海洋假单胞菌GY-1菌株的抗菌作用及其胞外抗菌蛋白的分离纯化

采用对峙培养法和牛津杯法测定海洋假单胞杆菌(Pseudomonas) GY-1菌株和发酵液的抑菌作用。结果表明：GY-1菌株和发酵液对小麦根腐病菌(Bipolaris sorokiniana)、禾谷镰刀病菌(Fusarium graminearum)、菠菜早疫病菌(Alternaria solania)、斑点落叶病菌(Alternaria alternata)、油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)和小麦叶枯病菌(Alternaria tenuis Nees)等植物病原真菌有较强的抑制作用。发酵液采用硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow柱层析、Sephadex G-75凝胶层析,以小麦根腐病菌为指示菌进行活性追踪和SDS-PAGE电泳纯度跟踪检测,纯化出一种对小麦根腐病菌具有明显抗菌作用的抗菌蛋白,其分子质量约为70.9kD。     

香蕉枯萎病致病菌尖孢镰刀菌4号生理小种micro-like RNA及其靶标基因的鉴定

香蕉枯萎病已严重威胁香蕉产业的发展,为了分析香蕉枯萎病菌尖孢镰刀菌古巴专化型4号生理小种(Fusarium oxysporum F.sp.cubense race 4,Foc4)中miRNA-like(milRNA)及其调控功能,本研究构建了3个Foc4菌丝小RNA测序文库,测序得到原始数据11783990条,其中可用...     

灵芝不同培养基发酵液粗提物抑菌活性研究

采用不同培养基对灵芝进行液体发酵培养,研究其发酵液粗提物对植物病原真菌抑菌活性。结果表明,3种不同培养基的灵芝发酵液粗提物,对不同植物病原真菌的抑菌活性存在差异性。其中1#培养基的灵芝发酵液粗体物对苹果炭疽病菌、小麦根腐病菌和西瓜枯萎病菌具有显著的抑菌活性;2#培养基的灵芝发酵液粗提物对番茄早疫病菌的抑制作用明显;而3#培养基的灵芝发酵液粗提物对小麦根腐病菌具有较强的抑制作用。由此可见,不同培养基的灵芝发酵液对各种植物病原菌表现出不同的抑菌活性,揭示培养基成分的不同可能对灵芝发酵液的抑菌活性物质的产生有着重要的影响。     

河南烟草镰刀菌的初步分子鉴定

为了明确河南烟田危害烟草的镰刀菌种类,以烟叶主产区典型病株为样本,用组织分离法获得纯菌株,并对所得菌株进行形态学鉴定、rDNA-ITS序列分析及致病性测定.形态学观察结果表明,分离获得的22个菌株在PDA培养基上均产生茂密的菌丝,呈棉絮状,能产生黄、红、紫等色素,大型分生孢子镰刀形或椭圆形,无色、多胞;小型分生孢子卵形至椭圆形,无色、单胞或双胞.BLAST比对结果表明,在GenBank序列数据库中,菌株1～11号的DNA序列与登陆号为KC429789.1的Fusarium oxysporum (F.oxysporum)序列同源性达到95.77％以上;菌株12～18号与登陆号为JQ910159.1的Fusarium solani (F.solani)序列的同源性达到88.01％以上;菌株19～21号与登陆号HQ176444.1的Fusarium verticillioides (F.verticillioides)序列的同源性达到89.72％以上;菌株22号与登陆号为JX045841.1的Fusarium proliferatum(F.proliferatum)序列的同源性为90.74％.接种试验表明,4种镰刀菌均能侵染活体烟苗并产生典型症状.因此,河南烟田危害烟草的镰刀菌鉴定为F.oxysporum,F.solani,F.verticillioides及F.proliferatum.其中,F.proliferatum侵染烟草在河南为首次报道.     

