乳铁蛋白对Th1/Th2细胞平衡影响的研究进展

乳铁蛋白是一种具有多种特殊生理功能的天然铁结合蛋白。本文阐述了Th1/Th2 细胞平衡对机体免疫功能的重要性及乳铁蛋白对Th1 和Th2 细胞平衡影响的最新研究进展,并对其应用前景进行了展望。     

卵转铁蛋白对免疫低下小鼠Th1/Th2细胞平衡的影响

目的:研究卵转铁蛋白(OVT)对免疫低下模型小鼠的免疫平衡恢复作用。方法:将健康小鼠随机分为正常对照组、模型对照组及OVT高剂量组、中剂量组和低剂量组,每组10只。OVT高、中、低剂量组分别以10、1、0.1mg/mL的OVT溶液每天灌胃,灌胃量为20mL/(kg.d)(以体质量计)。模型组对照组和正常对照组灌胃生理盐水20mL/(kg.d)。连续灌胃15d,于第15天灌胃后注射环磷酰胺(正常对照组除外),继续灌胃至第19天(由模型决定)进行检测。测定血清中IFN-γ和IL-4含量、IFN-γ/IL-4比值以及脾脏和胸腺指数。结果:模型对照组小鼠血清IFN-γ的浓度和IFN-γ/IL-4比值与正常对照组相比明显降低(P<0.01);高剂量组小鼠血清IFN-γ的浓度和IFN-γ/IL-4比值显著高于模型对照组(P<0.01),与正常对照组比较,无显著性差异;高剂量组的脾脏指数和胸腺指数与模型对照组相比明显提高(P<0.01)。结论:OVT能修复由环磷酰胺所致免疫低下模型小鼠的体液和细胞免疫失衡,增强免疫低下小鼠的免疫功能。     

荔枝果肉乙酸乙酯粗提物对Th1/Th2细胞平衡的影响

本研究分析荔枝果肉乙酸乙酯部粗提物对小鼠细胞因子分泌的作用,进而探讨其对Th1/Th2细胞平衡的影响。将30只BALB/C小鼠随机分成对照组(生理盐水)、乙酸乙酯部粗提物低剂量和高剂量组(4.6、9.2 mg/kg.bw.d),连续灌胃7 d,观察各组小鼠的胸腺和脾脏指数变化以及脾细胞增殖情况,用ELISA检测小鼠脾细胞以及血清分泌IFN-γ和IL-4的含量以及IFN-γ/IL-4比值。实验结果表明:乙酸乙酯部粗提物高剂量组小鼠的胸腺指数、脾脏指数显著提高。乙酸乙酯部粗提物低、高剂量都能显著提高小鼠脾细胞和血清IFN-γ分泌水平,同时,高剂量组小鼠脾细胞和血清IL-4的分泌水平也显著提高。低、高剂量的乙酸乙酯部粗提物都能显著提高小鼠脾细胞和血清IFN-γ/IL-4的比值。荔枝果肉乙酸乙酯部粗提物诱导Thl/Th2平衡向Th1方向漂移,可能进而诱导机体的炎症性反应。     

免疫低下和食物过敏小鼠外周血中细胞因子的变化

建立小鼠免疫低下模型和食物过敏模型,采用ELISA法检测外周血中细胞因子(IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IFN-γ、TGF-β)的变化。结果表明：与空白对照组比较,腹腔注射环磷酰胺所建立免疫低下小鼠胸腺指数和脾脏指数均有显著降低(P≤0.05),且在第3天达到最低;经卵清蛋白致敏小鼠外周血IgE水平极显著升高(P≤0.01)。免疫低下小鼠外周血中IFN-γ(除第3天外)、TGF-β含量(除第3天外)和IFN-γ/IL-4比值均显著降低,而IL-10水平也有下降趋势;除第2天外IL-6水平显著升高,但IL-4水平只在第3天显著性增高,IL-12先是下降随后呈现增多的趋势;食物过敏小鼠的IL-4、IL-6、IL-10和TGF-β水平均有显著性增高,IFN-γ/IL-4比值有显著性下降,而IFN-γ和IL-12没有明显的变化。因此,免疫低下和食物过敏小鼠的Th1/Th2细胞平衡均向Th2细胞偏移,免疫低下对Th1细胞的影响大,食物过敏对Th2细胞的影响更明显。     

