水产品及其制品中大西洋鲑鱼实时荧光PCR检测方法建立

目的:三文鱼营养丰富,含有ω-3不饱和脂肪酸,深受大众喜爱,但存在产品标签标示错误、掺伪掺假、以次充好的现象.目前采用检测标准SN/T 3589.7-2013《出口食品中常见鱼类及其制品的鉴伪方法第七部》对鲑鱼成分检测,无法区分大西洋鲑鱼和其他种类的三文鱼.因此有必要建立一种用于区分上述几种三文鱼的快速检测方法.方法:...     

菠萝成分的实时荧光PCR检测方法的建立

目的本文研究建立食品中菠萝成分的实时荧光PCR检测方法。方法根据菠萝rbcL基因设计菠萝物种特异性检测引物和荧光探针,对样品中的靶标基因片段进行检测,并进行物种特异性检测、灵敏度测试和实际应用检测。结果通过对供试的58种动植物材料进行检测,只有菠萝出现特异性扩增,其他物种材料无扩增;对不同浓度菠萝DNA样品和不同含量的菠萝粉样品进行灵敏度测试,该检测方法对菠萝成分的检测灵敏度分别为0.01 ng/μL菠萝DNA和0.1%菠萝粉;对市场销售的实际样品进行检测,能够满足于检测需求。结论该方法简单、灵敏、快速、准确,能应用于食品中菠萝成分检测。     

传染性支气管炎病毒实时荧光PCR检测方法的建立

建立特异、敏感、快速的传染性支气管炎病毒(IBV)实时荧光定量PCR检测方法。针对IBV基因序列保守区域设计一对特异性引物和一条特异性的探针,建立实时荧光定量PCR检测方法,并进行特异性、敏感性、重复性检测。结果表明所建立的IBV实时荧光定量PCR检测方法,引物和探针特异性良好,组间组内重复性良好,检出IBV DNA最小拷贝数为5拷贝。因此,本研究建立IBV特异、敏感、快速的实时荧光PCR检测方法,为IBV的诊断奠定基础。     

TaqMan实时荧光PCR检测菰米成分的方法建立

本研究建立了一种能够快速检测食品中菰米成分的TaqMan实时荧光PCR方法。以菰米核糖体内转录间隔区（internal transcribed space, ITS）基因为检测靶标,设计特异性引物和探针,建立菰米成分的实时荧光PCR检测方法,并进行物种特异性分析、灵敏度分析以及实际应用检测。结果显示:本研究所建立的实时荧光PCR检测方法特异性强,仅对菰米品种中国菰（Z. latifolia）、水生菰（Z. aquatica）、沼生菰（Z. palustris）和德克萨斯菰（Z. texana）基因组DNA出现特异性扩增曲线,供试的其他30种谷物以及异源性动植物基因组DNA均无扩增曲线;该方法对菰米成分检测的灵敏度为0.001 ng/μL菰米基因组DNA或0.01%（W/W）菰米粉。应用该方法对100份市售的进口菰米、菰米碎米、杂粮米及混合米粉等样品进行检测,在80份进口菰米和5份菰米碎米中检测出菰米成分,其他样品中未检出菰米成分,与商品标识一致。该方法灵敏度高,特异性强,可快速高效地进行菰米成分的真实性甄别。     

金黄色葡萄球菌实时荧光PCR快速检测方法的建立

为建立检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)的快速检测方法,以SA Sa442基因为靶基因设计合成引物及Taq Man探针,建立了实时荧光PCR快速检测SA的方法。结果显示,对16株试验菌株进行荧光PCR检测,只有SA检测为阳性,表明该检测方法特异性强;该方法的灵敏度为7.5 CFU/m L,利用该检测方法对采集的175份样品进行检测,共计检出5份SA阳性样品,与国标法(GB 4789.10—2010)检测结果一致,显示了良好的实用性。该检测方法灵敏度高、特异性强,具有良好的实用性。     

驼乳中布鲁氏菌实时荧光PCR快速检测方法的建立

目的 建立驼乳中布鲁氏菌的实时荧光PCR快速检测方法。方法 根据布鲁氏菌外膜蛋白omp10基因的碱基序列,设计引物其探针,从模拟布鲁氏菌污染的驼乳中提取布鲁氏菌DNA片段进行实时荧光PCR扩增检测。结果 该方法从布鲁氏菌M5株中扩增出了特异性目的片段omp10,而对大肠埃希式杆菌等细菌的扩增结果均为阴性。经过10倍倍比稀释的模板进行检测,该方法的灵敏度为最低可检出2.31×10-4 ng/μL的DNA。标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数为0.9928,扩增效率E=0.97。结论 建立的实时荧光PCR检测方法具有特异性强、灵敏度高的优点,为驼乳中布鲁氏菌病的早期预防及流行病学监测提供了有效的技术手段。     

