薄层色谱法分离葡萄籽中的低聚原花青素

通过对不同溶剂展开体系的选取,确定低聚原花青素分离的薄层色谱展开体系为v(甲苯)∶v(丙酮)∶v(乙酸)=3∶3∶1.从原花青素中分离制备得到儿茶素的单体、二聚体、三聚体,运用高效液相色谱对其进行了分析验证.     

凝胶色谱分离高梁外种皮中低聚体原花青素

建立高粱原花青素分离及其组成分析的方法。采用乙醇溶液提取高粱外种皮中原花青素,通过ADS-17大孔树脂初步纯化,得到高粱原花青素,进而用Toyopearl HW-40凝胶色谱对高粱原花青素分离,并用紫外光谱分析及高效液相色谱-二极管阵列检测法初步分析鉴定。结果表明：Toyopearl HW-40凝胶色谱分离得到A、B、C、D、E、F六个部分。经过紫外光谱分析初步鉴定出级分A、C、D、E、F均为原花青素,B为黄酮;经高效液相色谱-二极管阵列检测法分析可知,级分C和D分别为原花青素的二聚体B1和单体儿茶素,级分F为原花青素的低聚体。建立的高粱原花青素的分离分析方法效果良好。     

蚕豆皮中低聚原花青素结构的初步鉴定

探讨豌豆皮中低聚原花青素的组成和结构.通过有机溶剂精制,大孔树脂与聚酰胺的进一步纯化,从蚕豆皮原花青素粗提物中获得纯度较高的低聚原花青素,采用红外光谱法与质谱分析法对其进行研究.结果表明豌豆皮低聚原花青素中含有单体和多种二聚体、三聚体、四聚体、五聚体,同时文中还对单体(m/z 289)、二聚体(m/z 577、m/z 593、m/z 609)以及三聚体(m/z 865、m/z 881、m/z 897)的质谱裂解途径及可能的结构式进行了讨论.     

高粱原花青素的ESI-MS分析及其低聚体的RP-HPLC-MS/MS法分离鉴定

以高粱加工后的副产物--高粱外种皮为原料,采用电子喷雾离子化质谱(electrospray ionization-mass spectroscopy,ESI-MS)对ADS-17大孔树脂纯化的高纯度高粱原花青素(sorghum procyanidins,SPC)的组成进行分析,并通过反相高效液相色谱(reverse phase high-performance liquid chromatography,RP-HPLC)-质谱(RP-HPLC-MS/MS)联用对Toyopearl HW-40凝胶色谱分离的SPC-5级分进行分离鉴定。结果显示：SPC为低聚体原花青素,包含有儿茶素/表儿茶素单体、原花青素二～六聚体;SPC-5由8种三聚体和1种二聚体组成。     

沙棘籽粕低聚原花青素的制备及结构与抗氧化活性分析

目的:以沙棘籽粕为原料，采用超高压前处理、超声波提取工艺制备低聚原花青素并进行结构分析和抗氧化性能测定。方法:通过单因素实验和响应面试验优化沙棘籽粕低聚原花青素制备工艺，采用红外光谱和超高效液相色谱-电喷雾-质谱分析其结构，并以DPPH、ABTS、FRAP法测定其抗氧化性。结果:最优工艺参数为料液比1∶15(g/mL)、超声时间28 min、温度45 ℃、体系pH 2.85，沙棘籽粕原花青素得率为6.556%，平均聚合度为3.35，主要为二聚体、三聚体原花青素及部分黄酮类物质，二聚体包括3类B型二聚体和1类A型二聚体。低聚沙棘籽粕原花青素显示出良好的抗氧化活性，其DPPH、ABTS、FRAP值分别为2.205，1.307和0.8143 mmol Trolox/g DW。结论:低聚沙棘籽粕原花青素有较强抗氧化性，其结构与葡萄籽粕原花青素存在差异。     