番荔枝单体Bullatacin调节Th1/Th2平衡对小鼠H22肝癌的抑制作用研究

目的研究番荔枝单体Bullatacin对C57BL/6J小鼠接种H22肝癌细胞形成移植瘤的作用及其影响。方法将雌雄各半C57BL/6J小鼠分为空白对照组、模型组、Bullatacin干预组和顺铂对照组,每组10只,每只接种H22细胞数量1×106。Bullatacin浓度100μg·m L^-1,每次0.1 m L腹腔注射,每天1次,连续3天,14天后取材。结果 Bullatacin可抑制移植瘤的生长,其疗效优于顺铂组（P<0.05）。免疫组化结果显示Bullatacin可抑制移植瘤Ki67的表达。C57BL/6J小鼠空白对照组淋巴细胞表达白介素-4（IL-4）的阳性率为（17.3±0.35）%,而在形成移植瘤后为（24.2±0.32）%,Bullatacin干预后为（12.7±0.35）%,顺铂对照组为（11.2±0.33）%。C57BL/6J小鼠空白对照组淋巴细胞γ-干扰素（IFN-γ）的阳性率为（13.4±0.34）%,而在形成移植瘤后为（5.6±0.33）%,顺铂对照组为（6.2±0.35）%,Bullatacin干预后为（14.3±0.33）%。通过淋巴细胞分析表明,移植瘤使Th1/Th2漂移,而Bullatacin可使Th1/Th2向正常转化,顺铂则无此作用。C57BL/6J小鼠的血清IFN-γ含量为（132.2±6.7）pg·m L^-1,接种H22后为（98.9±6.8）pg·m L^-1,使用顺铂后为（77.5±7.0）pg·m L^-1,而在Bullatacin干预后达到（161.5±6.5）pg·m L^-1。C57BL/6J小鼠的血清IL-4为（6.20±1.0）pg·m L^-1,接种H22形成移植瘤后显著升高,达到（16.25±1.1）pg·m L^-1,顺铂干预后为（3.70±1.1）pg·m L^-1,使用Bullatacin干预后为（6.51±1.2）pg·m L^-1,空白组、模型组和Bullatacin干预之间的差异具有统计学意义（P<0.05）。结论番荔枝单体Bullatacin可以有效缩小H22肝癌细胞形成的移植瘤,促进Th1/Th2恢复至平衡状态。     

植物乳杆菌调节抗体和细胞因子水平缓解食物过敏的机制

食物过敏危害人体健康,利用益生菌特有的抗过敏作用来缓解食物过敏是治疗食物过敏的新方向,然而目前关于益生菌缓解过敏的机制研究还不够深入。本文以前期筛选出的具有抗过敏功能的4株植物乳杆菌为研究对象,利用Balb/c小鼠建立食物过敏模型,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)、荧光定量PCR(RT-PCR)等方法研究植物乳杆菌对Th1/Th2相关细胞因子、抗体分泌的影响。ELISA结果表明,将4株植物乳杆菌与致敏小鼠脾细胞共培养可降低IL-4的分泌水平,增加IFN-γ的分泌水平,而荧光定量结果证实IL-4及其转录因子GATA-3 m RNA表达水平显著降低,IFN-γ及其转录因子T-bet mRNA表达水平显著升高,这一结果与细胞因子分泌水平结果一致。此外,4株植物乳杆菌均可下调致敏小鼠血清中IgE分泌水平,缓解由食物过敏造成的肠道黏膜及肺泡组织损伤。这些结果说明植物乳杆菌通过调节Th1/Th2平衡来缓解食物过敏。     

不同来源乳铁蛋白及乳铁蛋白素对小鼠脾淋巴细胞增殖影响的比较

以牛乳清乳铁蛋白（bovine whey lactoferrin,LFW）、牛初乳乳铁蛋白（bovine colostrum lactoferrin, LFC）、人乳铁蛋白（human lactoferrin,LFH）、牛乳铁蛋白素（bovine lactoferricin,LfcinB）和人乳铁蛋白 素（human lactoferricin,LfcinH）为研究对象,研究其对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响并比较不同来源乳铁蛋白 （lactoferrin,LF）及乳铁蛋白素（lactoferricin,Lfcin）作用效果的差异性。采用CCK-8法检测不同来源的LF与 Lfcin作用小鼠脾淋巴细胞24、48、72 h后,及其与丝裂原共同作用对小鼠T、B淋巴细胞增殖作用的影响。结果显 示：LF与Lfcin均在48 h时对小鼠脾淋巴细胞增殖的促进效果最好,且在一定质量浓度范围内促进效果随质量浓度升 高而加强;LF与Lfcin均在一定质量浓度范围内提高刀豆蛋白A诱导的T淋巴细胞的增殖和脂多糖诱导的B淋巴细胞 的增殖。结果表明：两种牛乳铁蛋白（bovine lactoferrin,LFB）及LfcinB可替代LFH应用于婴幼儿配方产品中以提 高婴幼儿免疫能力,LFB推荐添加质量浓度为0.50～2.00 mg/mL,Lfcin推荐添加质量浓度为75～125 μg/mL。     

