新疆地区不同酸奶中优势乳酸菌的分离与鉴定

在乳制品工业中乳酸菌被认为是重要的益生菌之一。本文对来自新疆的酸驼奶、酸牛奶、酸马奶、酸羊奶以及俄罗斯酸奶中的优势乳酸菌进行分离,结合16S rRNA序列同源性分析和生理生化试验,鉴定出几种优势乳酸杆菌,即发酵乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、戊糖乳杆菌。     

建昌板鸭中乳酸菌的分离鉴定与特性

以MRS培养基为基础培养基对自然发酵板鸭中的乳酸菌进行分离、鉴定及其基本特性的研究。从建昌发酵板鸭中分离得到17个菌株。进一步测试表明在30℃培养时分离的乳酸菌生长最好,且在5g/100mL NaCl和100mg/L Na2NO2的环境中均能生长,最适宜作为建昌板鸭发酵剂的是B1号菌株。     

新疆特色干酪中乳酸菌的分离鉴定

从新疆不同牧区采集工艺不同的干酪制品,对其中的乳酸菌进行分离纯化、生理生化性质试验和16S rRNA分析.结果表明,分离、纯化出的104株乳酸菌种,有82株为乳杆菌属(Lactobacillus),12株为肠球菌属(Enterococcus),10株为魏斯氏菌属(Weissella).利用16S rRNA序列同源分析和系统发育树分析对具有不同生理生化特性的代表菌株进行了分子鉴定,鉴定结果为TNM-2与干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、Y5-4与食窦魏斯氏菌(Weissella cibaria)、NS2-2与植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)的同源性达到100％,NM-2与瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)、Y1-1与马乳酒乳杆菌(Lactobacillus kefiranofaciens)、WG与耐久肠球菌(Enterococcus durans)的同源性达到99％.     

内蒙古鄂尔多斯地区酸粥发酵液中乳酸菌的分离鉴定

对采集自内蒙古鄂尔多斯地区的6份酸粥发酵液中的乳酸菌进行了分离、鉴定和生物学特性研究。采用15,30,45℃3个分离温度共分离出18株乳酸菌。通过16S rRNA序列分析等研究将这些菌株鉴定为Lactobacillus(L.)casei8株,L.plantarum2株,L.brevis3株,L.fermen-tum1株,L.helveticus4株。分析认为L.casei是鄂尔多斯地区酸粥发酵液中的优势菌群。对30℃分离株进行传统生化鉴定,结果与16S rRNA序列分析结果一致。     

“藏灵菇”酸乳中优势乳酸菌的分离鉴定

利用碳酸钙平板法从藏灵菇菌块为发酵剂制备的发酵酸乳中分离到2株产酸细菌,对其进行形态、生理生化测定及16SrRNA序列分析。结果表明,发酵凝乳中的这两株优势乳酸菌是乳酸乳球菌乳酸亚种。本研究结果为开发稳定的优良发酵剂提供菌种资源,并为进一步研究藏灵菇酸奶的保健功能奠定基础。     

泡菜中乳酸菌的分离鉴定及模拟环境胁迫抗性的研究

从市售泡菜中分离到7株乳酸菌,对其进行形态学、生理生化及16SrRNA基因鉴定。基于生理生化特性和16S rRNA基因序列的同源性比较,以及系统发育分析,鉴定7株菌均为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）。并进一步对所分离菌株进行低pH和高胆盐浓度条件下存活能力测试,实验结果表明,S-2、D-1、D-3在低pH和高胆盐浓度条件下存活率为100%～135%,在pH1·5的培养基中4h后活菌数分别为8·4×108、8·3×108、8·1×108cfu/mL,在0·3%胆盐条件下4h后活菌数分别为8·5×108、8·9×108、8·4×108cfu/mL。      

德宏水牛乳饼中乳酸菌的分离鉴定及发酵性能研究

德宏水牛奶乳饼是云南特有的乳制品,微生物资源丰富,是乳酸菌的重要来源,也是分离筛选优良发酵剂的天然基础。本文采用16S rRNA基因序列分析法和纯培养法对15份水牛奶乳饼中乳酸菌种属进行分离鉴定,通过对菌株产酸、产香、发酵乳活菌计数等比较,以筛选出具有优良发酵特性的乳酸菌。结果表明:15份水牛奶乳饼样品中共分离鉴定出57株乳酸菌（3个属,6个种和1个亚种）,其中Lactobacillus fermentum和Lactobacillus oris为优势菌属,占总菌属的36.84%和24.56%。57株乳酸菌发酵特性比较后得到两株优势菌株MGR3-1和MBR1-1。此研究为后续开发和应用优良发酵剂提供理论基础。      

