槲皮素对HeLa细胞辐射敏感性影响及其机理

为探讨药物槲皮素对HeLa宫颈癌细胞的辐射敏感性影响及其机理,使用不同浓度的槲皮素和不同照射剂量处理HeLa细胞,采用克隆形成法测定细胞存活率,应用流式细胞术测定细胞DNA双链断裂,以及测定槲皮素与电离辐射联合作用对HeLa细胞的周期影响.结果显示,不同槲皮素浓度处理组的HeLa细胞在不同照射剂量组间的存活率比较有统计...     

病毒蛋白与宿主相互作用及其对细胞放射敏感性的影响

为了解病毒感染对电离辐射生物效应的可能影响和作用机理,本文着重评述了病毒编码蛋白与宿主细胞蛋白的相互作用,特别是干扰宿主DNA 损伤修复、影响辐射致细胞凋亡、干扰DNA损伤后的细胞周期检查点,以及其对哺乳动物细胞的放射敏感性的影响.病毒蛋白与宿主细胞的相互作用,不仅在病毒感染及相应致病作用中扮演着重要角色,而且也影响到被感染组织对辐射或某些化学物质的反应.业已证实,一系列的病毒蛋白与宿主蛋白发生作用,这种作用与包括DNA修复、凋亡、细胞周期检查点在内的DNA双链断裂的细胞反应有关,造成宿主蛋白的细胞定位改变、降解、失活或激活等;另外一些蛋白直接或间接调节多种宿主基因的转录水平,或诱发辐射损伤反应相关蛋白的转录后修饰的变化,使得这些基因产物上调或下调、活性改变.病毒蛋白与宿主的相互作用,在一定程度上改变了细胞的放射敏感性.充分、准确地了解病毒感染的辐射生物学意义,将促进我们关于人体对辐射健康效应的个体敏感性的理解和对未来辐射防护思路的拓展.     

增加UHRF1的表达降低乳癌细胞的放射敏感性

为了了解基因UHRF1(ubiquitin-like,containing PHD and RING finger domains,1)基因对乳癌细胞的生长、增殖和辐射敏感性的影响,将全长UHRF1基因的cDNA克隆至真核表达载体pcDNA3中,通过脂质体介导转染入乳癌细胞MDA-MB-231,筛选出UHRF1高表达的细胞株.借助生长曲线、集落形成实验,研究基因转染细胞的生长、增殖能力;通过γ射线辐照后的集落形成实验,观察基因转染对细胞辐射敏感性的影响.实验结果显示,与MDA-MB-231母细胞和转染了pcDNA3"空"质粒的MDA-MB-231/pcDNA3细胞相比,转染有UHRF1基因的MDA-MB-231/UHRF1细胞的生长率和克隆形成率都未有明显改变,但细胞的辐射敏感性明显降低,这些结果首次揭示人类UHRF1基因的表达水平并不影响乳癌细胞MDA-MB-231的生长和增殖能力,但可以调节其辐射敏感性,具体机制有待进一步深入研究.     

TGF-β1抑制剂增加H460肺癌细胞的放射敏感性

探索一种TGF-β1受体激酶的选择性抑制剂SB431542对H460非小细胞肺癌细胞的放射增敏作用及对其DNA损伤应答体系的干扰。采用克隆形成实验检测SB431542对H460细胞放射敏感性的影响;用移植瘤实验验证SB431542在体内对H460细胞的放射增敏作用;采用流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡;用免疫荧光检测53BP1 foci和磷酸化的DNA-PKcs foci。结果发现,SB431542可增加H460的放射敏感性。照射前用SB431542预处理H460细胞虽然快速启动了细胞的DNA损伤应答反应,但却抑制了DNA双链断裂的非同源末端链接修复,因此,导致细胞残留更多未修复的DNA双链断裂,从而产生更严重的细胞周期阻滞。研究还发现,这种增敏作用与细胞凋亡无关。体内移植瘤实验表明,与单独照射组相比,连续3次用SB431542联合5 Gy的X-射线处理明显在处理后第5~12 d之间降低了肿瘤的生长。这些结果显示,在照射前用SB431542抑制肿瘤细胞的TGF-β1通路,能降低其DNA损伤修复能力,改变细胞周期分布,降低细胞克隆形成能力,延缓肿瘤的生长,因此用SB431542抑制TGF-β1通路可作为一些类型肺癌病人放疗的有效辅助手段。     