乳铁蛋白对肠道屏障保护作用的研究进展

完整的肠道屏障是维持肠道健康的先行和必要条件。乳铁蛋白因其具有多种生物活性而备受推崇。近年来,国内外大量研究报道了乳铁蛋白通过修复肠黏膜、调节免疫功能和肠道菌群等来维持肠道稳态。该研究主要对乳铁蛋白的生物学特性、乳铁蛋白对肠屏障的作用以及乳铁蛋白的应用进行了综述。     

嗜酸乳杆菌对β-乳球蛋白过敏诱发Thl/Th2细胞平衡的影响

目的:观察嗜酸乳杆菌对牛乳β-乳球蛋白(BLG)致敏小鼠Th1/Th2细胞平衡及血清抗体水平的影响,以研究其缓解过敏反应的作用。方法:用牛乳BLG和弗氏佐剂的混合液腹腔注射诱发BALB/c小鼠致敏,建立动物过敏模型。将实验动物随机分为空白组、过敏组与不同剂量的嗜酸乳杆菌组。采用ELISA法测定各组小鼠血清总IgE、BLG特异性IgE和总IgG含量。体外分离培养各组小鼠脾淋巴细胞,采用ELISA法检测细胞上清液中Th1型细胞因子(IL-12、IFN-γ)和Th2型细胞因子(IL-4)的水平。结果:中、高剂量嗜酸乳杆菌组小鼠的IFN-γ/IL-4比值(代表Th1/Th2细胞平衡)显著高于过敏组(P<0.05);而其血清中的总IgE、BLG特异性IgE和总IgG水平显著低于过敏组(P<0.05),与空白组相比无差异性(P>0.05)。结论:嗜酸乳杆菌干预可改善小鼠的BLG过敏症状,其作用可能与促进Th1占优势的Th1/Th2细胞平衡,阻断IgE及IgG分泌相关。     

乳铁蛋白对环磷酰胺所致小鼠免疫失衡的保护作用

探讨乳铁蛋白对环磷酰胺所致小鼠免疫失衡的保护作用。Balb/c小鼠随机分为6组,正常对照组,模型对照组,乳铁蛋白组(5、25、50、500 mg/kg)。连续灌胃给药27 d,第27天给药后除正常对照组外,其他小鼠均腹腔注射环磷酰胺80 mg/kg,继续灌胃至第30天,末次给药24 h后,放射免疫分析方法测定各组小鼠外周血CD4+T、CD8+T细胞。酶联免疫分析方法检测血清细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4,IL-10的变化。与正常对照组相比,模型小鼠外周血CD4+T、CD8+T百分率明显增加;血清IFN-γ明显降低(p<0.01),IL-4明显增高(p<0.05),IFN-γ/IL-4比值明显下降(p<0.01);乳铁蛋白25、50、500 mg小鼠外周血CD4+T、CD8+T细胞百分率明显降低(P<0.01或P<0.05)。乳铁蛋白500 mg组小鼠血清IFN-γ较模型组明显增高(p<0.05),乳铁蛋白50、500 mg小鼠血清IFN-γ/IL-4比值趋于正常。乳铁蛋白能不同程度修复环磷酰胺所致小鼠免疫失衡状态,具有免疫保护作用。     

Citrus Tachibana Leaf Extract Mitigates Symptoms of Food Allergy by Inhibiting Th2‐Associated Responses

