大口黑鲈鱼皮胶原蛋白肽的制备及抗氧化活性研究

目的：探究酶种类对胶原蛋白肽抗氧化活性的影响。方法：从大口黑鲈(Micropterus salmoides)鱼皮中提取胶原蛋白,采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶酶解胶原蛋白,得到碱性蛋白酶酶解胶原蛋白肽(APP)、中性蛋白酶酶解胶原蛋白肽(NPP)、木瓜蛋白酶酶解胶原蛋白肽(PP)、胰蛋白酶酶解胶原蛋白肽(TP),比较其总抗氧化活性、还原活性、对DPPH·、·OH 和O-2·清除能力以及亚铁离子螯合能力和脂质氧化抑制活性。结果：4种蛋白酶酶解胶原蛋白肽都具有抗氧化活性,且抗氧化能力与胶原蛋白肽浓度呈正相关,其中APP的抗氧化活性最佳,总抗氧化活性和还原活性分别为1.725和0.958,对DPPH·和O-2·清除率分别为56.35%和38.41%。结论：碱性蛋白酶酶解的胶原蛋白肽抗氧化活性更佳。     

模拟胃肠消化对牡蛎低聚肽抗氧化活性的影响

以去壳牡蛎肉为原料通过酶解法制备牡蛎低聚肽,并通过体外模拟消化试验,对比消化前后牡蛎低聚肽分子量分布、DPPH自由基清除能力、羟自由基(·OH)清除能力、ABTS自由基清除能力、氧自由基吸收能力(ORAC)变化,探究牡蛎低聚肽经模拟胃、肠道消化后抗氧化活性的变化。试验结果显示,牡蛎低聚肽的相对分子量主要在1 000 Da以下,胃蛋白酶和胰蛋白酶消化后重均分子量下降不超过8.2%;胃蛋白酶和胰蛋白酶消化后,DPPH自由基清除率降低分别不超过7.9%,8.7%;胃蛋白酶和胰蛋白酶消化后,·OH清除率降低分别不超过9.3%,3.8%;胃蛋白酶消化后,ABTS自由基清除率降低9.2%,胰蛋白酶消化后,ABTS自由基清除率提高3.6%;胃蛋白酶和胰蛋白酶消化后,ORAC值分别提高11.5%,1.3%。胃肠消化对牡蛎低聚肽的抗氧化活性评价各指标均无显著性影响(P＞0.05)。说明牡蛎低聚肽具有较好的综合抗氧化活性和稳定性。     

合浦珠母贝肉短肽的分离及其抗氧化活性研究

为制备具有抗氧化能力的合浦珠母贝肉活性肽,本文采用Sephadex G-25分子筛层析法对合浦珠母贝肉酶解产物进行分离,测定分离到的各活性组分分子量及其总抗氧化活性、DPPH自由基清除能力及羟自由基清除能力。结果表明,合浦珠母贝肉酶解产物经Sephadex G-25分离得到6个主要活性组分,相对分子量分别为1437.5、833.7、421.9、244.7、89.0、17.4u,其中功能短肽F1(1437.5u)、F2(833.7u)、F4(244.7u)的抗氧化效果较强,特别是F2(833.7u)短肽具有最强的总抗氧化能力、DPPH自由基清除能力及羟自由基清除能力。该研究为合浦珠母贝肉抗氧化活性肽的开发提供理论技术依据。     

三酶法制备罗非鱼鱼皮胶原蛋白抗氧化肽及活性研究

为了探索制备罗非鱼鱼皮胶原蛋白抗氧化肽的最佳工艺,在碱性蛋白酶和胰蛋白酶酶解的基础上,以酶解温度、酶解时间、酶解pH值和酶与底物质量比([E]/[S])为试验因素,以水解度和DPPH自由基清除率为响应值,采用响应面分析法优化Orientase 20A酶的酶解条件。结果表明:最优工艺参数为:酶解温度为41.74℃、pH3.97、酶解时间为6h、[E]/[S]为1.5%,酶解液水解度和DPPH自由基清除率的预测值分别为9.42%和35.01%,验证值分别为9.57%和35.21%。响应面对酶解法制备罗非鱼鱼皮胶原蛋白抗氧化肽的酶解条件的优化是可行的,可以用于实际预测。抗氧化活性实验表明,酶解肽具有较强的清除DPPH自由基和ABTS+.能力,其IC50值分别为10.78mg/mL和8.26mg/mL。     

不同品种苦荞蛋白的复合酶解及其多肽抗氧化活性

为研究不同苦荞多肽的抗氧化活性,开发相关产品,提高苦荞的附加值。该试验通过碱提酸沉酶辅助的方法提取苦荞蛋白质,再经由胰蛋白酶与碱性蛋白酶复合酶水解苦荞蛋白,利用响应面优化得到两种酶复合的最佳酶解条件为蛋白浓度5 mg/mL、酶添加量0.1%、碱性蛋白酶与胰蛋白酶质量比1∶3、酶解pH7.5、酶解温度55℃、酶解时间3 h。对复合酶解多肽产物进行抗氧化活性测定,结果表明,川荞1号和云苦3号的超氧阴离子自由基清除率较高,分别为97.23%、96.45%;而川荞1号和米荞对ABTS+自由基和DPPH自由基均表现出较高的清除能力。对ABTS+自由基清除能力分别为51.54%和54.41%;对DPPH自由基的清除能力分别为87.35%和84.91%。迪苦2号和川荞1号对羟基自由基清除率较高,分别为90.47%、91.32%。     

