固相支撑液液萃取-平行蒸发前处理技术测定动物源性食品中4种硝基呋喃类代谢物

硝基呋喃类药物的检测常以其代谢物为目标物,建立了鸡肉、蜂蜜、牛奶中呋喃唑酮代谢物(AOZ)、呋喃它酮代谢物(AMOZ)、呋喃妥因代谢物(AHD)和呋喃西林代谢物(SEM)检测的超高效液相色谱串联质谱确证方法,硝基呋喃代谢物经衍生化后,采用硅藻土固相支撑液液萃取和平行蒸发联用前处理技术进行净化和富集衍生物,超高效1.7μm C18柱用于分离4种待测物,同位素内标法定量。AOZ和AMOZ为最低检测限为0.1μg/kg,AHD和SEM为0.25μg/kg。3个不同添加水平时该方法回收率为85.6%～104.3%,相对标准偏差(RSD)为3.2%～9.5%,通过对实际样品进行测定,结果表明该方法能简单、快速、准确地测定动物源性食品中4种硝基呋喃类代谢物。     

广东省鳜鱼和杂交鳢中孔雀石绿和硝基呋喃残留调查及暴露评估

目的了解广东省主要养殖地的鳜鱼和杂交鳢中孔雀石绿及其代谢物和硝基呋喃类代谢物的残留情况。方法利用高效液相色谱-串联质谱法对鱼肉中的孔雀石绿及其代谢物和硝基呋喃类代谢物残留量进行测定。结果2013年孔雀石绿的总检出率为11.7%,硝基呋喃类代谢物的总检出率为20%。2014年孔雀石绿的总检出率为25%,硝基呋喃类代谢物的总检出率为12.5%。近两年总孔雀石绿残留量在0.58~19.1μg/kg之间,总硝基呋喃类代谢物残留量在0.66~36.6μg/kg之间。暴露评估显示:人体每天可能的孔雀石绿的平均暴露量0.24μg,即每人每日膳食暴露量为0.004μg/kg BW,最高暴露量1.10μg,即每人每日膳食暴露量为0.02μg/kg BW;人体可能的每天呋喃西林代谢物的平均暴露量为0.34μg,即每人每日膳食暴露量为0.005μg/kg BW,最高暴露量为0.87μg,即每人每日膳食暴露量为0.01μg/kg BW;人体可能的每天呋喃唑酮代谢物的平均暴露量0.56μg,即每人每日膳食暴露量为0.009μg/kg BW,最高暴露量2.10μg,即每人每日膳食暴露量为0.03μg/kg BW。结论近两年鳜鱼和杂交鳢中孔雀石绿和硝基呋喃类检出率相对较低,膳食暴露评估显示孔雀石绿在此范围内对人体健康损害危险性极小。     

高效液相色谱法测定硝基呋喃类药物代谢物及其在对虾体内的代谢

建立高效液相色谱法测定对虾中胺基脲（semicarbazide,SEM）、1-氨基-2-内酰脲（1-aminohydantoin,AHD）、5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮（5-morpholinomethyl-3-amino-2-oxazolidone,AMOZ）和3-氨基-2-恶唑基酮（3-amino-2-oxazolidone,AOZ）4 种硝基呋喃类药物代谢物。采用含100 g/L三氯乙酸的甲醇-水（50∶50,V/V）溶液提取,邻氯苯甲醛衍生,经乙酸乙酯萃取、异辛烷净化,以0.05 mol/L乙酸铵-乙腈（30∶70,V/V）为流动相,反相高效液相色谱分析,外标法定量。结果表明,4 种待测物在0.1～50 nmol/mL 浓度范围内线性良好,检出限分别为SEM 0.75 μg/kg、AHD 1.2 μg/kg、AMOZ 2.0 μg/kg、AOZ 1.0 μg/kg。停药后4 种硝基呋喃类药物代谢物在对虾肌肉内富集最高含量分别为51.5、35.8、79.3 μg/kg和127 μg/kg,代谢物残留低于0.5 μg/kg所需代谢时间为SEM 21 d、AHD 15 d、AMOZ 17 d和AOZ 23 d。     

