自噬与鼻咽癌放疗研究进展

自噬对鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)具有抑瘤和促瘤双重作用。自噬在NPC发生、发展及转归中起重要作用:低水平、基础自噬有利于细胞的自我保护与新陈代谢,是NPC放、化疗抵抗的重要因素之一;高水平、过度自噬则可导致自噬性细胞死亡,是基于自噬靶点的NPC治疗基础。自噬剂的研发与应用是实现自噬水平调控的关键环节,自噬抑制剂或自噬诱导剂可增敏NPC放、化疗甚至诱导其自噬性细胞死亡,但其作用机理颇为复杂且迄今尚未完全明了。本文着重综述自噬与NPC放疗研究进展,并探讨自噬作为新靶点的NPC治疗前景,尤其X射线作为自噬剂以诱导NPC发生治疗性的自噬性细胞死亡。     

基于细胞自噬机制的健康科学研究进展

自噬(autophagy)是细胞对自身组件进行降解与回收的自然过程,与人类健康高度相关。很多疾病都伴随着自噬的异常。本文回顾了国内外近年来在自噬与健康关系领域的研究,包括自噬与癌症、神经退行性疾病等疾病的关系。并且回顾了对人体健康有明显影响的电离辐射、体育锻炼、针灸、按摩等物理刺激对细胞自噬的调控作用,从自噬的角度对这些作用的分子机制进行了讨论。最后,对于自噬调控在未来的医疗保健中的潜在价值进行了展望。     

U251细胞受X射线照射后的自噬现象

为探讨自噬在X射线对U251细胞增殖抑制的作用及机制,用X射线处理人胶质瘤细胞系U251细胞,采用WST-1法测定X射线对U251细胞增殖的抑制作用,MDC荧光染色和LC3免疫组化观察辐照后自噬的发生;WST-1法检测3-MA对辐照诱导的U251细胞毒性的影响。WST-1法显示,X射线对U251细胞生长有显著的抑制作用,且此作用呈明显的时间、剂量依赖性;MDC荧光染色和LC3免疫组化。结果表明,X射线可诱导U251细胞发生自噬;X射线照射前阻断自噬使细胞毒性增强。X射线照射能明显抑制U251细胞的生长,并诱导其发生自噬,但自噬对U251细胞可能起到一定的保护作用。     

青蒿素对脑胶质瘤U251细胞的辐射增敏作用

为探讨青蒿素(Artemisinin)对脑胶质瘤细胞辐射敏感性的影响及其机制,采用甲基四唑蓝(MTT)法检测青蒿素对胶质瘤U251细胞增殖的抑制作用;Hoechst 33258荧光染色观察凋亡小体;单丹磺酞尸胺(MDC)染色和Western blotting检测U251细胞的自噬活性的改变;用克隆形成实验测定自噬抑制剂3-MA对U251细胞的增殖抑制作用。结果显示:青蒿素对U251细胞增殖有抑制作用;青蒿素和X射线联合处理组细胞凋亡增加,并出现大量自噬泡且LC3-Ⅱ表达量值增大(p<0.01);3-MA、青蒿素和X射线三联处理组细胞克隆形成率较联合处理组显著降低(p<0.01)。研究表明,青蒿素可能主要通过诱导细胞凋亡来增强U251细胞对X射线的辐射敏感性,同时青青蒿素也能增强辐射诱导U251细胞的自噬活性,但自噬机制在此过程中可能起到细胞保护作用。     

