新型牛蛙抗菌肽Temporin-La对金黄色葡萄球菌感染模型小鼠的治疗效果

目的探讨新型牛蛙抗菌肽Temporin-La对金黄色葡萄球菌感染模型小鼠的治疗效果。方法采用二倍稀释法检测抗菌肽Temporine-La对临床主要致病菌的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC);透射电镜观察Temporine-La对金黄色葡萄球菌的作用效果;复制金黄色葡萄球菌表皮感染小鼠模型,分别用4 U/ml青霉素和10μg/ml Temporin-La进行治疗,另设生理盐水对照组和空白对照组,感染后第4天,对各组小鼠进行白细胞计数、细菌计数、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达水平检测及病理组织切片观察。结果Temporin-La对革兰阳性菌的抑菌活性高于革兰阴性菌,其中对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强;透射电镜观察显示,经100μg/ml Temporin-La处理的金黄色葡萄球菌出现了质壁分离的现象,细胞壁缺失或发生裂解,金黄色葡萄球菌发生裂解而死亡;感染后第4天,青霉素组和Temporin-La组白细胞数及创面下肌肉组织细菌数均明显低于生理盐水对照组(P<0.05或P<0.01),Temporin-La组小鼠血清VEGF的表达水平明显高于青霉素组和空白对照组(P<0.05),青霉素组和Temporin-La组小鼠的创口修复情况明显优于生理盐水对照组。结论 Temporin-La具有抗小鼠金黄色葡萄球菌感染的效果,为其临床应用提供了实验依据,也为抗感染治疗提供了新的思路。     

金黄色葡萄球菌滤液中凝固酶组分分析

目的对金黄色葡萄球菌滤液制剂中凝固酶进行纯化,并对其性质及作用进行分析。方法用分子筛层析等方法纯化凝固酶,用HPLC、光谱等方法对其进行纯度和性质分析。用双向免疫扩散试验和T淋巴细胞增殖试验检测其生物学特性。结果经纯化的凝固酶纯度达97%以上,相对分子质量约为350000,含17种氨基酸,主要紫外吸收峰出现在260nm左右,α-螺旋含量占27.3%,组分中含糖约18.1%,T淋巴细胞增殖试验和双向免疫扩散法证明纯化的凝固酶具有生物学活性。结论金黄色葡萄球菌滤液中凝固酶为一类糖与蛋白复合物,具有抗原活性,可能在金黄色葡萄球菌滤液的功效中发挥作用。     

海南石斛和昌江石斛体内抗菌活性实验研究

目的:探索昌江石斛和海南石斛体内抗菌活性。方法:根据体外抗菌试验结果,选择A、E、F、G的高、中、低浓度考察其对金色葡萄球菌的体内抗菌活性,A、B、C、E、F的高、中、低浓度对白色念珠菌的体内抗菌活性。经过剂量梯度筛选,确定各组分小鼠的LD50;通过观察不同菌液浓度引起小鼠死亡率,确定小鼠的MLD;建立染菌小鼠模型,确定各个药物体内抗菌效果。结果:E、F对感染金黄色葡萄球菌的小鼠具有保护作用;C、E、F对感染白色念珠菌的小鼠具有保护作用。结论:海南石斛和昌江石斛具有一定的体内抗菌活性,值得进一步研究和开发。     

车前草内生芽孢杆菌CQC1的鉴定与抗菌活性研究

从车前草组织中分离一株对金黄色葡萄球菌具有拮抗活性内生芽孢杆菌CQC1,结合形态特征、生理生化特征及16SrDNA序列分析对该菌株进行鉴定;以牛津杯法测定菌株发酵液抗菌活性、抗菌谱;同时以薄层色谱-生物自显影技术分离筛检和确定抗菌活性成分。结果表明,根据形态特征、生理生化特征及16SrDNA序列比对,该CQC1菌株被鉴定为高地芽孢杆菌,其无菌发酵液对金黄色葡萄球菌表现较强抑制活性,抑菌圈直径达到22.4 mm;通过薄层色谱-生物自现影筛检活性成分,结果显示,其抗菌活性成分可能为肽类物质,对葡萄球菌、链球菌、白色念珠菌等兰氏阳性菌抑制活性明显。     

半边旗抗肿瘤活性成分5F对照品的制备和鉴定

制备并鉴定了半边旗抗肿瘤活性成分11α-羟基-15-氧-16-烯-对映贝壳杉烷-19-酸(5F)的对照品.采用二氧化碳超临界萃取、有机溶剂萃取、柱层析、重结晶方法进行分离、纯化以制备半边旗5F化合物单体;采用TLC、HPLC-MS检测杂质;采用HPLC峰面积归一化法测定纯度;采用理化性质、波谱特征鉴定其化学结构.结果表明,从半边旗地上部分的二氧化碳超临界萃取物中分离得到纯度为99.2%的5F对照品.该对照品可以作为半边旗药材以及主要成分为5F的药物制剂含量测定的对照物.     