咖啡因和 EDTA 后处理对不同辐射敏感性作物核酸代谢的影响

研究了辐射损伤修复抑制剂咖啡因和ＥＤＴＡ（乙二胺四乙酸二钠盐）后处理对不同辐射敏感性作物大豆和油菜的核酸代谢的影响。结果表明，随着辐射剂量的增大，辐射敏感的大豆和耐辐射的油菜７ｄ龄幼苗下胚轴内ＤＮＡ和ＲＮＡ的含量有所增加，咖啡因和ＥＤＴＡ后处理又进一步提高了两种作物核酸的含量；大豆幼苗内ＤＮＡ、ＲＮＡ的含量均高于油菜。放射性３ＨＴｄＲ（３Ｈ胸腺嘧啶核苷）掺入试验证明，种子辐照后的浸种２４ｈ内有非按期的ＤＮＡ含成，且油菜的非按期ＤＮＡ合成能力强于大豆，咖啡因和ＥＤＴＡ及复合后处理不同程度的抑制了ＤＮＡ的非按期合成，其抑制程度为Ｃ＋Ｅ（咖啡因＋乙二胺四乙酸二钠盐）＞Ｃａｆ（咖啡因）＞ＥＤＴＡ，试验还证实了辐射与咖啡因和ＥＤＴＡ后处理抑制了正常的ＤＮＡ合成，延迟细胞分裂周期，且辐照剂量越大，抑制和延迟作用越强。     

应用单细胞微凝胶电泳技术检测成纤维细胞的放射敏感性

应用单细胞微凝胶电泳（SCGE）技术以及噻唑蓝（MTT）比色法检测辐射诱发的成纤维细胞系AT5BIVA和GM637的初始DNA双链断裂数及断裂拍的修复与细胞放射敏感性之间的关系。结果表明,AT5BIVA细胞系的放射敏感性显著高于GM637。两种细胞系的初始DNA双链断裂数均随剂量的增加而增加,呈显著的剂量效应关系,在给定的剂量点,辐射诱发的AT5BIVA细胞系的初始DNA双链断裂数显著高于GM637。AT5BIVA纱对辐射诱发的DNA双链断裂的修复能力小于GM637。结果提示,辐射诱发的初始DNA双链断裂数及断裂后的修复与细胞的放射敏感性均有一定的相关性,作为细胞放射敏感性预测指标具有很大的应用潜势。     

抗增殖蛋白Tob1对人类宫颈癌细胞系HeLa放射敏感性影响的实验研究

为探讨抗增殖蛋白家族成员Tob1(transducer of ErbB2,1)对宫颈癌细胞系HeLa放射敏感性的影响,构建可表达Tob1基因全长的重组质粒pcDNA3.0-Tob1(pc3/Tob1),采用脂质体介导转染入HeLa细胞,经G418筛选出阳性耐抗克隆。通过集落形成实验研究Tob1对HeLa细胞放射敏感性的影响,借助流式细胞术和WesternBlot法检测相关分子机制。结果显示,较之HeLa母细胞和转染"空"质粒pcDNA3.0的HeLa/pc3细胞,转染pc3/Tob1后HeLa细胞放射敏感性明显增加;Tob1蛋白高表达增加了HeLa细胞中由辐射诱导的细胞凋亡,提高了由辐射引起的Bax蛋白的表达,降低了Bcl2蛋白表达。上述结果提示Tob1提高了HeLa细胞对电离辐射的敏感性,其机制可能与其上调Bax蛋白的表达、下调Bcl2蛋白的表达,从而增加由辐射诱导的细胞凋亡有关。     

DNA损伤修复能力对辐射适应性反应的影响

采用野生型的中国仓鼠卵母细胞(CHO-9)及其DNA损伤修复缺陷型细胞:EM-C11(DNA单链断裂修复缺陷)和XR-C1(DNA双链断裂修复缺陷),首先进行低剂量(0.016 Gy或0.08 Gy)的初始照射,间隔4 h或7 h后再进行高剂量(1 Gy)的攻击照射,然后检测细胞微核形成率和克隆形成率的变化.结果显示:当初始剂量为0.08 Gy,间隔4 h后再施以1 Gy的攻击照射时,三株细胞只有野生型的CHO-9有辐射适应性反应产生;但当间隔时间延长到7 h时,CHO-9和EM-C11均产生了辐射适应性反应.当把初始照射剂量降低为0.016 Gy,间隔4 h再施以1 Gy的攻击照射时,三株细胞均产生了辐射适应性反应.表明辐射适应性反应不仅与初始照射剂量及间隔时间有关,还与DNA损伤修复密切相关.     