自噬调节电离辐射引起的神经胶质瘤细胞初级纤毛发生

探讨自噬与电离辐射诱导人神经胶质瘤细胞初级纤毛发生的关系。神经胶质瘤细胞M059K和M059J进行10 Gy X射线照射或血清饥饿处理,免疫荧光法检测纤毛标志物Arl13b及基体结构蛋白γ-tubulin指示初级纤毛并统计纤毛发生率,免疫荧光法检测自噬标志物LC3联合蛋白质免疫印迹法检测p62蛋白表达量评估细胞自噬水平,利用氯喹（CQ）或雷帕霉素（RAPA）抑制或激活自噬水平并检测对细胞纤毛发生的影响。结果显示：M059K细胞中具有纤毛的细胞比例约为40%,X射线照射处理后3 d上升至75%以上（p<0.01）,但M059J细胞中纤毛细胞的比例（约7%）在X射线处理后无明显变化,然而血清饥饿处理3 d时M059K和M059J中纤毛细胞的比例分别上升至约80%(p<0.01)和50%(p<0.01)。血清饥饿导致两种细胞的自噬水平均显著升高,但X射线照射仅引起M059K细胞自噬水平升高而对M059J细胞影响不明显。使用RAPA激活细胞自噬能够显著提高两种细胞中纤毛细胞的比例,而使用CQ抑制自噬能够降低X射线照射引起的M059K细胞纤毛发生或血清饥饿引起的M059J细胞纤...     

盐诱导激酶2对电离辐射诱导的自噬与凋亡的影响

为探索盐诱导激酶2(salt-inducible kinase 2, SIK2)对电离辐射引起的自噬与凋亡的影响,以期为肿瘤的放射治疗提供新的思路,以慢病毒颗粒LV-GFP和LV-SIK2体外转染HeLa细胞,48 h后用荧光显微镜观察转染是否成功,RT-PCR和Western blot检测转染细胞SIK2的干扰效果。通过Western blot检测SIK2低表达对8 Gy ⁶⁰Co γ射线照射下细胞中自噬相关蛋白LC3-Ⅱ 和P62表达的影响来观察自噬的变化;利用流式细胞术来检测SIK2低表达对8 Gy ⁶⁰Co γ射线照射下细胞凋亡的影响。结果表明,SIK2低表达的稳转细胞系被成功构建;8 Gy γ射线照射后,SIK2低表达细胞系LC3-Ⅱ表达下调,P62表达上调,表明自噬被减弱;流式细胞术检测发现SIK2低表达细胞系在照后12 h FITC⁺PI^-细胞比例就显著增加,表明SIK2低表达增加了细胞凋亡。因此,SIK2低表达会导致电离辐射引起的细胞自噬大大减弱,凋亡显著增加。     

自噬活性调节胶质瘤起始细胞辐射敏感性的体内实验研究

为探讨自噬调节对胶质瘤起始细胞移植瘤辐射敏感性的影响,建立裸小鼠皮下移植瘤模型,测量肿瘤体积大小,比较抑瘤率检测雷帕霉素对移植瘤的辐射增敏作用;建立裸小鼠颅内移植瘤模型,观察裸小鼠生存期,HE染色观察移植瘤的生长。取两种模型中各组肿瘤组织做Western blot,分析自噬相关蛋白LC3表达。结果显示,裸小鼠皮下移植瘤模型中,联合治疗组的肿瘤体积明显小于阴性对照组和单纯辐照组(P>0.05),抑瘤率明显增加(P>0.05);在裸小鼠颅内原位移植瘤模型中,联合治疗组的裸小鼠生存期较阴性对照组和单纯辐照组明显延长,HE染色中可见联合治疗组肿瘤生长局限,与周围正常脑组织界限清楚。Western blot结果显示,两种模型中,联合治疗组中的比值LC3II/LC3I显著增加。研究表明,自噬激动剂雷帕霉素通过激活胶质瘤起始细胞的自噬活性,增加胶质瘤的辐射敏感性。     