关于环状脂肽类物质的结构和生物特性分析

环脂肽是由微生物发酵生成的次级代谢产物,由亲水的肽环与亲油的脂肪烃组成,具有抗真菌、抗肿瘤和抗病毒等生物学功能。为了研发新型抗生素,综述了细菌来源的环脂肽、蓝细菌的环脂肽和其它微生物的环脂肽类化合物的化学结构,并介绍了环脂肽的抗肿瘤、抗菌、抗炎和其它生物学活性。     

一株产脂肽类生物表面活性剂菌株的分离及代谢产物分析

采用多次富集培养、血平板筛选方法,从新疆克拉玛依油田油水样中分离得到产生物表面活性剂菌株L1。该菌株与已培养的土壤芽孢杆菌(Brevibacillus agri)的16S rDNA序列同源性达到99%;其代谢产物具有降低表面张力的作用,可以将发酵液表面张力从最初的69.56 mN.m-1降到29.36 mN.m-1;菌株代谢产物经薄层层析分析初步鉴定为脂肽类生物表面活性剂,红外光谱定性该生物表面活性剂属于环脂肽类表面活性剂。     

放线菌MY-048菌株中活性成分的初步研究

从四川绵阳地区的药用植物根际分离筛选到一株放线菌MY—048菌株,其发酵液对几种细菌有抑制作用,尤其对金黄色葡萄球菌的作用效果明显。对发酵液进行稳定性测定,结果表明MY—048的发酵液在中性及酸碱条件下都稳定,在强酸和强碱条件下抑菌活性丧失:发酵液能经受75℃水浴60 min仍保持原来的抗菌活性,温度升高到100℃时活性丧失;对MY—048的生长与活性物质产量进行比较,发现在培养的144 h时活性物质的产量及菌体生长量均达到最高峰;通过硅胶柱层析,制备型薄层色谱,得到一个有活性的化合物,高压液相(HLPC)检测纯度为97%。     

重组金黄色葡萄球菌肠毒素B的原核表达、纯化及其免疫原性

目的 对金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)基因定点突变体进行克隆、表达及纯化,并检测其免疫原性,为研制马抗SEB免疫球蛋白F(ab′)2制品奠定基础。方法 对SEB基因序列进行定点突变和修饰以及偏性密码子优化后,构建重组表达质粒pET-22b-SEB,转化E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达重组SEB蛋白,经离子交换层析纯化后,HPLC法检测重组SEB蛋白抗原纯度。Western blot法检测重组SEB蛋白抗原免疫活性;将不同浓度重组SEB蛋白抗原腹腔注射BALB/c小鼠,进行致病力、抗体效价、中和抗体活性检测。结果 质粒pET-22b-SEB经双酶切及测序鉴定证明构建正确。纯化的重组SEB蛋白相对分子质量约28 300,纯度大于90%,与天然SEB具有一致的免疫活性,且具有良好的安全性;免疫小鼠抗体效价达1∶81 920,可有效诱导小鼠产生中和抗体。结论 成功对SEB进行了定点突变减毒,经克隆、表达及纯化获得高纯度的重组SEB蛋白抗原,具有良好的免疫原性。     