荔枝皮原花青素提取、纯化及抗氧化活性研究

本实验对荔枝果皮内的原花青素提取、纯化和抗氧化活性进行了研究。通过单因素试验和正交试验得出荔枝皮原花青素提取的最佳工艺条件为：乙醇浓度80%、料液比1:20(W/V)、提取温度50℃、提取时间120min、pH6.0提取3次得到样品提取率95.9%。提取物浓缩后,采用AB-8填充柱对荔枝皮提取物中原花青素进行纯化,得率为1.3%,样品纯度为87.45%。通过对纯化后荔枝皮原花青素的抗氧化性能进行测定, 结果显示荔枝皮原花青素有较好的清除DPPH自由基的能力。     

不同纯度花生红衣原花青素的制备工艺研究

研究了AB-8大孔吸附树脂分离纯化得到不同纯度花生红衣原花青素的制备工艺,并对产物进行了HPLC-MS分析鉴定。结果表明:最佳分离纯化条件为上样流速0.5 m L/min、洗脱流速1.0 m L/min、洗脱液20%和40%乙醇溶液,解吸后得到的原花青素纯度分别为98.7%和86.2%;此外,不同的收集方式也可得到不同纯度的原花青素;经AB-8大孔吸附树脂分离得到的纯化物均为低聚体原花青素,20%乙醇纯化物的主要成分为A型原花青素二聚体和A型原花青素三聚体,40%乙醇纯化物的主要成分为A型原花青素二聚体和A型原花青素四聚体。     

荔枝皮原花青素与VC、VE的协同抗氧化研究

选取荔枝皮原花青素(LPPC),采用DPPH自由基清除实验与等辐射分析法(Isobologram)相结合,探讨荔枝皮原花青素、VC、VE单独和复配后的抗氧化作用,结果显示：荔枝皮原花青素、VC和VE的IC50值分别为9.98、9.21、27.96mg/L,表明荔枝皮原花青素对DPPH自由基有明显的清除作用。Isobologram分析图中荔枝皮原花青素与VC、VE复配后的效应点都在相加线及95%可信限的下方,理论IC50add值与实验IC50mix值有显著性差异,并且相互作用指数都小于1,证实荔枝皮原花青素与VC,荔枝皮原花青素与VE之间存在协同抗氧化效应。     

花生种皮原花青素结构的初步鉴定

本研究以脱脂花生种皮为原料,利用乙醇溶剂法进行粗提,得到花生种皮原花青素的粗提物。通过选用AB-8型大孔吸附树脂纯化花生种皮原花青素的粗提物得到3个级分,分别为20%乙醇纯化物(PSPP1)、30%乙醇纯化物(PSPP2)和50%乙醇纯化物(PSPP3)。通过高效液相色谱-电喷雾质谱(HPLC/ESI-MS)分析可知,PSPP1检测出2种单体、5种二聚体、7种三聚体和2种四聚体;PSPP2检测出1种单体、4种二聚物、12种三聚物和5种四聚物;PSPP3检测出1种单体、4种二聚物、7种三聚物和2种四聚物。该研究结果表明花生种皮组分中原花青素的组成较为复杂。通过质谱及碎片信息分析,可得出花生种皮原花青素的连接键类型主要包括A型键[(C4-C8),(C2-O7),(C4-C6),(C2-O7)]和B型键[(C4-C8)或(C4-C6)]。     

超声-微波协同法提取荔枝皮原花青素及其高聚体组成分析

为提高荔枝皮中原花青素的得率和进一步阐明其高聚体组成,本文以糯米糍荔枝为原料,采用超声-微波协同法提取荔枝皮原花青素(litchi pericarp proanthocyanidins,LPC),并运用响应面法优化其工艺条件,将分离所得的高聚原花青素(litchi pericarp polymeric proanthocyanidins,LPPC)用薄层层析色谱(TLC)初步定性,然后运用基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析其组成。结果表明,最佳提取工艺条件为:微波功率307W,时间17min,温度46℃,料液比1∶31g/mL,额定超声频率50kHz,优化后得率为8.10%;LPPC以四至六聚体为主,检测到最高聚体为十二聚体,没食子酸酰化程度低且富含A型键,由检测结果可见,各聚合度LPPC至少含有一种含A型键的结构。     