槲皮素对胶质瘤干／祖细胞的辐射致敏作用及其机制的初步探讨

本研究旨在探讨槲皮素对胶质瘤干／祖细胞辐射敏感性的影响及其机制。用槲皮素（Quercetin,Que）作用于已经建立的胶质瘤干／祖细胞系SU-．2,用WesternBlot和免疫荧光法检测自噬相关蛋白LC3的变化,以检测SU-2的自噬活性的改变。采用四甲基偶氮唑盐（3．（4,5．Dimethylthiaz01-2-y1）．2,5-diphenyltetrazoliumbromide,MTT）比色法和克隆形成实验比较各处理组对SU．2的增殖抑制作用;应用AnnexinV-FITC／PI流式细胞术检测不同因素处理SU．2后细胞凋亡情况的改变。实验结果表明：用槲皮素预先处理胶质瘤干／祖细胞系SU-2再辐照组较单纯辐照组的细胞增殖率降低∞〈0．05）,克隆形成率明显降低p〈0,05）,细胞凋亡率显著增加仞〈0．05）。这些结果提示,胶质瘤干／祖细胞的基础自噬活性很低,经槲皮素处理后,再经X线照射,胶质瘤干／祖细胞的自噬活性提高,辐射敏感性明显增加。     

白藜芦醇对UVA照射HaCaT细胞的防护效应及其机制

采用Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)检测HaCaT细胞的增殖水平。Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测HaCaT细胞的凋亡率和死亡率。单丹磺酰尸胺(Monodansylcadaverine,MDC)荧光染色和二氯荧光黄二乙酸酯(Dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)探针标记后,用激光共聚焦显微镜进行扫描,分别检测HaCaT细胞内自噬体和活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平变化。Western blot检测HaCaT细胞内LC3B-II、磷酸化AKT(p-AKT)和总AKT蛋白表达变化。结果显示:经10~80 J/cm~2 UVA照射后,HaCaT细胞的增殖水平随受照剂量的增加逐渐降低(p0.05);白藜芦醇预处理能显著促进UVA照射后HaCaT细胞增殖(p0.01),降低其凋亡率和死亡率(p0.05);经20 J/cm~2 UVA照射后3~24 h,HaCaT细胞内LC3B-II蛋白表达增强(p0.01);白藜芦醇预处理能使UVA照射后HaCaT细胞内自噬增强(p0.01),ROS水平降低(p0.01),p-AKT蛋白表达增强(p0.01)。提示白藜芦醇可能通过促进细胞自噬和AKT蛋白磷酸化,以及降低细胞内ROS水平,拮抗UVA导致的HaCaT细胞增殖抑制、凋亡和死亡。     

放射损伤对骨髓基质细胞支持小鼠粒-巨噬系祖细胞生长的影响

为阐明放射损伤时骨髓造血基质细胞支持粒－巨噬系祖细胞造血能力的变化。采用小鼠骨髓基质细胞体外融合培养和粒－巨噬系祖细胞集落（CFU－GM）培养法,观察5Gy照射对基质细胞支持小鼠CFU－GM生长的影响。结果表明,经5Gy照射后,骨髓基质细胞支持正常粒－巨噬系祖细胞造血的能力明显下降,以伤后3－5d最为显著,伤后10d仍未恢复至正常;当骨髓基质细胞和粒－巨噬系祖细胞均受到致伤因素作用时,照射组的CFU－GM形成能力下降更为明显,至正常对照组的10％以下。说明放射损伤后骨髓基质细胞的功能受到了不同程序的损伤,因此,在治疗由此所引起造血功能障碍的同时,应加强促进基质细胞修复的措施,可能会取得更满意的疗效。     

Preparation of Iron Nanoparticles from Iron Pentacarbonyl Using an Atmospheric Microwave Plasma

A novel method is introduced for preparing iron nanoparticles from iron pentacarbonyl using an atmospheric microwave plasma. The prepared iron nanoparticles were characterized by transmission electron microscopy and X-ray diffraction. The results show that the size of the particles can be controlled by adjusting the microwave power and the flow rate of the carrier gas.The magnetic properties of the synthesized iron particles were studied and a saturation magnetization of ～95 emu/g was obtained. The convenient preparation process and considerable production rate were also found to be satisfactory for industrial applications.     