奇异变形杆菌-金黄葡萄球菌-铜绿假单胞菌吸附联合疫苗的制备及其对小鼠的保护效果

目的制备奇异变形杆菌-金黄葡萄球菌-铜绿假单胞菌(Proteus mirabilis-Staphylococcus aureus-Pseudomonas aeruginosa,PSP)吸附联合疫苗,并检测其对小鼠的保护效果。方法通过不同生产工艺制备奇异变形杆菌胞膜抗原(Proteus mirabilis membrane antigen,PMA)、金黄葡萄球菌胞质抗原(Staphylococcus aureus cytoplasmic antigen,SCA)金黄葡萄球菌类毒素抗原(Staphylococcus aureus toxoid antigen,SEA)及铜绿假单胞菌类毒素抗原(Pseudomonas aeruginosa toxoid antigen,PEA),按照一定配伍方式与Al(OH)_3佐剂形成PSP吸附联合疫苗,经腹腔注射小鼠,测定其保护效果。结果 6价PMA抗原对奇异变形杆菌6株疫苗株保护率为50%~100%;PSP吸附联合疫苗对奇异变形杆菌PM104的保护率为80%,对铜绿假单胞菌PA101的保护率为100%,对2株金黄葡萄球菌SA79和CMCC26002的保护率分别为90%和60%,对金黄葡萄球菌CMCC26002 α-毒素的保护率为70%。PSP吸附联合疫苗对同群异源菌株交叉保护率达70%以上的比例为:奇异变形杆菌占61.11%;金黄色葡萄球菌占50%;铜绿假单胞菌保护率占92.86%。结论 PSP吸附联合疫苗对疫苗株具有保护性,也对同群菌株具有保护性,为进一步临床研究提供了理论基础和技术支持。     

Optimization of Antibacterial Activity of Perilla frutescens var. acuta Leaf against Staphylococcus aureus Using Evolutionary Operation Factorial Design Technique

This study was undertaken to optimize extraction using evolutionary operation-factorial (EVOP) design technique to elicit the antibacterial activity of Perilla frutescens var. acuta leaf against Staphylococcus aureus ATCC6538. Higher antibacterial activity was achieved at higher extraction temperature and over a longer extraction time. Antibacterial activity was not affected by differentiation of the ethanol concentration in the extraction solvent. The maximum antibacterial activity of ethanolic extract of P. frutescens leaf against S. aureus was obtained at 75 °C (R = -0.7904(**)) extraction temperature, 24 h (R = -0.7273(**)) extraction time, and 45% (R = -0.0635) ethanol concentration. The population of S. aureus was decreased from 7.535 log CFU/mL in the initial set to 4.865 log CFU/mL in the third set by EVOP factorial design technique, as well as to 2.600 log CFU/mL by extraction with ethyl acetate. Further, the ethyl acetate extract revealed the highest phenolic contents (111.3 ± 8.6 mg% of dry sample) as compared to the other extracts. Also, the scanning electronic microscopic study of the ethanolic extract of P. frutescens revealed potential detrimental effect on the morphology of S. aureus.     

Precursor-directed syntheses and biological evaluation of new elansolid derivatives

The antibiotic elansolid C1 (8) was isolated from Chitinophaga sancti strain FxGBF13 after fermentation in the presence of anthranilic acid. Remarkably, 8 was also obtained by addition of anthranilic acid to a crude fermentation extract containing the macrolide elansolid A2 (1*). This Michael-type conjugate addition allowed us to generate 21 new derivatives of elansolid C1 (9-29) by using various nucleophiles. Biological activities of all derivatives were evaluated against Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus, and the mouse cell line L929.     

烟曲霉次级代谢产物抗菌与抗肿瘤活性研究

对烟曲霉的次级代谢产物进行提取并就其抗菌与抗肿瘤活性进行初步研究.采用马铃薯-葡萄糖液体培养基(PD)对烟曲霉进行发酵处理,分别提取菌体胞内和胞外产物,针对4种指示菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠球菌)进行了抗菌活性研究,针对人肺癌A549细胞进行了抗肿瘤活性研究.结果表明,烟曲霉次级代谢产物对金黄...     

表皮葡萄球菌耐药性与生物被膜的相关性

目的分析表皮葡萄球菌耐药性与生物被膜的相关性。方法采用刚果红平板法检测表皮葡萄球菌胞间多糖黏附素(PIA);半定量生物被膜形成试验检测生物被膜表型;采用二倍稀释法检测各药物对该菌的最低抑菌浓度(MIC)。结果42株表皮葡萄球菌中,9株为PIA+/生物被膜表型+,4株为PIA+/生物被膜表型-,29株为PIA-/生物被膜表型-;3组菌对苯唑西林、克林霉素、阿米卡星、左氧氟沙星和阿莫西林/克林霉素的耐药性差异有统计学意义;万古霉素和阿莫西林/克拉维酸对3组菌的MIC低于NCCLS给出的敏感值,青霉素、苯唑西林、克林霉素、红霉素和头孢西丁对3组菌的MIC则远远高于NCCLS给出的敏感值,且β-内酰胺类的3种药物对3组菌的MIC差异有统计学意义。结论表皮葡萄球菌生物被膜形成是多基因调控过程,在细菌耐药中具有重要作用。     