咖啡因联合辐射处理对人乳腺癌易感基因BRCA1表达的影响

研究了咖啡因对碳离子束辐射的增敏效应,并观察在该过程中人乳腺癌易感基因BRCA1表达的变化。碳离子束联合咖啡因处理人乳腺癌细胞MCF-7后,利用实时细胞检测仪观察细胞生长、流式细胞术检测细胞周期分布变化、real-timePCR检测BRCA1mRNA水平、Westernblot检测BRCA1蛋白水平及其磷酸化水平。结果显示：咖啡因处理导致细胞生长明显受到抑制;咖啡因废除了辐射诱导的G2期阻滞,抑制了BRCA1mRNA和蛋白表达水平,同时特异性抑制了BRCA1的丝氨酸1524位点的磷酸化作用。这些结果表明咖啡因抑制了BRCA1蛋白和其磷酸化表达水平。     

PHA、Con A和PWM激活的人血淋巴细胞的辐射敏感性比较

采用~3H-TdR掺入法和羟基磷灰石层析法,比较了~(60)Coγ射线照射后PHA、ConA、PWM激活的人血淋巴细胞的转化、DNA链断裂及其修复。结果表明,受照后这3种细胞转化受抑,在0～8Gy范围内,剂量效应呈双相线性关系,其中PWM细胞对射线敏感程度最低。3种细胞受照后DNA发生链断裂,在0～30Gy范围内,与剂量呈线性关系,三者之间无显著差异。受15Gy照射后,3种细胞在37℃条件下能修复DNA断链,10min内修复很快,30min修复到高峰,但修复不完全,修复后DNA分子发生再断裂。PWM细胞DNA修复率最高。淋巴细胞转化对辐射的敏感性可能与DNA断链的修复能力有关。     

富勒烯赖氨酸衍生物的合成及对AHH-1细胞的辐射防护效应

本研究通过富勒烯与赖氨酸直接反应,合成了一种富勒烯赖氨酸衍生物(C60-Lys),并通过元素分析、红外光谱、1H-NMR、13C-NMR等对其分子结构进行了表征。细胞毒性研究发现C60-Lys对人淋巴母细胞AHH-1的毒性较小,在1200mg/L浓度以下的细胞存活率和未用药对照组相比无明显差异。辐射生物效应研究发现400mg/L以上C60-Lys预处理能显著提高受照细胞的存活率,并降低辐射诱发的凋亡率,其辐射保护效应具有明显的剂量依赖性。说明C60-Lys预处理对受4Gyγ射线照射的AHH-1细胞具有一定的保护作用。     

PEI介导的E1A基因对结肠癌细胞放疗增敏效应的研究

以自行合成的聚乙烯亚胺纳米凝胶(Polyethylenimine,PEI)为载体转染E1A基因,观察E1A基凶对结肠癌细胞体外生长的抑制作用和对电离辐射的增敏效应,并初步探讨其作用机理.经PEI介导将真核细胞高效表达E1A基因的重组质粒psv-E1A导入人结肠癌细胞系SW480,RT-PCR证实其转染,G418筛选出阳...     

羧酸富勒烯C3的合成及其保护辐射损伤效应

通过Bingle环加成反应,利用富勒烯与丙二酸二乙酯催化合成羧酸富勒烯C3,经^1H-NMR,^13C-NMR以及MS-ESI确认其结构和分子量。通过芬顿体系检测了C3清除自由基的能力。利用CCK-8法和Annexin-V／PI染色和流式细胞分析法,分别检测C3对γ射线照射后AHH-1、HIEC细胞存活率,细胞凋亡和细胞周期变化的影响。结果表明,C3具有良好的清除自由基的能力,当芬顿体系中C3终浓度为1000mg／L时,清除效率高达93％左右。对1．12Gyγ射线照射的细胞,C3具有良好的辐射保护作用,表现为照后细胞存活率明显升高,细胞凋亡率显著降低;且对于较高剂量的照射,辐射防护效果较好。说明C3对γ射线照射的细胞具有较好的辐射防护作用,其机理可能主要与其清除自由基的作用有关。     