18-冠-6/LA/Fe3O4复合磁性纳米粒子的制备及其吸附性能研究

Fe₃O₄磁性纳米粒子（MNPs）比表面积大、吸附能力强,且在外磁场作用下易于液固分离,冠醚具有对铀酰离子选择性配位的能力。本研究制备了兼具两者特点和优势的18-冠-6/LA/Fe₃O₄复合磁性纳米粒子。其结构经红外（IR）、扫描电镜-X射线能谱（SEX/EDX）、振动样品磁强计（VSM）、热综合分析仪（TGA）进行表征,表明18-冠-6/LA/Fe₃O₄复合磁性纳米粒子的粒径为12～23 nm,饱和磁化强度为56.34 emu/g。用制得的复合磁性纳米粒子对溶液中铀酰离子进行初步吸附实验,在选定的条件下,平衡吸附率达95%,操作方法快速简便,吸附后的磁粒子可方便地进行富集和回收。     

Effects of nanoparticles on fluorescence enhancement of the complexes of dsDNA and SYBR Green I

Fluorescence enhancement in a DNA-dye system is favorable for sensitive and accurate DNA detection/ sensing technologies.In this paper,we report that the fluorescence of the double-stranded DNA（dsDNA） and SYBR GreenⅠ（SG） system（dsDNA-SG） can be effectively enhanced by negatively charged magnetic iron oxide （Fe₂O₃@DMSA） and gold nanoparticles in suitable concentrations,but positively charged nanoparticles quench the fluorescence.Effects of the Fe₂O₃@DMSA on the fluorescence intensities are investigated with dsDNA-SG of different lengths or complexities.The results show that nanoparticles perform similarly in enhancing fluorescence intensity for several kinds of dsDNA.However,the dsDNA concentration determines the fluorescence amplitude.It shows that fluorescence intensity of lower concentration dsDNA is enhanced remarkably in DNA-SG.The finding may be useful in sensitive biomolecular detection.     

磁性纳米微粒的制备方法及其在放射免疫分析中的初步应用

采用化学共沉淀法合成水溶性正癸酸包覆的Fe3O4磁性纳米微粒,并以此为核心物理吸附羊抗兔IgG制备磁性纳米第二抗体,作为磁性分离载体用于放射免疫分析中。用光子相关光谱仪与透射电镜测定了磁性纳米微粒的粒径大小、粒径分布和多分散度等。研究了羊抗兔IgG包被磁性纳米微粒的包被介质的pH、羊抗兔IgG用量和包被时间等制备条件对磁性纳米微粒二抗免疫反应结合能力和非特异结合的影响。结果表明：化学共沉淀法制得的Fe3O4平均粒径约为10-20nm,吸附羊抗兔IgG后其平均粒径为1000nm左右,并可用于放射免疫分析中。提示羊抗兔IgG可通过物理吸附的方法固定在磁性纳米微粒上,其优点是制备方法简便、省时和成本低,在放射免疫分析中具有磁性分离的方便性,具有较大的医学应用价值。     

同步辐射圆二色谱法研究Fe3O4纳米颗粒对细胞色素C结构的影响

四氧化三铁纳米颗粒(Fe3O4-NPs)在生物医学领域有着广泛的应用。通过同步辐射真空紫外圆二色谱(SRCD)和紫外可见(UV-Vis)吸收谱技术研究了Fe3O4纳米颗粒的粒径(10 nm和40 nm)对细胞色素C(Cyt c)结构的影响。结果表明,随着Fe3O4-NPs颗粒物浓度的增大,Cyt c在408 nm处的吸光度值逐渐下降。SRCD结果显示Cyt c与Fe3O4-NPs作用后,蛋白的α螺旋含量减少,β折叠含量增加;Fe3O4-NPs与Cyt C的作用强度具有尺寸依赖性,小尺寸的Fe3O4-NPs作用更为明显。     

A M?ssbauer investigation of nano-NiFe alloy/expanded graphite for electromagnetic shielding

A new material is prepared by impregnating the expanded graphite(EG) into ethanol solutions of metal acetate and then drying and reducing it in H2.It contains the EG and the nanoparticles of the magnetic Ni–Fe alloy for the electromagnetic shielding.Its morphology,phase structure,magnetic properties,and electromagnetic shielding effectiveness(SE) are investigated in our experiment.It shows that the morphology,the phase structure,and the magnetic property of the composite can be modified by altering the Ni content in the alloy nanoparticles.Interestingly,the SE can be enhanced to 54–70 d B at low frequencies(300 kHz–10 MHz) by dispersing the magnetic nanoparticles onto EG.     