荔枝果壳原花青素对中波紫外线诱导HaCaT细胞氧化损伤的保护作用

为评价荔枝果壳原花青素对中波紫外线（ultraviolet B,UVB）（波长280～320 nm）诱导人永生化角质形成细胞（HaCaT）氧化损伤的保护作用。构建UVB辐射HaCaT细胞氧化损伤模型,研究荔枝果壳低聚原花青素（litchi pericarp oligomolymeric procyanidins,LPOPC）及从中分离鉴定的6 种单体化合物对HaCaT细胞氧化损伤的保护作用。实验分为对照组、UVB照射组、实验组（阳性对照对氨基苯甲酸（para-aminobenzoic acid,PABA）、LPOPC及6 种单体化合物）,以CCK-8法测定各组细胞活力,采用试剂盒检测各组细胞内活性氧自由基（reactive oxygen species,ROS）相对含量,超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、过氧化氢酶（catalase,CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）活力,还原型谷胱甘肽（glutathione,GSH）及丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量。结果表明：LPOPC及6 种单体化合物的干预处理均可明显提高UVB诱导氧化损伤的HaCaT细胞活力,减少细胞内ROS和MDA的生成,增加SOD、CAT、GSH-Px的活力和GSH水平。6 种单体化合物中,原花青素A2的保护作用最明显,与阳性药物PABA的效果相当。结论：LPOPC及6 种单体化合物均可通过增强细胞内抗氧化能力、抑制脂质过氧化来明显改善受损细胞氧化应激损伤,对UVB诱导氧化损伤的HaCaT细胞具有良好的保护作用,提示原花青素A2是荔枝果壳原花青素中对氧化应激损伤防护作用最强的活性组分。     

龙眼漆酶基因(DlLac)的克隆及表达分析

以‘石硖’龙眼为试材,采用RT-PCR结合RACE技术成功克隆一个龙眼漆酶基因全长c DNA序列,命名为Dl Lac,NCBI登录号为KY051551。Dl Lac基因序列全长1898 bp,编码576个氨基酸,NCBI比对结果显示其与荔枝漆酶氨基酸序列同源性最高,高达94%;进化树结果显示龙眼漆酶氨基酸序列与荔枝漆酶氨基酸序列具有高度同源性。氨基酸保守序列结果表明龙眼漆酶氨基酸序列含有漆酶的3个典型保守结构域,分别为:Cu-oxidase-3、Cu-oxidase和Cu-oxidase-2。结合龙眼果实在常温、低温贮藏条件下,果皮褐变与Dl Lac的表达关系,推测Dl Lac的上调表达可能对龙眼果皮褐变起促进作用。      

Antioxidant activities and contents of polyphenol oxidase substrates from pericarp tissues of litchi fruit

The experiments were performed to extract and purify substrates for polyphenol oxidase (PPO) from pericarp tissue of postharvest litchi fruit. Two purified PPO substrates were identified as (−)-epicatechin and procyanidin A2. The antioxidant properties of two PPO substrates were further evaluated in the present study. Variation in the content of the major substrate (−)-epicatechin of litchi fruit during storage at 25 °C was analysed using the HPLC-UV method. The results showed that (−)-epicatechin exhibited stronger antioxidant capability than procyanidin A2, in terms of reducing power and scavenging activities of DPPH radical, hydroxyl radical and superoxide radical. Furthermore, (−)-epicatechin content in pericarp tissue tended to decrease with increasing skin browning index of litchi fruit during storage at 25 °C. Thus, these two compounds can be used as potential antioxidants in litchi waste and the fresh pericarp tissue of litchi fruit exhibited a better utilisation value.     

IDENTIFICATION OF PROCYANIDIN A2 AS POLYPHENOL OXIDASE SUBSTRATE IN PERICARP TISSUES OF LITCHI FRUIT

Postharvest browning of litchi fruit results in short shelf life and reduced commercial value. Experiments were conducted to separate, purify and identify polyphenol oxidase (PPO ) substrates that cause litchi fruit to brown. PPO and its substrate were extracted from the pericarp tissues of litchi fruit. The litchi PPO substrate was purified using polyamide column, silica gel column and Sephadex LH‐20 column chromatography. The browning substrate was selected by a 0.5% FeCl₃ solution and then identified using a partially purified litchi PPO. Analyses of ultraviolet spectrometry, nuclear magnetic resonance and electrospray ionization mass spectrometry indicated that the PPO substrate was procyanidin A2. The substrate can be oxidized to ο‐quinones by litchi PPO and then form brown‐colored by‐products, resulting in pericarp browning of harvested litchi fruit.     