在DNA损伤修复信号传导通路中ATM介导的BRCA1及RAD51作用机理的研究

为阐明毛细血管扩张性共济失调突变基因（Ataxia telangiectasia mutated，ATM）介导的乳癌基因1（Breast cancer gene 1，Brcal）磷酸化及其下游DNA修复相关蛋白（DNA damage repair protein 51，RAD51）在DNA损伤修复信号传导通路中作用机理，以源于正常人皮肤的成纤维细胞系GM细胞（Originated from human skin fibroblast GM Cell，GM0639）为对照，用免疫共沉淀与Western blot方法，观察^60Coγ射线照射后共济失调症（Ataxia telangiectasia，AT）细胞、ATM转染的AT细胞（ATM^＋ -AT）和GM细胞的BRCA1及RAD51蛋白表达的变化。经0、5、10、20Gy辐照后，AT细胞通过免疫共沉淀及Western Blot法分析其中ATM和BRCA1蛋白以及BRCA1和RAD51蛋白之问的相互作用以及P13K抑制剂对ATM磷酸化其下游基因的影响。0Gy照射ATM^＋ -AT和GM细胞未出现BRCA1表达条带；照射后，GM细胞、ATM细胞BRCA1和RAD51蛋白均有表达，而AT细胞无表达；PI3K抑制剂Wortmannin对经电离辐射照射后的AT、ATM^＋ -AT和GM细胞中BRCA1蛋白表达具有抑制作用；照射后ATM^＋ -AT和GM细胞中BRCA1和RAD51蛋白均有表达。因此，电离辐射照射后，BRCA1由ATM介导磷酸化后可进一步与RAD51相互作用，这是信号通路传导讨程中的一个级联反映．从而修复榻伤的DNA．保持基因组的稳定性。     

青蒿素与蒿甲醚对人鼻咽癌CNE-1细胞放射增敏作用的比较研究

为了比较青蒿素(Artemisinin)和蒿甲醚(Artemether)对人鼻咽癌CNE-1细胞放射增敏作用的差异,取指数生长期的人鼻咽癌CNE-1细胞,采用细胞克隆形成法分别检测青蒿素和蒿甲醚对CNE-1细胞生长的抑制效应,比较两种药物抑制效应的差异性,并确定实验的药物浓度;将人鼻咽癌细胞分为对照组、单纯药物组、单纯照射组及联合治疗组。单纯药物组、联合治疗组分别分为青蒿素组和蒿甲醚亚组,射线照射剂量为0、2、4、6和8Gy,采用多靶单击数学模型拟合细胞存活曲线,取放射增敏比(SER)为达到相同生物效应时,单纯照射的剂量与联合治疗组的剂量之比。实验结果表明,两种药物对细胞的抑制作用均随着药物浓度的提高而增强,存在剂量依赖关系。青蒿素对CNE-1细胞的抑制作用高于蒿甲醚,测得青蒿素放射增敏比(SER)为1.272,蒿甲醚SER为1.481,表明蒿甲醚较青蒿素对人鼻咽癌CNE-1细胞具有更强的放射增敏作用。     

低剂量12C6+离子辐照对小鼠胸腺、脾脏细胞周期及DNA损伤的影响

研究低剂量12C6+子全身辐照对小鼠胸腺、脾脏细胞周期进程及DNA损伤的影响.以0、10、50、75、100和250mGy 12C6+离子全身辐照小鼠,照射后6h处死小鼠,用流式细胞仪检测受辐照小鼠胸腺、脾脏细胞在各细胞周期的百分率,用彗星电泳技术检测受辐照小鼠胸腺脾脏细胞的拖尾率和拖尾长度.所有照射组G0/G1期胸腺细胞百分率明显低于对照组,(p<0.05),10～100mGy照射组S期胸腺细胞百分率显著高于对照组(p<0.01),所有照射组(G2/M)期胸腺细胞百分率明显高于对照组(p<0.05);所有照射组G0/G1期脾细胞百分率明显高于对照组(p<0.01),S期脾细胞百分率显著低于对照组(p<0.05).彗星电泳结果显示低剂量12C6+离子辐照以剂量依赖的方式引起小鼠胸腺脾脏细胞DNA迁移长度及拖尾率的增加.低剂量的碳离子辐射可促进小鼠胸腺细胞DNA合成,对小鼠脾脏细胞产生抑制作用,使其发生G1期阻滞;同时对胸腺及脾脏细胞造成具有明显剂量效应关系的DNA损伤.     