用作核磁共振造影增强剂的氧化铁溶液理化性质测定

为探讨大分子包埋氧化铁微粒溶液用作核磁共振造影增强剂的可能性，测定其铁含量、粘度、密度、分子大小、磁化率等理化性质；在核磁共振诊断仪上测定铁浓度随T1、T2信号强度的变化。结果表明，得到氧化铁微粒溶液的铁溶液为8．5g／L，用电镜测定的颗粒大小为10nm，粘度为0．00168Pa.s，当微粒溶液铁浓度为0．1mmol/L时，T2信号强度的下降大于50％，T1信号强度在铁浓度为0．2－0．4mmol/L时，有一峰值，然后下降。溶液放置1年，无大颗粒和明显沉淀物出现。说明本实验制备的葡聚糖包埋氧化铁溶液颗粒均匀，悬浮性好，在核磁共振诊断上显示出，随着铁浓度的增加，T2信号强度下降快，适于用作核磁共振造影的阴性增强剂。     

纳米磁性氧化铁溶液的颗粒度测定

用透射电镜、激光散射、原子力显微镜、穆斯堡尔谱等方法测定了3种不同批号自制磁性氧化铁溶液 样品的颗粒度。结果显示,本工作制备的磁性氧化铁的颗粒度有一个大致分布范围,为5-100 nm,激光散射 扫描仪和原子力显微镜的结果还显示,<20 nm的颗粒是主要成分;各种方法测得颗粒度略有差异。     

Fe-(Co6Ag94)颗粒膜磁光芯片的制备及研究

采用二分掩膜技术向溅射沉积的(Co6Ag94)薄膜中组合注入Fe离子，制备成具有不同Fe含量的16单元Fe-(Co6Ag94)颗粒膜磁光芯片。对制备态和退火态的Fe-(Co6Ag94)颗粒膜的物相进行了XRD研究。不同退火温度下，物相的演变反映出了退火过程中Co、Fe相和FeCo相纳米微晶的析出长大过程。采用原子力显微镜(AFM)对薄膜表面的研究结果表明，在退火过程中形成了嵌于基底中的纳米颗粒相。对制备态和不同温度退火后芯片各单元的磁光性能进行了测量，结果表明极向Kerr旋转角晚随着注入Fe含量的增加而增大，这可归因于颗粒膜中铁磁相的增多。在500℃以下，随着退火温度的增加，Fe-(Co6Ag94)颗粒膜的克尔磁光效应增加。对不同温度退火的样品进行穆斯堡尔谱测量，结果证明一定尺寸纳米Fe微晶颗粒的出现是磁光效应提高的主要原因之一。     

Magnetic behaviour of nanosized zinc ferrite under heavy ion irradiation

Present investigation reports the effect of 100 MeV oxygen beam on the magnetic properties of zinc ferrite nanoparticles. The nanoparticles for this study were synthesized by using the nitrates of zinc and iron in the matrix of citric acid and by sintering the precursor at 500 and 1000 °C. Both these samples were irradiated by 100 MeV oxygen beam with two different fluence 1 × 10¹³ and 5 × 10¹³ ions/cm². Besides the presence of cubic spinel phase, ZnO phase appears after the irradiation in both the samples. A decrease in average particle size was observed in the irradiated samples as estimated by X-ray diffraction pattern. The magnetization versus applied field curves show the decrease in magnetization with the fluence of the beam, which is attributed to the ZnO phase. The thermal magnetization curve for the sample ZF500 shows almost constant value of blocking temperature after irradiation whereas for ZF1000 it increases from 18 K to 32 K at a fluence of 5 × 10¹³ ions/cm².