甘草甜素调节U14宫颈癌小鼠免疫功能及诱导凋亡的作用

为探讨甘草甜素调节U14 宫颈癌小鼠免疫功能及诱导凋亡作用,将U14宫颈癌小鼠随机分为模型组、甘草甜素低、中、高剂量组（25、50、100 mg/kg）及环磷酰胺组（25 mg/kg）,另设正常组,每组10只;灌胃给药,1次/d,共21 d。测量各组小鼠瘤体积（最大直径）、瘤质量,计算胸腺指数、脾脏指数,TUNEL法检测细胞凋亡指数,实时定量PCR法检测Caspase-3、Bax及Bcl-2 mRNA表达,Western Blot法检测p-PI3K、p-AKT蛋白表达等指标。结果发现,与模型组比较,甘草甜素低、中、高剂量组小鼠瘤体积（最大直径）及瘤质量显著降低（P<0.05或P<0.01）,抑瘤率分别为15.68%、25.41%和38.38%;与模型组比较,甘草甜素低、中、高剂量组小鼠胸腺指数、脾脏指数、IL-2、IFN-γ、TNF-α含量、凋亡指数、Caspase-3及Bax mRNA表达显著增加（P<0.05或P<0.01）,而Bcl-2 mRNA及p-PI3K、p-AKT蛋白表达显著降低（P<0.05或P<0.01）。上述结果表明,甘草甜素具有抑制U14宫颈癌小鼠肿瘤生长的作用,该作用与改善免疫功能及诱导凋亡作用有关。     

穿心莲内酯对人神经胶质瘤U251细胞的抑制作用及机制研究

目的：应用网络药理学、生物信息学方法,结合体外实验,研究穿心莲内酯（Andrographolide,AND）对人神经胶质瘤U251细胞的抑制作用及机制。方法：通过网络药理学手段,根据AND的结构预测其神经胶质瘤相关靶点。应用生物信息学方法,筛选出枢纽基因进行基因本体（Gene Ontology,GO）分子功能及基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）富集分析以确定与其相关的信号通路,再进行分子对接,研究AND与上述靶点的结合活性,最后进行基因富集分析（Gene Set Enrichment Analysis,GSEA）,通过神经胶质瘤样本和正常样本的比较,分析枢纽基因的表达差异并获得其Kaplan-Meier生存曲线。在上述基础上,在人源神经胶质瘤细胞U251观察AND对其生长的影响及形态变化,并检测AND在蛋白质水平对PI3K/AKT通路的影响。结果：通过网络药理学手段获得AND的40个神经胶质瘤相关靶点,并应用生物信息学方法筛选出10个枢纽基因,AND与其有较强的结合活性。GO、KEGG富集分析结果显示,上述枢纽基因...     

灵芝醇提物对改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的作用

研究讨论灵芝醇提物对地塞米松诱导的3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的影响。采用地塞米松诱导脂肪细胞胰岛素抵抗模型,将细胞分成正常组、模型组、灵芝醇提物组、二甲双胍（阳性对照）组,检测各组的葡萄糖消耗量和甘油三酯含量,分析灵芝醇提物对胰岛素抵抗的影响。建立模型的地塞米松处理组与正常组相比,1 μmoL/L地塞米松处理72 h显著降低了3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖消耗量（P＜0.05）,且胰岛素抵抗状态在24 h内维持稳定,脂肪细胞胰岛素抵抗模型构建成功。10、50、100 mg/L灵芝醇提物对细胞活力均无显著影响,灵芝醇提物处理细胞24 h能显著提高脂肪细胞的葡萄糖消耗量和细胞内甘油三酯的含量且呈剂量依赖性。同时灵芝醇提物处理后显著增加了胰岛素受体底物1、葡萄糖转运体-4、磷脂酰肌醇-3-激酶p110亚基、磷脂酰肌醇-3-激酶p85亚基、磷酸化蛋白激酶、磷酸化糖原合酶激酶3β蛋白的表达。结果表明灵芝醇提物通过IRS1/PI3K/AKT信号途径改善地塞米松诱导的脂肪细胞胰岛素抵抗。     

基于PI3K/Akt信号通路研究积雪草中微量皂苷（CA-1）的神经保护作用

利用6-羟基多巴胺（6-Hydroxydopamine,6-OHDA）诱导分化型PC12细胞构建的帕金森病（Parkinson’s Disease,PD）体外细胞模型,研究了从积雪草中提取的微量皂苷（Centella Asiatica Saponins-1,CA-1）的神经保护作用。通过高分辨二级质谱鉴定化学结构、分析了积雪草中常用皂苷和CA-1对PC12细胞存活率的影响,进一步通过半定量和实时定量聚合酶链式反应、蛋白印迹等技术检测PC12细胞中相关基因和蛋白表达。结果表明在该模型中100 μmol/L CA-1、积雪草苷（Asiaticoside,AS）、羟基积雪草苷（Madecassoside,MA）分别将细胞存活率提高了28.63%、16.69%、17.54%,CA-1的神经保护作用强于AS和MA（p<0.05）。与模型组相比,CA-1剂量依赖性地提高了6-OHDA诱导PC12细胞的存活率且在CA-1浓度为25 μmol/L与模型组有显著差异（p<0.05）,降低了细胞内活性氧（Reactive Oxygen Species,ROS）的水平,上调了Sod1、Cat、Bcl2基因表达。蛋白印迹法（Western Blot,WB）显示,CA-1提高了p85、PDK1、Akt的蛋白表达水平。在该研究中明确了CA-1的神经保护作用揭示了其作用可能通过PI3K/Akt信号通路。     