银白色葡萄球菌实时荧光PCR快速检测方法的建立

本文旨在建立一种银白色葡萄球菌实时荧光PCR检测方法。根据对NCBI数据库中银白色葡萄球菌非核糖体多肽合成酶(NRPS)基因序列的比对分析,设计引物及探针,并基于所设计的引物及探针建立Taq-man 实时荧光PCR的检测方法。结果表明,本实验所建立的方法特异性较强,只能扩增出银白色葡萄球菌,而其他常见菌株的检测结果呈阴性;该方法的灵敏度为 10 pg/uL;在对实验室通过传统方法分离的金黄色葡萄球菌的检测中,发现有两个分离菌株呈阳性,其结果与普通PCR方法完全一致。     

实时荧光PCR方法在食品真伪辨别中的应用

实时荧光PCR技术以其特异性、灵敏性、简便、快速的优点,广泛应用于食品鉴伪检测。本文阐述了实时荧光PCR的原理以及其在肉制品、高价值食品、乳制品、果汁、水产品和油脂鉴伪检测方面的应用情况。      

NDM-1基因TaqMAN实时荧光PCR检测方法的建立

研究初步建立了NDM-1基因的实时荧光PCR快速检测鉴定方法。研究根据NDM-1序列,设计并合成了PCR检测引物(ND-T-F和ND-T-R)和探针(ND-T-PROBE),对NDM-1质粒DNA和其他11个标准菌株进行了实时荧光PCR检测。结果表明,携有NDM-1基因的质粒DNA模板都出现了很强的特异信号,而其他对照病菌均未出现特异荧光信号,证明这套引物及探针具有NDM-1基因检测的特异性。灵敏度测定结果,此体系可检出10fg/μL质粒DNA模板。研究表明,TaqMAN实时荧光PCR方法是一种特异、灵敏、快速的NDM-1基因检测方法。     

溶藻弧菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立

为建立溶藻弧菌（VA）的快速检测方法,本研究以VA Collagenase基因为靶基因设计合成引物及Taq Man探针,建立了实时荧光定量PCR快速检测VA的方法。结果显示,对15株实验菌株进行荧光定量PCR检测,只有VA菌株检测为阳性,表明该检测方法特异性强;该方法的灵敏度为18 cfu/m L;稳定性和重复性实验结果表明,同一样品重复检测4次Ct值的变异系数均小于2%;利用该检测方法对采集的165份样品进行检测,共计检出2份VA阳性样品,与SN/T2564-2010行标法检测结果一致,显示了良好的实用性。该检测方法灵敏度高、特异性强,具有良好的实用性。      

冬虫夏草研究的回顾与展望

冬虫夏草是蝠蛾属幼虫被中国被毛孢寄生后形成的虫菌复合体,是我国特有的名贵药材。由于其珍稀并具有特殊功效,而倍受关注。文章系统论述了我国冬虫夏草的研究概况,包括蝠蛾属昆虫的种类与地理分布、生物学特性、寄主植物、冬虫夏草菌的分离与鉴定、冬虫夏草的生物活性成分与药理作用,以及近20多年来仿冬虫夏草的人工培育及野生冬虫草孕育工程,并提出了有待进一步研究的问题。     

吲哚乙酸对冬虫夏草生物量、胞外多糖产量及其抗氧化性能的影响

通过在液体培养基中添加不同浓度的吲哚乙酸,研究吲哚乙酸对冬虫夏草生物量、胞外多糖产量及其抗氧化性能的影响。结果表明:适宜浓度的吲哚乙酸可以提高冬虫夏草的生物量和胞外多糖产量,并且随吲哚乙酸浓度的增加二者均呈先增后降的变化趋势,当浓度为2.5μg/m L时,生物量和胞外多糖产量均达到最高,分别为18.3g/L和2.9g/L,较不添加吲哚乙酸分别增加了6.3%和15.4%;同时,适宜浓度的吲哚乙酸还可以提高冬虫夏草胞外多糖的抗氧化性能,在1.0μg/m L和2.5μg/m L时,胞外多糖对羟基自由基和DPPH的清除率分别达到最高,为58.9%和56.6%。      