脱脂米糠抗氧化肽的制备工艺研究

为了得到脱脂米糠抗氧化肽的最佳制备工艺,研究了胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶酶解脱脂米糠蛋白的进程特性以及不同的酶解条件对脱脂米糠抗氧化肽活性的影响。从5种蛋白酶中筛选出最合适的酶,通过单因素实验考察了底物浓度、加酶量、pH、温度以及时间对酶解产物水解度和ABTS自由基清除率的影响,在单因素实验的基础上,以酶解产物的ABTS自由基清除率为响应值,进行Box-Behnken中心组合实验。结果表明:选用碱性蛋白酶制备脱脂米糠抗氧化肽效果最好;最佳酶解工艺条件为加酶量1.8%、温度50℃、时间276 min、pH9.0、底物浓度5%;在最佳酶解工艺条件下,所得脱脂米糠抗氧化肽对ABTS自由基清除率可达71.85%。     

条斑紫菜活性肽的抗氧化作用

以条斑紫菜为原料,使用木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶水解紫菜蛋白制备活性肽,采用还原能力、清除羟自由基和二苯代苦味酰基自由基作为抗氧化性评价指标,研究紫菜活性肽的体外抗氧化活性,并测定其分子质量分布。结果表明：3种蛋白酶对紫菜蛋白具有较好的酶解效果,酶解产物具有一定的还原能力;自由基清除率和底物浓度之间具有正相关关系,木瓜蛋白酶酶解活性肽清除羟自由基活性最强,半数清除率质量浓度为0.397mg/mL;胃蛋白酶酶解活性肽清除二苯代苦味酰基自由基活性最强,半数清除率质量浓度为0.261mg/mL;经测定,具有抗氧化活性的小分子肽分子质量分布在148～1963u之间。     

核桃粕源抗氧化活性肽的酶解制备及活性分析

目的：深度利用核桃粕蛋白。方法：采用分级分离法从核桃粕中提取蛋白质后,分别用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶和风味蛋白酶5种蛋白酶对其进行水解,并比较分析胰蛋白酶酶解物（trypsin hydrolysate,TH）、木瓜蛋白酶酶解物（papain hydrolysate,PH）、中性蛋白酶酶解物（dispase hydrolysate,DH）、碱性蛋白酶酶解物（alcalase hydrolysate,AH）和风味蛋白酶酶解物（flavourzyme hydrolysate,FPH）的抗氧化活性;以DPPH自由基清除率、ABTS自由基清除率和羟自由基清除率为检测指标分析不同浓度AH的体外抗氧化性;采用LC-MS/MS技术鉴定AH中所有肽的序列,并利用PeptideRanker、BIOPEP-UWM数据库和分子对接工具AutoDock1.5.6筛选潜在的核桃抗氧化活性肽;将上述两条肽分别与Keap1蛋白进行计算机模拟分子对接,并利用斑马鱼胚胎氧化损伤模型,对人工合成的两条抗氧化活性肽的抗氧化活性进行分析。结果：5种酶解物中抗氧化活性较好的AH对DPPH自由基、ABTS自由基和羟自由基的最佳清除率分别为（71.56±0.75）%,（60.63±0.45）%,（98.63±0.06）%。LC-MS/MS鉴定并通过计算机分析预测得到两条活性最优的肽,即：ALWPF和PLRWPF;两条抗氧化活性肽均能与Keap1蛋白的活性部位结合,其结合能分别为-9.2,-9.6 kJ/mol。ALWPF和PLRWPF肽处理斑马鱼胚胎的安全质量浓度范围分别为0～50,0～30 μg/mL。结论：从核桃粕中鉴定出两条抗氧化肽,其对斑马鱼胚胎具有保护作用。     

黄鳝肉双酶水解产物的功能特性及其抗氧化活性

为了深入了解酶解时间和蛋白酶种类对黄鳝肉酶解产物抗氧化活性和功能特性的影响,采用木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶和胰蛋白酶及其双酶组合在各自最适条件下对黄鳝肉进行酶解,制备不同水解度的酶解产物,并对其抗氧化活性和功能特性进行了研究。结果表明:随着酶解时间的增加,黄鳝肉酶解产物的抗氧化活性逐渐增强,当酶解时间为3 h时,酶解产物具有较强的清除DPPH和ABTS自由基的能力,最大清除率可达62.18%和81.76%,但酶解时间进一步延长,酶解产物的抗氧化能力则不断下降。在相同酶解时间下,双酶酶解产物比单酶酶解产物具有较强的清除自由基能力。黄鳝肉双酶酶解产物在溶解性和热稳定性方面优于单酶酶解产物,而在乳化性方面则相对较差,并且酶解时间对黄鳝肉酶解产物的功能性影响较大。     

东海细点圆趾蟹含肉率及肌肉营养价值的分析

对细点圆趾蟹的含肉率,以及利用常规肌肉营养测试方法对东海细点圆趾蟹的肌肉营养成分进行测定,结果表明:细点圆趾蟹的含肉率为23.67%,蟹肌肉粗蛋白质、粗脂肪、水分、灰分的含量分别为17.94%,1.37%,73.25%,4.7%。分析了肌肉蛋白质中17种常见氨基酸含量(色氨酸未测),其氨基酸总量为16.43%,其中必需氨基酸占氨基酸总量的38%,鲜味氨基酸占氨基酸总量的36%,其构成比例符合联合国粮农组织/世界卫生组织(FAO/WHO)标准,并且含有丰富的钾、钙、镁、铁等矿质元素。综合数据表明,细点圆趾蟹具有较高的营养价值,适合进一步开发利用。