LC-MS/MS法检测鸡肉中硝基呋喃类代谢物的残留量

建立鸡肉中硝基呋喃类药物代谢物残留的液相色谱-串联质谱检测方法。样品经盐酸水解,邻硝基苯甲醛过夜衍生,调pH 7.2后,用乙酸乙酯提取,正己烷净化,以多离子反应检测模式(MRM)进行测定,采用同位素内标法进行定量。结果表明,该方法的线性范围为0.5～10μg/kg, 4种代谢物的线性相关系数均不小于0.999 4,检出限为0.5μg/kg。在0.5, 1.0和5.0μg/kg的添加水平下,加标回收率为85.6%～105.2%, RSD为4.17%～5.45%(n=6)。该法可作为鸡肉中4种硝基呋喃类药物的代谢物残留量同时分析的有效手段。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定淡水鱼中硝基呋喃类代谢物残留

目的建立超高效液相色谱-串联质谱测法测定淡水鱼中呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃唑酮和呋喃西林等硝基呋喃代谢物的研究方法。方法样品中加入同位素内标,经盐酸水解,用2-硝基苯甲醛衍生,乙酸乙酯液-液萃取净化后,超高效液相色谱-串联质谱仪测定,内标法定量。结果 4种硝基呋喃代谢物的检出限为0.07~0.25μg/kg;在0.1~10 ng/m L范围内线性相关系数r0.996;4种硝基呋喃代谢衍生物的加标回收率分别为94.0%~98.2%、84.0%~89.6%、94.0%~99.0%和75.4%~85.5%;相对标准偏差为2.5%~9.2%。应用建立的方法对48份淡水鱼进行测定,其中1份检出呋喃唑酮代谢物3-氨基-2-噁唑烷基酮(3-amino-2-oxazolidinone,AOZ),含量为0.45μg/kg。结论建立的方法选择性高、灵敏性强、准确度高,能满足淡水鱼中硝基呋喃类代谢物残留的高灵敏分析。     

分散固相萃取净化-液相色谱-质谱联用测定水产苗种中硝基呋喃类代谢物残留量

建立分散固相萃取净化-液相色谱-质谱法测定水产苗种中氨基脲、5-甲基吗啉-3-氨基-2-噁唑烷基酮、3-氨基-2-噁唑烷基酮、1-氨基-2-内酰脲,4 种硝基呋喃类代谢物残留量的方法。样品经甲醇-水（8∶1,V/V）溶液洗涤后,盐酸溶液水解,以2-硝基苯甲醛作为衍生化试剂,乙酸乙酯萃取,浓缩,分散固相萃取净化,采用液相色谱-质谱仪、多反应监测扫描模式检测和同位素内标定量。4 种硝基呋喃类代谢物在0.5～20 μg/L范围内线性相关系数大于0.997,检出限0.1 μg/kg,回收率90.5%～104.5%,相对标准偏差1.56%～8.08%。本方法灵敏、高效、简单、重复性好,满足硝基呋喃类代谢物的检测要求。     

硝基呋喃类代谢物胶体金法检测的前处理研究

采用胶体金免疫层析方法建立了水产品中硝基呋喃类代谢物的快速检测,并对其样品前处理方法进行了研究。结果表明,最佳衍生剂为4-硝基苯甲醛(4-NP),用量为0.1 m L,衍生条件为60℃水浴条件下孵育60 min,提取剂用量为6.0 m L,净化剂用量为1.0 m L。呋喃唑酮代谢物(AOZ)、呋喃西林代谢物(SEM)、呋喃它酮代谢物(AMOZ)、呋喃妥因代谢物(AHD)的线性范围分别为0.0μg/L~4.0μg/L、0.0μg/L~4.0μg/L、0.0μg/L~6.0μg/L、0.0μg/L~6.0μg/L;添标回收率均为76.6%~102.3%;相对标准偏差均为3.03%~7.40%。该样本前处理方法适合硝基呋喃类代谢物免疫胶体金快速检测。     