冬虫夏草液体发酵富硒大豆对脂类和硒含量的影响

采用冬虫夏草菌丝体发酵富硒大豆,对冬虫夏草菌丝体发酵富硒大豆不同时间发酵液的脂类总量、酸价、碘价、游离脂肪酸、硒含量进行测定。结果表明：发酵48h 的发酵液与对照相比,脂类总量变化不明显,酸价增加2.8 倍,碘价增加1.2 倍,亚麻酸、亚油酸、油酸、花生四烯酸分别增加5.3、2.9、6.8 倍和5.6 倍。48h以后发酵液中脂类成分变化不明显。不同时间发酵液中硒含量基本不变。     

果味冬虫夏草饮料的研制

冬虫夏草深层发酵菌丝体粉水提液抗氧化活性低、口味差,限制其在营养保健型饮料中的应用.采用添加0.02g/L异抗坏血酸钠增加抗氧化活性,0.15g/L葡萄香精调节口感,开发一种冬虫夏草饮料.感官分析表明:该饮料呈浅棕黄色、酸甜适中,具有葡萄汁的香味、无异味.抗氧化活性测试表明:其清除DPPH自由基的能力和还原力均高于韩国冬虫夏草饮料.     

古尼虫草菌丝体维生素E的初步分析

古尼虫草与传统名贵中药冬虫夏草类似,具有多种活性物质及广泛的药理作用,是一种重要的虫草属真菌.分别用30 %、50 %、80 %乙醇溶液和乙酸乙酯作为提取液,从古尼虫草菌丝体中提取维生素E,并用乙酸乙酯萃取的方法进行初步分离,硅胶薄层层析和紫外分光光度法分析粗产物中的维生素E.结果表明,提取物质的总量与提取液的乙醇含量有关,提取液的有机溶剂比例越高,提取到维生素E量越高,但提取的维生素E的纯度越低.初步确定乙酸乙酯为提取虫草维生素E的最适溶剂.     

古尼虫草多糖对衰老模型小鼠的影响

研究古尼虫草多糖的抗衰老作用.将健康小鼠随机分为空白组、模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,将模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组用D-半乳糖造亚急性衰老小鼠模型;低剂量组、中剂量组和高剂量组的小鼠建模11 d后每天灌胃50%古尼虫草多糖溶液,剂量分别为100 mg/kg、200 mg/kg和400 mg/kg;45 d后观察脑组织中以及血清中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,丙二醛(MDA)含量.结果表明,古尼虫草多糖可提高小鼠脑组织和血清中SOD(P＜0.01)和GSH-Px(P＜0.01)活力,明显抑制小鼠脑组织和血清中MDA(P＜0.01)的形成.因此,古尼虫草多糖有很好的抗衰老作用.     

冬虫夏草多糖的研究进展

多糖是冬虫夏草所含活性物质中最重要最丰富的类群之一,本文综述了冬虫夏草多糖的提取、结构和药理学活性的研究进展,并提出了目前冬虫夏草多糖研究中存在的问题,为冬虫夏草多糖的进一步研究开发提供依据。     

冬虫夏草茶饮料风味研究

根据对白砂糖、柠檬酸的阈值测定结果,研究了以虫草和茶叶为原料的饮料的风味。正交试验结果表明：以茶汤50ml、虫草浸提液22.5ml的添加量,配制的虫草茶饮料风味最佳。     

Identification of Cordyceps sinensis by 18S nrDNA Sequencing and Characterization of Fermented Products in Taiwan

With increased demand for Cordyceps sinensis teleomorphs, anamorph fermented products have been used as substitutes. This has raised questionable quality control challenges and consequently the need for molecular methods to identify C. sinensis. Internal transcribed spacer-1 (ITS 1), 5.8S, and ITS 2 nrDNA sequence identities were only 85.7–100% between each C. sinensis isolate. However, 18S nrDNA NS5/NS6 region sequences were almost identical and have potential for molecular characterization and diversity of isolates. The NS5/NS6 region sequences were compared to GenBank data and other Cordyceps spp. The Cfo I and Rsa I restriction determined signature sequences were used to successfully characterize 12 fermented products. This innovative method can be applied to C. sinensis teleomorph and anamorph identification and to improve quality control.     

一株冬虫夏草菌的液态发酵条件研究

以菌丝体干质量、胞内多糖含量及腺苷含量为评价指标,研究了一株冬虫夏草菌的液态发酵条件。确定利用葡萄糖蛋白胨液体培养基发酵生产菌丝体、胞内多糖及腺苷的最佳条件为装液量100 mL/500 mL,接种量3%,温度24 ℃,培养时间4 d,摇床转速140 r/min;试验得菌丝体干质量为17.232 g/L;胞内多糖含量为78.34 mg/g;腺苷含量为633.7 μg/g。