表皮葡萄球菌与血管内皮细胞的黏附作用及其机制

目的探讨表皮葡萄球菌与人脐静脉血管内皮细胞ECV304的黏附作用及其机制。方法将表皮葡萄球菌临床分离株通过刚果红琼脂检测胞间多糖黏附素(PIA);半定量生物被膜形成试验检测生物被膜表型;并在体外与ECV304细胞共同作用,在倒置显微镜下观察表皮葡萄球菌对ECV304细胞的黏附数。结果表皮葡萄球菌黏附ECV304细胞的数量随作用时间的延长而增加;PIA+/生物被膜表型+菌株与ECV304细胞的黏附数多于PIA+/生物被膜表型-菌株和PIA-/生物被膜表型-菌株,且差异有统计学意义,而PIA+/生物被膜表型-菌株和PIA-/生物被膜表型-菌株与细胞的黏附数差异无统计学意义。结论表皮葡萄球菌与血管内皮细胞的黏附有时间依赖性,能形成生物被膜的表皮葡萄球菌更易与血管内皮细胞黏附。     

金黄色葡萄球菌液相芯片检测方法的建立及应用

目的建立一种快速检测金黄色葡萄球菌的液相芯片检测方法,并进行初步应用。方法将金黄色葡萄球菌单克隆抗体(mAb930)与聚苯乙烯微球偶联,结合双抗体夹心技术建立金黄色葡萄球菌液相芯片检测方法,通过L(934)正交设计试验优化方法的反应条件;对建立的方法进行灵敏度和特异性验证;应用建立的方法检测200份食品样品,并与国家标准检测方法进行比较。结果所建立的检测方法的最佳反应条件为:多克隆抗体工作浓度为1∶100,生物素标记的二抗工作浓度为1∶1 000,链霉亲和素-藻红蛋白的工作浓度为2μg/ml,生物素标记的二抗与SA-PE的反应时间为40 min;建立的方法检测金黄色葡萄球菌的灵敏度可达103CFU/ml,检测其他常见食源性致病菌无交叉反应;建立的方法与国家标准方法检测200份食品样品的结果基本相符。结论已建立了一种快速检测食品中金黄色葡萄球菌的液相芯片检测方法,能够应用于实际样品的检测。     

凤眼草抑菌活性成分的研究

对苦木科臭椿属植物臭椿的果实凤眼草(Ailanthus altissima)的95％乙醇提取液的抑菌活性进行了研究.利用系统溶剂萃取法得到了石油醚提取物、氯仿提取物、乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物,重点研究了4种提取物对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌性和最低抑菌浓度.结果表明,乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物均...     

石榴皮抑菌活性物质的初步研究

研究了石榴皮初提物对黄瓜枯萎病菌的室内生物活性.结果表明:在甲醇、氯仿及正己烷提取物中,甲醇提取物的抑菌活性最为显著.采用生长速率法和孢子萌发法测定了石榴皮溶剂萃取物对黄瓜枯萎病菌、番茄灰霉病菌、玉米小斑病菌和棉花立枯病菌等4种病原菌的生物活性.在甲醇提取物的石油醚、氯仿、乙酸乙酯及正丁醇萃取物中,以正丁醇萃取物的抑菌活性最强,在质量浓度为200 g/L时.对4种供试真菌的抑制率均大于70%,而对玉米小斑菌的抑制作用达90.67%,其EC50值为26.2 g/L.     

Antimicrobial Activities of Hexane Extract and Decussatin from Stembark Extract of Ficus congensis

Ficus congensis (Moraceae) is used traditionally in the treatment of various diseases including infectious diseases, infertility, and gastrointestinal disorders. Investigation of hexane extract of the stem bark using chromatographic techniques led to isolation of a xanthone, 1-hydroxy-3,7,8-trimethoxyxanthone (Decussatin). The compound was elucidated based on spectroscopic methods such as nuclear magnetic resonance (NMR), UV, IR, and mass spectrometry (MS). Decussatin and the hexane extract were screened in vitro for antibacterial and antifungal activities using broth microdilution (MHB) and disc Agar diffusion (DAD) techniques against Escheichia coli, Bacilus substilis, Klebsiela pneumonia, Staphylococcus aureus, Aspergillus fumigatus, Trichophyton mentagrophytes, Trichophyton rubrum and Candida albicans. Hexane extracts showed potent antibacterial activity against E. coli and B. subtilis with minimum inhibitory concentrations (MIC) of 8 mg/mL and 5 mg/mL, respectively, while Decussatin of the highest concentration (8 mg/mL) used in this study showed no appreciable antimicrobial activity. Only hexane extract was active against C. albicans with a MIC of 1 mg/mL.