不同真菌菌剂对烟草病毒病的田间防治效果

真菌激发子能诱导植物产生系统抗性,表现出抗植物病毒的作用。对西瓜枯萎菌、苹果轮纹菌、小麦赤霉,以及土壤真菌ESF-6菌株、XFPF-6菌株、C1菌株、XFSF-8菌株、疫霉等8种真菌菌剂的抗病毒活性进行了研究。用不同真菌发酵液喷雾处理田间烟草植株叶片,检测真菌菌剂对烟草病毒病的防治效果。结果表明,8种真菌菌剂对烟草病毒病均有一定的防治效果,其中ESF-6菌剂防效最高,发病高峰期的防效为83.8%。在烟草整个生长期真菌XFPF-6的防效较为稳定,防效稳定在60%以上。小麦赤霉菌,苹果轮纹菌的防效也较高,分别为64.8%,73.7%。除C1菌剂外,其他7种真菌菌剂的防效均高于盐酸吗啉胍,可开发为真菌抗病毒菌剂。经18s rRNA序列测定和显微形态观察鉴定ESF-6为曲霉(Aspergillus sp.),XFSF-8为青霉(Penicillium sp.)。     

哈密瓜(Cucumis melo L.)致腐真菌的鉴定

研究从哈密瓜表面分离出引起其腐败的菌株A和菌株B,并采用显微镜形态学观察、表型特征和分子生物学三种方法对其进行鉴定。结果发现菌株A可利用碳源包括杏苷、糊精、D-半乳糖、D-葡萄糖酸、麦芽糖、肝糖、L-鼠李糖、L-山梨糖、L-乳酸等72种碳源,其ITS rDNA序列与尖孢镰刀菌甜瓜转化型(Fusarium oxysporum f.sp.melonis)的同源性为99%,分支长度为0.00。菌株B可利用碳源包括L-阿拉伯糖、D-果糖、丙三醇、蔗糖和木糖醇等54种碳源,其ITS rDNA序列与链格孢菌(Alternaria alternata)的同源性为100%,分支长度为0.00。因此,推断菌株A为尖孢镰刀菌甜瓜转化型,菌株B为链格孢菌。     

进境加拿大大麦中真菌病害的分离与鉴定

目的分离与鉴定进境加拿大大麦中真菌病害。方法从进境加拿大大麦的可疑种子及病残体中分离获得真菌菌株,并对所分离的菌株进行培养性状及形态学观察,同时对核糖体DNA内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)扩增和测序,进行鉴定。结果共分离出21个真菌菌株,鉴定出6个菌种,包括黑麦麦角菌(Claviceps purpurea)、梨孢镰刀菌(Fusarium poae)、燕麦镰刀菌(Fusarium avenaceum)、细极链格孢(Alternaria tenuissima)、大麦网纹病菌(Pyrenophora teres)、颖枯壳针孢(Phaeosphaeria nodorum)。结论做好进境大麦的检疫、监管工作,对保障啤酒工业安全生产、防止外来危险性病原菌在我国定殖、流行以致造成危害具有极其重要的意义。     

胡麻枯萎病生防芽孢杆菌筛选及抑菌效果研究

为筛选拮抗胡麻枯萎病菌的生防微生物,对采自我国不同省份胡麻根围土壤进行了细菌分离和拮抗菌筛选。根据土样中151株病原菌尖孢镰刀菌[Fusarium oxysporum f.sp.lini（FOL）]对峙培养获得21株拮抗芽孢杆菌,其中XJ2-20拮抗效果最好,盆栽实验的胡麻枯萎病防效可达56.3%,经鉴定为枯草芽孢杆菌。菌株XJ2-20对151株镰刀菌株的抑菌率最高可达64.5%,其发酵滤液可抑制尖孢镰刀菌生长及抑制分生孢子萌发。菌株XJ2-20的抑菌活性物质的最佳硫酸铵沉淀浓度为70%,活性物质对热和胰蛋白酶敏感,最适pH为7。其最佳发酵条件为LB液体培养基（初始pH 7.2）、每300mL三角瓶装液量50～100mL,29℃培养5d。     

一株抗真菌的解淀粉芽孢杆菌的鉴定及其抗菌性研究

本实验室从广州地区土壤中分离得到一株产抗真菌物质的菌株HN06.经检测其对黑曲霉(Aspergillus niger)、稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)、水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)和苦瓜枯萎病菌(cucurbit wilt)均有良好的抑制作用.经生理生化实验及16SrDNA同源...     