微波暴露对大鼠GLP-1及其受体表达的影响及与学习记忆功能损伤的关系

探讨了微波暴露对胰高血糖素样肽-1(Glucagon-like peptide-1,GLP-1)及其受体的影响,揭示了GLP-1及其受体变化与大鼠学习记忆功能损伤的关系.分别用Morris水迷宫评价大鼠学习记忆能力,酶联免疫吸附实验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血浆中GLP-1浓度,逆转录多聚酶链反应(Reverse transfer polymerase chain reaction,RT-PCR)检测海马组织中GLP-1R mRNA表达,原位末端标记法(Terminal deoxynucleotidyl transferase mediated Biotin-dUTP nick-end labeling,TUNEL)法检测细胞凋亡.研究发现微波暴露可导致大鼠学习记忆能力下降,血浆中GLP-1浓度降低,海马组织GLP-1R mRNA表达下降,海马脑区神经细胞凋亡.暴露前给予GLP-1可改善微波暴露所致的学习记忆功能损伤,保护神经细胞,降低海马神经细胞凋亡率.GLP-1及其受体参与了微波暴露所致的学习记忆功能损伤,证实GLP-1具有神经保护作用,并拮抗微波暴露所致学习记忆功能损伤.     

离子辐照对生防菌BJ1的诱变研究及菌种鉴定

为了提高生防菌BJl的抑菌能力,优化辐照诱变的物理参数,获得生防效果更好的高效菌种,利用12C6+对生防菌BJ1进行不同剂量离子辐照处理.结果表明,采用100 Gy剂量辐照的生防菌BJ1的存活率最高,并且在0～100 Gy之间,存活率先降后升,其存活曲线呈"鞍型";从诱变效果看,经400 Gy辐照诱变获得的生防菌BJ1的抑菌效果有明显提高;综合存活和抑菌效果考虑,离子辐照诱变生防菌BJ1的最适剂量为200～400 Gy.通过16S rDNA序列分析,将辐照诱变获得的BJ1菌株定为枯草芽孢杆菌.     

~(99m)Tc热变性红细胞的制备及其在脾显像中的应用

近年来由于介入放射学的发展,使晚期肝硬变伴牌机能亢进者由于不能耐受脾切除术,有可能作脾栓塞治疗,为配合临床判断脾栓塞的疗效及脾显像在其它方面的临床应用,我们于1982年6月起开展~(99m)Tc-热变性红细胞脾显像的研究,今将结果报道如下。     

3Gyγ射线照射和丝裂霉素C对大鼠肝脏细胞色素P450 含量及其同工酶CYP2B1、CYP2E1活性的影响

为研究3Gyγ射线全身照射和丝裂霉素C（Mitomycin C，MMC）对雄性（Sprague-Dawley，SD）大鼠肝脏细胞色素P450含量、CYP2B1、CYP2E1活性的影响，分别给大鼠腹腔注射1mg／kgd的MMC（分1d，连续3d及6d用药三组），3mg／k的MMC 1d，3Gyγ射线全身照射，3Gyγ射线全身照射加1d3mg／kg MMC，另设空白对照和溶剂对照。各组处理结束后24h，处死大鼠取肝脏，制备微粒体，测P450含量、CYP2B1、CYP2EI活性。实验结果表明，给MMC 1mg／kgd，1d后P450含量、CYP2B1活性变化无统计学差异（p〉0．05），CYP2E1活性明显上升（P〈0．01）；连续3d或6d后，P450含量、CYP2B1、CYP2E1活性均无明显变化（P〉0．05）。给3mg／蟾的MMC 1d，对P450含量、CYP2B1活性影响无统计学差异（P〉0．05），CYP2E1活性上升明显（P〈0．01）；3Gyγ射线全身照射后，P450含量、CYP2B1活性无明显变化（P〉0．05），CYP2E1活性下降（P〈0．05）；分析发现，3mg／kgMMC与3Gyγ射线之间没有交互作用。结果提示，Y射线可以抑制雄性SD大鼠肝脏CYP2E1活性，MMC对CYP2E1活性有诱导作用，但多次刺激使其耐受，P450含量、CYP2B1活性对γ射线、MMC不敏感。