,G2/M期细胞增多,且细胞凋亡率明显增加。综上所述,苦荞麦异槲皮苷能够诱导SGC-7901细胞发生凋亡,阻断细胞周期并抑制细胞增殖和迁移。     

大豆锰超氧化物歧化酶基因在乳酸乳球菌中的分泌表达

为使大豆锰超氧化物歧化酶（Mn superoxide dismutase,MnSOD）在乳酸乳球菌中高效表达,将克隆的MnSOD基因开放阅读框序列分别重组到质粒pNZ8149和经改造的质粒pNZS上,表达载体pNZ-SOD和分泌表达载体pNZS-SOD,将两者分别以电穿孔法转化乳酸乳球菌L. lactis NZ3900,经Elliker琼脂板筛选、聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）、酶切鉴定正确后,获得的两重组菌株加入Nisin进行诱导表达,对L. lactisNZ3900/pNZ-SOD和L. lactis NZ3900/pNZS-SOD的表达产物进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodiumdodecyl sulfate - polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）和酶活性对比分析。结果显示：L. lactis NZ3900/pNZS-SOD菌株表达SOD总活性约是L. lactis NZ3900/pNZ-SOD菌株的1.6 倍,是L. lactis NZ3900/pNZ8149的13.5倍,且可将表达的约2/3的SOD分泌到胞外,表明经改造的乳酸菌分泌表达系统L. lactis NZ3900/pNZS能够分泌表达SOD,并增强SOD的表达。     

一株仅产L-乳酸的乳酸乳球菌发酵培养基的优化

为了研究一株分离自新疆牧民家庭自制酸马奶中的乳酸乳球菌KLDS 4.0325产L-乳酸的能力,以L-/D-乳酸试剂盒验证该菌种在发酵过程中所产L-乳酸的光学纯度为100%。利用Plackett-Burman设计法对影响该菌株发酵的培养基主要组分进行筛选,确定影响L-乳酸产量的主要因素为蔗糖、酵母粉、K2HPO4。在此基础上,采用响应面法优化发酵培养基的组成,结果表明：当蔗糖添加量为102.9 g/L、酵母粉添加量为2.5 g/L、K2HPO4添加量为7.9 g/L时,L-乳酸产量最大,可达86.6 g/L,在最优发酵条件下获得的实测值与模型预测值（86.3 g/L）吻合,说明所建立的模型是切实可行的。     

实时荧光定量PCR技术监测腌制麻竹笋中乳酸乳球菌动态变化

采用实时荧光定量聚合酶链式反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）技术定量监测6 g/100 mL盐质量浓度腌制麻竹笋中乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）的动态变化。经乳酸乳球菌标准菌株基因组DNA提取、标准阳性质粒制备、标准曲线绘制、各时期竹笋腌制发酵液中细菌基因组DNA提取和乳酸乳球菌qRTPCR特异性扩增,对腌制液中乳酸乳球菌进行定量检测。结果表明,在腌制过程中（0～63 d）,随着腌制时间的延长,乳酸乳球菌含量逐渐升高,在腌制14 d时达到最大值（4.63×108 copies/μL）,与0 d（2.41×102 copies/μL）相比增加了6 个数量级,而后浓度缓慢降低,在腌制63 d时浓度为5.02×106 copies/μL。qRT-PCR技术为定量监测腌制麻竹笋中微生物的动态变化提供了一条可靠、快速的有效途径。     

富硒绿茶对大鼠非酒精性脂肪肝Ca2+-ATPase活性和表达的影响

目的：研究恩施富硒绿茶对大鼠非酒精性脂肪肝病（nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD）中肝脏肌浆网/内质网Ca2+-ATPase（sarco（endo）plasmic reticulum Ca2+-ATPase,SERCA）活性及其表达的影响,探讨富硒绿茶防治NAFLD的可能作用机制。方法：将32 只Wistar大鼠分成4 组,分别饲喂标准饲料＋常规饮水（NC组）、高脂饲料＋常规饮水（HC组）、高脂饲料＋普通绿茶（TC组）、高脂饲料＋富硒绿茶（SeC组）。9 周后处死,观察大鼠一般情况,测定肝细胞内Ca2+含量、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）水平、肝脏组织ATPase活性;采用免疫组化染色和Western blotting检测肝脏内总SERCA蛋白表达,观察各指标变化情况。结果：HC组大鼠肝细胞内Ca2+含量明显增高,Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase活性降低,SERCA蛋白表达降低;富硒绿茶干预后Ca2+含量降低,酶活性升高,表达增加,较普通绿茶效果明显。结论：富硒绿茶对高脂饮食诱导的大鼠非酒精性脂肪肝病具有干预作用,可能是通过降低肝细胞内Ca2+和TNF-α含量而改善肝脏能量代谢障碍,同时提高了SERCA活性,增强其蛋白表达而实现的。