泡菜中乳酸菌的分离鉴定及体外抗性筛选

从泡菜中分离得到5株乳酸杆菌,经16S rDNA种属分析,其中4株为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),编号分别为E-6-1、E-1-2、E-6-3、D-2-3,1株为消化乳杆菌(Lactobacillus alimentarius),编号为C-2-1。通过人工胃液和胆盐试验来确定5株菌的体外抗性。结果表明,D-2-3乳酸菌具有较好的抗人工胃液能力,其在pH 3.0的人工胃液处理3h后的存活率高达95.38%,且在1,2,3g/L胆盐中均能较好的生长。说明该菌株具有益生菌潜质。     

传统发酵豆酱中乳酸菌的分离、筛选及鉴定

在豆酱的自然发酵过程中,乳酸菌是促成豆酱风味物质形成的重要微生物。豆酱呈味主要是通过乳酸菌发酵糖类产生小分子醛、酸、酯等风味物质。以黑龙江发酵豆酱作为研究对象,对发酵过程中的乳酸菌进行传统的分离、培养、鉴定和筛选,并利用16S rDNA的序列测定技术,对乳酸菌群进行研究。从豆酱样品中共分离出有溶钙圈的菌株44株,其中过氧化氢试验阴性,同时革兰氏染色阳性的菌株共6株,初步鉴定为乳酸菌,将其分别命名为:HDBL-1,HDBL-2,HDBL-3,HDBL-4,HDBL-5,HDBL-6。同时,获得了1株产酸低且耐盐菌HDBL-7,对该菌株进行鉴定后,确定其为乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)。该研究为改善豆酱的品质和豆酱的工业化生产奠定了菌种来源基础。     

新疆地区母乳中乳酸菌的分离鉴定及潜在益生菌的筛选

母乳是婴儿营养物质的主要来源且蕴藏着丰富的乳酸菌资源。为了了解新疆地区母乳中乳酸菌组成,筛选母乳中具有优良益生特性的双歧杆菌。该文通过传统纯培养方法对6份新疆地区母乳中的乳酸菌进行分离鉴定。以益生菌株Bifidobacterium lactis BB12作为对照,通过发酵特性、体外胃肠液耐受性及胆盐耐受性试验对双歧杆菌进行筛选,得到2株具有潜在益生特性的双歧杆菌,对其进行最适pH,最适温度,对NaCl的耐受性,生长曲线及菌株产酸能力等生理生化特性试验。从6份样品中共分离到69株乳酸菌,鉴定为7个属11个种及亚种,其中Streptococcus salivarius为优势菌,通过初步筛选获得2株具有潜在益生特性的双歧杆菌：Bifidobacterium longum IMAU99727和Bifidobacterium animalis subsp.lactis IMAU99728,有望作为新的母乳源益生菌进行其他益生特性研究和开发利用。     

新疆哈萨克族传统发酵驼乳中乳酸菌的分离鉴定

分别从新疆玛纳斯、乌兰巴依、南山、水西沟采集的4份酸驼乳中,分离得到乳酸菌22株。采用传统形态学、生理生化特性方法对乳酸菌进行鉴定,鉴定结果为Lactobacillus16株(72.72%),Lactococcus 3株(13.63%),Enterococcus 2株(9.10%),Streptococcus 1株(4.55%),优势杆菌为Lactobacillus helveticus(18.18%),优势球菌为Lactococcus lactis subsp.lactis(13.63%)。利用16S rDNA序列同源性分析和系统发育树分析对MLS1进行了分子鉴定,鉴定结果为菌株MLS1与Lactobacillus rhamnosus的同源性达到98.1%,与传统生理生化鉴定结果一致,表明了16S rDNA序列分析应用在乳酸菌鉴定上的准确性。     

Diversity of the Predominant Spoilage Bacteria in Water-Boiled Salted Duck during Storage

Abstract: The spoilage microbiota in water-boiled salted duck during storage at 4 °C was determined using culture-dependent and independent methods. Analysis of the denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) patterns of PCR amplicons targeting the V3 region of the 16S rDNA and sequencing of the bands allowed profiling of the microbiota present in the duck. Community DNA extracts were prepared directly from water-boiled salted duck and from culturable bacterial fractions harvested from both MRS and PCA media. The spoilage bacteria mainly consisted of Staphylococcus saprophyticus, Macrococcus caseolyticus, Weissella, Halomonas sp. or Cobetia sp., and Exiguobacterium sp. based on sequencing and homology search of the DGGE bands. It appeared that both the bacterial counts and diversity increased during storage time. By plating method, bacterial counts in MRS agar increased from 10⁴ to 10⁸ CFU/g from day 1 to 10, while total bacterial counts in PCA agar reached 10⁹ CFU/g after 10 d. Total of 14 strains isolated from PCA and MRS agar were identified as M. caseolyticus (2), S. saprophyticus (7), S. sciuri (1), W. paramesenteroides (2), and W. confusa (2) by 16S rDNA sequencing. The identification of the spoilage-related microbiota is helpful to better understand the bacteria ecology in water-boiled salted duck and may lead to the discovery of appropriate preservation strategies.     