化学发光免疫分析法在新疆地产动物源性食品中硝基呋喃代谢物检测的应用

目的探讨化学发光免疫分析法(chemiluminescence immunoassay,CLEIA)检测新疆地产动物源性食品中呋喃唑酮(furazolidone,AOZ)、呋喃它酮(furaltadone,AMOZ)、呋喃西林(nitrofurazone,SEM)、呋喃妥因(nitrofurantoin, AHD)的效果。方法运用化学发光免疫分析法检测采集自新疆不同地区的150份动物源性食品的AOZ、AMOZ、SEM和AHD;采用液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry, UPLC-MS/MS)进行结果验证。结果 CLEIA检测发现150份样品中AOZ检出率最高,为2.00%; AMOZ的检出率次之1.33%; SEM、AHD均未检出。鸡肉样品的硝基呋喃类药物残留检出率最高,为5.56%;牛肉和蛋类检出率分别为2.44%和3.57%;羊肉、猪肉和蜂蜜中未检出。UPLC-MS/MS检测结果与CLEIA检测结果一致。结论 CLEIA可用于动物源性食品的硝基呋喃代谢物的初筛检测。     

液相色谱串联质谱法检测水产品硝基呋喃类代谢物的改进

国标GB/T 20752—2006测定水产品硝基呋喃类药物代谢物的实际回收率为40%左右、线性范围0.2～2μg/kg。为改进不足,本实验改用乙酸乙酯提取、液液萃取净化,并适当改变LC-MS/MS检测中液相色谱条件和质谱条件,结果显示,样品前处理时间大大缩短,方法回收率81.3%～106.0%,相对标准偏差小于11%,线性范围0.1～4.0μg/kg,相关系数0.999以上,最低检出限0.1μg/kg。改进后的方法比国标方法在准确度、灵敏度和稳定性等方面均有所提高。     

液相色谱-串联质谱法测定动物源性食品中硝基呋喃类代谢物多残留

在农业部781号公告—4—2006的基础上进行优化,建立一种用于测定动物源性食品中呋喃唑酮(AOZ)、呋喃西林(SEM)、呋喃妥因(AHD)和呋喃它酮(AMOZ)代谢物多残留的液相色谱-串联质谱的分析方法。本方法将试样经盐酸水解,以2-硝基苯甲醛衍生化处理16 h,经乙酸乙酯液液萃取,电喷雾正离子多反应监测,内标法定量。结果表明,在0.5 μg/kg、1.0 μg/kg、5.0 μg/kg 3个添加水平,AOZ、AHD、SEM及AMOZ代谢物的回收率分别为92.0%～99.2%、86.0%～96.4%、90.0%～98.4%及82.0%～93.6%,相对标准偏差为1.8%～8.8%。本方法操作简单,结果准确,适用于批量化检测动物源性食品中硝基呋喃类代谢物多残留。     

UPLC-MS/MS法同时测定不同动物源性食品中硝基呋喃代谢物残留

采用超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS),建立了猪肉、猪肝、螃蟹和虾4种不同动物源性食品中同时测定4种硝基呋喃类药物代谢物的检测方法,优化了样品前处理的条件以及UPLC-MS/MS仪器条件,样品经盐酸水解,2-硝基苯甲醛衍生,乙酸乙酯提取,ESI正离子模式扫描,多反应监测(MRM)测定。结果表明:采用本方法在4种动物源性样品基质中4种代谢物浓度在1~100 ng/mL范围内线性关系良好;4种代谢物的平均回收率为84.6%~118.1%;相对标准偏差RSD为2.9%~8.1%;在4种样品基质中,3-氨基-2-唑烷基酮(AOZ)的检出限为0.1 μg/kg,定量限为0.4 μg/kg,氨基脲(SEM)和5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮(AMOZ)的检出限为0.2 μg/kg,定量限为0.5 μg/kg,1-氨基乙内酰脲(AHD)的检出限为0.5 μg/kg,定量限为1.0 μg/kg,均满足国家标准要求。采用本方法对市场上随机购买的80份动物源性样品和鸡肉中硝基呋喃代谢物质控样进行检测,结果与国家标准方法GB/T 20752-2006测定结果相近,质控样的检测结果在量值范围内。该方法前处理操作简便,较传统方法节省时间和成本,可为硝基呋喃类药物残留检测技术提供理论支撑和参考。     