浒苔多糖和硒化浒苔多糖抑菌作用研究

从浒苔中提取浒苔多糖,并进行硒化反应,制备硒化浒苔多糖。考察了浒苔多糖和硒化浒苔多糖对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌2种细菌和柑桔炭疽病菌、苹果腐烂病菌、棉花枯萎病菌、苹果轮纹病菌、小麦全蚀病菌、黄瓜枯萎病菌、苹果斑点落叶病菌等7种植物致病真菌的抑菌特性。结果表明:硒化浒苔多糖和浒苔多糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌都有一定的抑菌作用,硒化浒苔多糖的抑菌效果要明显优于浒苔多糖,最小抑菌浓度分别为1.70mg/mL和6.80mg/mL;硒化浒苔多糖对黄瓜枯萎病菌、苹果斑点落叶病菌、棉花枯萎病菌和小麦全蚀病菌4种致病真菌有较好的抑菌效果,但浒苔多糖对供试真菌几乎没有抑菌效果。     

广谱拮抗菌株的筛选诱变及抗菌物质分离鉴定

分离和鉴定产生广谱抗菌活性物质的菌株,并对抗菌物质分离鉴定.通过形态学、生理生化特征和16S rDNA序列分析鉴定菌株.采用紫外线.硫酸二乙酯化学复合诱变的方法,获得抗菌能力强、遗传稳定的高产菌株.分别用甲醇提取、凝胶过滤色谱(Sephadex G-10)和半制备高效液相色谱分离纯化抗菌物质,基质辅助激光解吸电离飞行时...     

人参根腐病拮抗菌的筛选、鉴定及其抑菌活性

目的：从人参根际土壤中筛选出拮抗人参根腐病的菌株,初步研究其抑菌作用。方法：采用平板稀释法从人参根际土壤中分离获得菌株,以人参根腐病菌为靶标菌采用平板对峙法筛选出拮抗菌;通过形态学特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析对筛选出的拮抗菌进行鉴定;检测拮抗菌无菌发酵液对根腐病菌菌丝生长、孢子萌发的影响,同时测定拮抗菌的抑菌谱。结果：分离获得一株对人参根腐病原菌拮抗作用较强的菌株HB-3,经鉴定菌株HB-3为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。菌株无菌发酵液对人参根腐病菌菌丝生长和孢子萌发均有显著抑制作用;菌株HB-3的抑菌谱较广,对根腐病菌、疫霉病菌、锈腐病菌、菌核病菌、灰霉病菌均有一定的抑菌活性。结论：筛选得到一株解淀粉芽孢杆菌HB-3,能显著抑制人参根腐病菌的生长,对人参根腐病有较强的生物防治效果。     

紫叶小檗果小檗碱的提取及抑菌活性研究

研究紫叶小檗果小檗碱的提取条件及其抑菌活性。在单因素实验和正交实验基础上,得到小檗碱的最佳提取工艺。通过平板抑菌实验测定紫叶小檗果小檗碱对马铃薯干腐病菌(Fusarium solani,F.s.)、番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea,B.c.)、尖孢镰刀病菌(Fusarium oxysporum,F.o.)、苹果炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides,C.g.)、水稻稻瘟病菌(Magnaporthe grisea,M.g.)、苹果腐烂病菌(Cytospora sp,C.s.)六种植物病菌的抑制作用;采用滤纸片法评估紫叶小檗果及葛根、紫叶小檗果配伍制剂对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌活性。实验结果表明,小檗碱最佳提取条件为:纤维素酶用量120 mg、酶解时间120 min、料液比1:12 g/mL、浸提时间150 min,得率达到0.198%。在小檗碱浓度为4 mg/mL时,对六种植物病菌抑菌效果由大到小排序如下:尖孢镰刀病菌(F.o.) > 苹果腐烂病菌(C.s.) > 番茄灰霉病菌(B.c.) > 水稻稻瘟病菌(M.g.) > 马铃薯干腐病菌(F.s.) > 苹果炭疽病菌(C.g.),小檗碱对尖孢镰刀病菌具有较好的抑菌活性,抑菌率在小檗碱浓度为4 mg/mL时可达到89.28%;葛根与紫叶小檗果配伍对金黄色葡萄球菌的抑菌活性较强,对大肠杆菌的抑菌活性存在最佳配伍,为葛根:紫叶小檗果质量比6:44。综上所述,本实验所得提取工艺稳定、可行,可用于紫叶小檗果中小檗碱的提取,并且紫叶小檗果中小檗碱具有较强的抑菌活性,可用于食品防腐、农业生物防治等领域。     