Although the incidence of food allergy continues to rise, there have been no effective therapeutic strategies. Citrus fruits contain a number of bioactive flavonoids with immune‐regulatory functions. The objective of this study was to determine whether Citrus tachibana (fruit body with peel, leaves, and branch) can protect against the development of food allergy and the mechanism behind it, and to identify the active compound(s) responsible. We found that C. tachibana leaf extract (CLE) mitigated ovalbumin (OVA)‐induced food allergy symptoms including increased rectal temperature, diarrhea, and anaphylaxis. This mitigation was likely due to CLE‐mediated decreases in cytokine release from T‐helper 2 cells (Th2 cells) in mesenteric lymph nodes. Moreover, higher levels of CLE attenuated systemic Th2 cell–mediated responses in mouse splenocytes sensitized with OVA+Alum. This was evidenced by CLE‐mediated reductions in Th2 cytokine release, including interleukin (IL)‐4, IL‐5, and IL‐13, but not the Th1 cytokines IL‐12 and interferon (IFN)‐γ, which was attributable to decreased gene expression levels. We also identified kaempferol as the most potent compound for reducing Th2‐associated responses in splenocytes. The findings of this study suggest that CLE suppresses Th2‐cell–mediated immune responses, contributing to alleviation of food allergy symptoms, and that kaempferol is a flavonoid with potential antiallergenic activity that targets Th2 cell–induced responses.     

虾制品致敏性诱发豚鼠相关细胞因子及Th1/Th2细胞平衡的变化

以消减致敏性南美白对虾的虾仁、虾肉和虾蛋白为样品,以pH 7.5的磷酸盐缓冲液为阴性对照,未处理的虾蛋白为阳性对照,建立豚鼠过敏模型,研究过敏豚鼠血清中相关细胞因子与食物过敏的相关性,并推断食物过敏对辅助性T（type 1/type 2 T-helper, Th1/Th2）细胞平衡的影响。收集过敏豚鼠的血清,采用酶联免疫吸附测定法检测血清中免疫球蛋白E（immunoglobulin E,IgE）、组胺（histamine,HIS）、相关细胞因子（白细胞介素（interleukin,IL）-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor α,TNF-α）、干扰素-γ（interferon-γ,IFN-γ）质量浓度。结果表明,用未处理的虾蛋白致敏豚鼠,用致敏性消减程度不同的虾制品（虾蛋白、虾肉、虾仁）提取的蛋白激发,消减致敏性的虾蛋白、虾肉和虾仁提取蛋白激发后豚鼠血清中IgE含量分别为（3.905±0.120）、（4.813±0.188）、（5.199±0.327）U/mL,HIS质量浓度分别为（16.437±1.120）、（19.656±1.080）、（21.071±1.732）μg/mL,激发后血清中IgE和HIS质量浓度变化与致敏性程度呈正相关,致敏性越低,血清中IgE和HIS质量浓度越低。过敏豚鼠血清中IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-6、TNF-α质量浓度的变化与虾制品致敏程度呈正相关;同时,与IgE和HIS质量浓度变化规律具有一致性;血清中IL-10质量浓度变化与致敏性程度呈负相关;因此,这些细胞因子与食物过敏具有很好的相关性。过敏血清中IFN-γ没有呈现规律性变化,但IFN-γ/IL-4随着致敏性的增强而减小。因此,推测虾制品激发过敏豚鼠的Th1/Th2细胞平衡向Th2细胞偏移。     

Modulation of Th1/Th2 balance by Lactobacillus strains isolated from Kimchi via stimulation of macrophage cell line J774A.1 in vitro

Lactobacilli isolated from Kimchi, a Korean traditional food, were tested for their capacity to modulate the T helper (Th) 1/Th2 balance. Ovalbumin (OVA)-sensitized mouse splenocytes were cultured with 26 strains of lactobacilli; the highest IL-12 induction and lowest IL-4 production were then observed in 4 strains, including Lactobacillus plantarum CJLP55, CJLP56, CJLP133, and CJLP136. These strains produced a larger amount of IL-12, which enhances differentiation and activation of Th1 cells, in macrophage cell-lines more than positive control strains L. casei KCTC 3109(T) and L. rhamnosus GG, although they also induced production of IL-10, which is a suppressor of IL-12. Indeed, CJLP133-stimulated macrophages induced production of more Th1 cytokine IFN-γ and less Th2 cytokine IL-4 than KCTC 3109(T) and GG in co-cultivation with T cells. These findings suggest that lactobacilli from Kimchi may modulate the Th1/Th2 balance via macrophage activation in the hypersensitive reaction caused by Th2 cells. PRACTICAL APPLICATION: Allergic reactions including asthma and atopy are caused by predominance of Th2 response over Th1 response. Lactobacilli isolated from fermented foods such as yogurt, cheese, and Kimchi showed health-promoting activities. The present study indicated that several lactobacilli strains from Kimchi may reduce allergic reactions through macrophage-mediated induction of Th1 response.