采后预冷及气调贮藏对荔枝γ-氨基丁酸富集及贮藏品质的影响

本研究以‘怀枝’荔枝为试材,探究了采后预冷及CO2气调贮藏对果实γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid, GABA）富集的影响,并比较了贮藏期间荔枝质构、色差、感官品质等指标的变化。结果表明：从荔枝GABA富集 和贮藏品质来看,冰水预冷的效果均优于冷库预冷;荔枝CO2气调贮藏的GABA含量呈先上升后下降趋势,且更高 体积分数的CO2气调贮藏组具有更高的GABA富集量,最高达19.97 mmol/kg mf,较气调贮藏前提高了40%;GABA 含量与谷氨酸脱羧酶（glutamate decarboxylase,GAD）活力变化趋势相同,与γ-氨基丁酸转氨酶（γ-aminobutyric acid transaminase,GABA-T）活力变化趋势无相关性,表明荔枝GABA富集主要是由于GAD活力的增强催化了 GABA的生成,而非GABA-T活力的下降抑制了GABA的分解;CO2气调贮藏能够抑制荔枝果肉的软化,延缓荔枝感官 品质、果皮果肉色差值的下降;过高的CO2气调体积分数可能会引起荔枝的CO2损伤,使其迅速丧失商品价值。     

Anti-Inflammatory Effects of Lychee (Litchi chinensis Sonn.) Seed Peptide Hydrolysate on RAW 264.7 Macrophage Cells

Lychee (Litchi chinensis) seeds, a by-product from the canned lychee processing, were hydrolyzed using various concentrations of proteases (Alcalase, Flavourzyme, and Neutrase). The protein hydrolysate produced with Neutrase at a concentration of 50 mg/mL exhibited the highest free radical scavenging activity. After ultrafiltration, the fraction containing peptides of less than 650 Da was purified by using gel filtration chromatography into G1–G3. The G1 fraction exhibited the highest activity and was further purified by reversed phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC). Four fractions (H1–H4) were isolated and exhibited efficient nitric oxide (NO) scavenging activity. The G1 fraction inhibited NO production in lipopolysaccharide (LPS) stimulated RAW 264.7 cells with down-regulation of inducible nitric oxide synthase (iNOS) and interleukin-6 (IL-6). The results showed that lychee seed peptide hydrolysates exhibited potent anti-inflammatory activities, suggesting the peptides may be useful as additives to health products such as functional foods and/or pharmaceuticals.     

高浓度CO2短时处理影响荔枝贮藏品质的初探

用10%CO2+90%N2以及20%CO2+80%N2通气处理荔枝果实24h,测定了20℃贮藏中荔枝果实的果皮色、呼吸强度、营养成分的变化,并进行感官品质检查。结果表明,与对照相比,高浓度CO2处理荔枝,可在一定程度上提高果实的好果率、保持果皮红色。但对呼吸强度、总糖、可滴定酸、VC的影响无显著差异。可以认为,高浓度CO2短时处理后的"剩余作用"有利于保持荔枝的好果率与果皮色。     

荔枝中多酚含量的测定

为快速准确检测荔枝中的多酚,选择白糖罂、白腊、糯米糍3个品种,分别提取、测定其不同部位多酚含量;测定条件是:C18色谱柱,检测波长280 nm,柱温42℃,进样量10μL,3%乙酸水溶液与乙腈梯度洗脱。结果表明:以丙酮为溶剂提取效果最好;多酚总量为白糖罂(662.51 mg/kg)>白腊(442.20)>糯米糍(264.36 mg/kg);在所测9种多酚中,表儿茶素含量最高,依次为394.07、242.45、168.79 mg/kg。3种荔枝果肉中多酚总量依次为3.41、5.78、3.00 mg/kg,果皮中多酚总量依次为469.89、155.96、137.89 mg/kg,果核中多酚总量依次为189.21、283.24、120.69mg/kg。同一品种不同部位是果肉中多酚含量最低,果皮与果核中多酚含量的高低则因品种而异,选取适宜品种或部位是提取荔枝多酚的关键。