一株拮抗海鱼干优势耐盐真菌芽孢杆菌HY-5筛选及其抗菌成分鉴定

目的:开发新的海鱼干耐高盐优势真菌抑制剂。方法:取用湛江市特呈岛红树林海域的海水、海泥以及红树林的根、茎和叶的样本,利用琼脂扩散法和平板点种法筛选出一株强抗菌活性菌株HY-5,通过传统细胞形态观察并结合生理生化实验及16S rDNA序列进行分析鉴定;利用杯碟法测定上清液对17株霉变海鱼干优势真菌抗菌谱,发酵液酸沉后经LC-MS检测其抗菌成分。结果:HY-5被鉴定为解淀粉芽孢杆菌,其上清液对17株霉变海鱼干优势真菌均有明显抗菌作用;LC-MS检测到HY-5发酵液中含2组抗菌脂肽surfactin(994.6、1008.6、1022.5和1036.6)和iturin(1016.5、1030.5、1044.4和1058.3)组分。结论:海洋源解淀粉芽孢杆菌HY-5的粗提液中含有抗菌脂肽,其对霉变海鱼干优势真菌有较强的拮抗作用。     

河南烟草镰刀菌的分子鉴定及致病性分析

为明确河南省不同烟叶产区危害烟草的镰刀菌种类,以河南省烟叶产区典型镰刀菌根腐病烟株及烟田土壤为供试样品,采用组织分离法和土壤分离法获得纯化菌株,根据菌株形态和rDNA-ITS序列分析对病原菌进行鉴定,并采用无创接种法测定病原菌对烟草的致病性。结果表明,获得的98个菌株在PDA培养基上均产生白色菌丝,大型分生孢子呈镰刀形或马特形,无色、多孢;小型分生孢子呈肾形、椭圆形或卵形,无色、多无分隔。序列比对结果显示,所分离的98株菌分属尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）、茄病镰刀菌（Fusarium solani）、层出镰刀菌（Fusarium proliferatum）、木贼镰刀菌（Fusarium equiseti）和Fusarium nematophilum。致病性分析结果表明,尖孢镰刀菌、茄病镰刀菌、层出镰刀菌和木贼镰刀菌对烟苗具有致病性;48株致病菌中豫南烟区烟草镰刀菌根腐病致病性病原菌为尖孢镰刀菌、层出镰刀菌和木贼镰刀菌,以尖孢镰刀菌为主;豫中为尖孢镰刀菌;豫东、豫西为茄病镰刀菌和尖孢镰刀菌。因此,尖孢镰刀菌为全省烟区重点防控对象,豫南烟区还需加强层出镰刀菌和木贼镰刀菌的防控,豫东、豫西需防范茄病镰刀菌的发生。      

苍耳内生真菌的分离鉴定及抗菌活性研究

从植物苍耳中分离内生真菌,选出8株进行抑菌活性测定,有6株对番茄早疫病菌抑制率大于50%。菌株SC008对5种植物病原菌的抑制率均大于50%。对内生真菌SC008进行形态学观察及ITS序列鉴定,初步判定菌株SC008归属于黑孢霉属(Nigrospora Zim.)。碳氮源实验表明,SC008在以乳糖和蔗糖为碳源及以酵母提取物和牛肉膏为氮源的培养基上生长良好。     

海洋放线菌的筛选和抑菌活性的发酵条件优化

从大连海域筛出33株放线菌,其中4株具有显著地抑菌活性,放线菌D09的抑菌活性最高,并具有广谱抗菌性.以金黄色葡萄球菌为指示菌,对放线菌D09发酵条件和理化性质进行了研究,正交试验表明,其最优发酵条件为:菌龄为48h,接种量10.0%6,发酵培养基初始pH值为7,培养条件为25℃,装样量为10%,发酵培养基配方为可溶性淀粉15g/L,KNO3 1g/L,K2HPO4·H2O0.25g/L,MgS04·7H2O0.25g/L.在最优条件下,放线菌D09生长最快,抑菌能力最强.