东北酸菜中乳酸菌的分离鉴定与耐酸性菌株的筛选

为筛选出高耐酸性乳酸菌,通过形态学观察和随机扩增多态性DNA标记分析技术,对自然发酵酸菜中分离纯化的乳酸菌菌株进行初步鉴别,随后利用16S rDNA序列同源性分析进行种属鉴定,并筛选在pH 3.0条件下存活率较高的菌株。结果表明,72 株分离乳酸菌包括62 株乳杆菌和10 株乳球菌,其中有21 株菌的指纹图谱不相同,经鉴定,分别为乳肠球菌（Enterococcus lactis）、弯曲乳杆菌（Lactobacillus curvatus）、米曲霉乳杆菌（L. oryzae）、短乳杆菌（L. brevis）、副干酪乳杆菌（L. paracasei）、棒状乳杆菌（L. coryniformis）。pH 3.0条件下存活率在75%以上的菌株有8 株,管家基因rpoA序列同源性分析结果表明高耐酸性的两株菌株为植物乳杆菌（L. plantarum）,为开发功能性乳酸菌食品提供了一定理论支持。     

传统发酵酸乳中乳酸菌的分离鉴定

对喀什市、疏勒县和疏附县传统发酵酸奶中的乳酸菌进行分离,结合菌落形态特征和凝乳试验,筛选出6株菌株(K3、L1、L2、L3、F1、F2),通过耐盐和耐酸试验,得知菌株L1在5%盐浓度、培养24h时存活率达到45.95%,F1在pH 2、培养2h时存活率为6.33%;通过16SrRNA序列扩增和序列比对后,初步确定K3、L1、L2为德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii),L3、F1、F2为发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)。     

腌虾蛄中优势乳酸菌的分离筛选与鉴定

从腌虾蛄中分离49 株疑似乳酸菌株,通过菌株的形态学观察和生理生化实验,初步筛选出L14、L22、L28这3 株乳酸菌菌株。再通过16S rDNA序列测定和分析进一步验证,结果表明,菌株L14与屎肠球菌（Enterococcusfaecium）的相似性达到99%,菌株L22与短乳杆菌（Lactobacillus brevis）的相似性达到98%,菌株L28与棒状乳杆菌扭曲亚种（Lactobacillus coryniformis subsp. torquens）的相似性达到99%。对3 株菌株的生长情况、产酸、耐温和耐盐等性能进行测定,结果表明,3 株菌株在24 h内生长情况OD600 nm值均超过1.0,测定24 h内菌株产酸pH值均在4.0左右,菌株L22最低可达到pH 3.97,3 株菌株在25～35 ℃之间生长性能良好,均能在食盐质量浓度为60 g/L的情况下正常生长。     

乳酸菌素生产菌的分离与鉴定

对乳酸菌素产生菌进行分离,得到4株理想菌株。利用高效液相色谱检测其发酵液,初步确定4菌株均为乳酸菌,其中Ⅱ32菌株产乳酸最多,对各指示菌的抑制作用最显著,对该菌株作进一步的研究。Ⅱ32菌株在MRS培养基上可以生长,最适生长温度为28℃,革兰氏染色呈阳性,无芽孢。通过API生化反应实验、16SrDNA测序可进一步确定该菌株是L·paraplantarum或L·paraplantarum。最终通过对recA-gen的PCR产物检测,鉴定菌株Ⅱ32为Lactobacillusparaplantarum(类植物乳杆菌)。牛津杯抑菌试验显示,该菌株的发酵液不仅对多数G+细菌的生长有较强的抑制作用,而且对大肠杆菌、沙门氏菌等Gˉ细菌的生长也具有明显的抑制作用,但对真菌没有活性。     

16S rRNA序列分析及其在乳酸菌分类鉴定中的应用

综述16S rRNA的特点及序列分析的基本方法,并详细介绍了几种在乳酸菌分类和鉴定中较常用的16S rRNA相关的分子生物学方法,如16S rRNA直接测序、寡核苷酸探针、限制性片段长度多态性分析、温度梯度凝胶电泳等,以及这些方法的研究进展。     

腊鱼中优势乳酸菌的分离、纯化及性质鉴定

为了改进传统腊鱼生产工艺并研究腊鱼生产中优势乳酸菌的种类及性质,利用鉴别性培养基从传统腊鱼制品中分离得到25株疑似菌株,根据生理生化实验确定其性质,获得4株优势菌株分别为干酪乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚种、香肠乳杆菌、乳酸乳杆菌,并考查了4株菌株的24h产酸能力及生长特性。