宁波市售3种食用鱼类中多氯联苯残留特征及其健康风险评估

对宁波市场销售的3种常见食用鱼类——大黄鱼、带鱼和马鲛鱼中7种指示性多氯联苯(polychlorinated biphenyls,PCBs)残留量进行分析与评价,探讨PCBs污染物在鱼类不同部位中的组成特征并进行人体健康风险评估。结果表明:3种鱼肉中PCBs含量由大到小分别为大黄鱼(3.82±1.20)μg/kg、带鱼(2.00±1.32)μg/kg和马鲛鱼(1.36±0.40)μg/kg。其中,带鱼中PCB52含量最高,为(0.78±0.07)μg/kg,马鲛鱼和大黄鱼均以PCB153含量最高,马鲛鱼为(1.59±0.10)μg/kg,大黄鱼为(0.33±0.09)μg/kg;3种鱼类不同部位PCBs平均含量由大到小分别为皮(3.87μg/kg)、性腺(2.57μg/kg)、肝脏(2.53μg/kg)、鳃(1.95μg/kg)和肌肉(1.57μg/kg)。根据GB 2762—2012《食品中污染物限量》中关于海产食品中PCBs允许限量(不大于0.5 mg/kg)的规定,3种鱼类中PCBs残留量在可接受的范围内。     

4 种硝基呋喃代谢物复合荧光免疫层析试纸条的制备

为建立一种基于量子点荧光免疫层析技术快速检测4 种硝基呋喃类代谢物的方法,采用N-羟基琥珀酰亚胺（N-hydroxysuccinimide,NHS）、1-乙基-3-（3-二甲氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐（1-ethyl-3-（3-dimethylaminopropyl）carbodiimide hydrochloride,EDC）法合成4 种硝基呋喃类代谢物的人工抗原,并融合制备对应的单克隆抗体,通过EDC-NHS一步法将量子点微球（quantum dot submicrobeads,QBs）分别与3-氨基-2-恶唑烷酮（3-amino-2-oxazolidinone,AOZ）、5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮（5-morpholine-methyl-3-amino-2-oxazolidinone,AMOZ）、1-氨基-2-乙内酰（1-aminohydantoin,AHD）和氨基脲（semicarbazid,SEM）偶联,得到相应的QBs探针,在此基础上制备复合荧光免疫层析试纸条。结果表明：AOZ、AHD、SEM和AMOZ的检出限分别为0.4、0.4、0.5、0.5 μg/L;通过加标回收实验对批内和批间的重复性和准确度进行评价,得出该试纸条的批内检测回收率为80%～110%,批内变异系数在15%以内,批间回收率为80%～100%,批间变异系数在15%以内;且AOZ、AHD、SEM和AMOZ之间的交叉反应率小于0.1%,说明成功将荧光免疫层析技术和多元检测技术相结合,应用于同时检测4 种硝基呋喃类代谢物,且试纸条的灵敏度和准确性高、特异性好。     

Residues of nitrofuran antibiotic parent compounds and metabolites in eyes of broiler chickens.

Nitrofuran antibiotic residues in food continue to be of international concern. The finding of sources of semicarbazide (SEM), other than through the misuse of nitrofurazone, present a challenge to the use of SEM as a definitive marker residue for this drug. Detection of intact (parent) nitrofurazone would avoid confusion over the source of SEM residues. Broiler chickens were fed sub-therapeutic nitrofuran-containing diets and their tissues were analysed for parent compounds and metabolites by liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry detection (LC-MS/MS). Depletion half-lives in muscle were longer for tissue-bound metabolite residues, 3.4 days --3-amino-2-oxazolidinone (AOZ), 3-amino-5-morpholinomethyl-2-oxazolidone (AMOZ) -- to 4.5 days (SEM), than total metabolite residues, 2.0 days (AOZ) to 3.2 days (SEM). Metabolite concentrations were higher in eyes than in muscle. Metabolite half-lives in eyes ranged from 8.5 days (1-aminohydantoin (AHD)) to 20.3 days (SEM). Nitrofuran parent compounds were also detected in eyes. Furaltadone was detected in single eyes after 21 days' withdrawal of a 6 mg kg(-1) furaltadone diet. When 50 eyes from broilers containing metabolites in muscle close to the 1 microg kg(-1) minimum required performance level (MRPL) were pooled into single samples, 1.2 ng of furazolidone and 31.1 ng of furaltadone were detected, but nitrofurazone was not detected due to the long depletion half-life of SEM in muscle. Further studies are required to improve LC-MS/MS nitrofurazone sensitivity and refine the sample size necessary to use nitrofurazone detection in pooled eyes as a complement to SEM detection in muscle.     

Residues of nitrofuran antibiotic parent compounds and metabolites in eyes of broiler chickens

Nitrofuran antibiotic residues in food continue to be of international concern. The finding of sources of semicarbazide (SEM), other than through the misuse of nitrofurazone, present a challenge to the use of SEM as a definitive marker residue for this drug. Detection of intact (parent) nitrofurazone would avoid confusion over the source of SEM residues. Broiler chickens were fed sub-therapeutic nitrofuran-containing diets and their tissues were analysed for parent compounds and metabolites by liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry detection (LC-MS/MS). Depletion half-lives in muscle were longer for tissue-bound metabolite residues, 3.4 days --3-amino-2-oxazolidinone (AOZ), 3-amino-5-morpholinomethyl-2-oxazolidone (AMOZ) -- to 4.5 days (SEM), than total metabolite residues, 2.0 days (AOZ) to 3.2 days (SEM). Metabolite concentrations were higher in eyes than in muscle. Metabolite half-lives in eyes ranged from 8.5 days (1-aminohydantoin (AHD)) to 20.3 days (SEM). Nitrofuran parent compounds were also detected in eyes. Furaltadone was detected in single eyes after 21 days' withdrawal of a 6 mg kg(-1) furaltadone diet. When 50 eyes from broilers containing metabolites in muscle close to the 1 microg kg(-1) minimum required performance level (MRPL) were pooled into single samples, 1.2 ng of furazolidone and 31.1 ng of furaltadone were detected, but nitrofurazone was not detected due to the long depletion half-life of SEM in muscle. Further studies are required to improve LC-MS/MS nitrofurazone sensitivity and refine the sample size necessary to use nitrofurazone detection in pooled eyes as a complement to SEM detection in muscle.     

高效液相色谱-串联质谱法快速检测鳗鱼及烤鳗中硝基呋喃类代谢物残留

研究并建立了鳗鱼及烤鳗中硝基呋喃类代谢物残留的快速检测方法,样品经酸解、衍生后以混合酸碱指示剂监控调节pH值,再提取净化,HPLC-MS/MS测定。应用混合酸碱指示剂直接监控pH值的调节,终点直观,操作简便快速,明显提高实验室工效,所选指示剂对pH值的监控能力满足要求,采用该法,4种硝基呋喃类代谢物在鳗鱼肌肉中添加(1.0～2.0μg/kg)回收率范围为62.7%～120%,RSD≤19.9%。AOZ、SEM、AHD、AMOZ检测限分别为0.1、0.5、0.5、0.1μg/kg,符合残留分析要求。