白藜芦醇治疗非小细胞肺癌机制的网络药理学分析及实验验证

目的：采用网络药理学和分子对接技术识别分析白藜芦醇抗非小细胞肺癌（NSCLC）的潜在靶点和作用机制,并结合临床数据以及分子生物学实验进行初步验证。方法：通过Swiss Target Prediction数据库和Target net数据库筛选白藜芦醇靶点,通过数据库Genecards、OMIM、TTD收集NSCLC靶点,利用Venny 2.1.0平台获得药物和疾病靶点的交集;应用Cytoscape 3.7.2软件与String数据库生成靶标蛋白互作网络（PPI）,并进行拓扑分析;利用Metascape数据库对交集靶标进行基因本体（GO）功能富集与京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析,得到交集靶标的基因图谱;利用Autodock Vina 软件对排名前三位的核心靶基因与白藜芦醇进行分子对接验证;通过癌症基因组图谱（TCGA）数据库获得临床病例样本,分析相关靶基因在NSCLC患者（n=1017）和健康人群（n=627）的表达情况;细胞水平采用Western Blot检测不同浓度（30、50 μmol/L）白藜芦醇对人肺腺癌A549细胞SRC、EGFR及PI3K/AKT信号通路蛋白表达的影响。结果：筛选得到的潜在靶点共有40个,经过拓扑分析得到关键靶点8个,其中EGFR、SRC、ESR1等靶点与NSCLC密切相关;白藜芦醇抗NSCLC主要涉及肿瘤蛋白多糖、雌激素信号通路、PI3K/AKT等多条信号通路;分子对接显示,白藜芦醇与关键靶点具有稳定的结合能力;临床样本结果显示,靶基因EGFR、SRC、ESR1、HSP90AA1以及MMP9的表达在NSCLC中上调;TNF、CDC42以及RELA的表达在NSCLC中下调;细胞实验结果表明,白藜芦醇药物干预以剂量依赖的方式抑制了人肺腺癌A549细胞中SRC、EGFR、p-PI3K和p-AKT的蛋白表达。结论：揭示了白藜芦醇在治疗NSCLC的过程中涉及多个作用靶点及多条信号通路,明确了白藜芦醇可通过抑制PI3K/AKT信号通路发挥其抗癌效应。

     

D-手性肌醇对STZ诱导的2型糖尿病大鼠糖原合成的影响

主要探究D-手性肌醇对链脲佐菌素(STZ)诱导的2型糖尿病大鼠糖原合成的影响。实验选用SPF级雄性SD大鼠作为实验动物,高脂高糖饲料配合注射STZ溶液建造2型糖尿病模型,将实验动物分为正常对照组、模型对照组、D-手性肌醇低剂量组(L,30 mg/(kg BW·d))、D-手性肌醇高剂量组(H,60mg/(kg BW·d))和D-手性肌醇正常高剂量组(NH,60 mg/(kg BW·d))。N组和NH组饲喂正常饲料,其余3组饲喂高脂高糖饲料,5周后大鼠处死,对其肝脏和骨骼肌中的糖原含量进行检测,并利用PCR技术对大鼠肝脏和骨骼肌中的PI3K、Akt、GSK-3β和GS的表达量进行检测。实验结果表明:D-手性肌醇可以显著提高肝糖原含量(p0.01)肌糖原含量有提高的趋势,且能促进肝脏和骨骼肌中PI3K、Akt和GS基因的表达,抑制GSK-3β基因的表达。     

豌豆低聚肽对2型糖尿病小鼠肝脏PI3K/AKT/FOXO1信号通路的调节作用

本文旨在探究豌豆低聚肽对2型糖尿病(T2MD)小鼠肝脏磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/转录因子FoxO1(PI3K/AKT/FOXO1)蛋白表达的影响.通过对小鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ),建立2型糖尿病小鼠模型,并用二甲双胍和豌豆低聚肽分别饮食干预4周.结果表明,豌豆低聚肽组的小鼠糖尿病指征较模型组均有一定改善,且...     

人参皂苷F2通过PI3K/Akt途径改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗

该研究探讨了人参皂苷F2对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的影响及其机制。将3T3-L1前脂肪细胞诱导分化成熟后,用1 μmol/L地塞米松处理48 h,建立胰岛素抵抗模型。用10 μmol/L的罗格列酮（阳性对照）和25、50、100 μmol/L人参皂苷F2处理胰岛素抵抗细胞12 h,检测细胞对2-NBDG的摄取。实验结束后用RT-qPCR检测各组细胞中葡萄糖转运蛋白4（GLUT-4）和胰岛素底物受体1（IRS-1）mRNA相对表达量,并利用Western blot检测PI3K/Akt信号通路中蛋白表达及其磷酸化水平。结果表明：与模型组相比,25、50、100 μmol/L人参皂苷F2均能促进胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞对2-NBDG的摄取,分别增加了12.58%、29.07%和34.62%（p<0.05）;人参皂苷F2作用12 h后,GLUT-4和IRS-1 mRNA相对表达量以及PI3K、Akt的磷酸化水平显著提高（p<0.01）。该研究表明人参皂苷F2可通过促进胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞中GLUT-4和IRS-1mRNA相对表达,增加PI3K和Akt蛋白磷酸化,从而激活PI3K/Akt信号通路,改善其糖代谢和胰岛素抵抗。     

鱼油对KKAy糖尿病小鼠糖代谢及PI3K/Akt信号通路的影响

目的：探讨鱼油对KKAy糖尿病小鼠糖代谢及磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）/蛋 白激酶B（protein kinase B,Akt）信号通路的影响。方法：40 只KKAy小鼠,分为模型组和鱼油低、中、高剂 量组,每组10 只。另设10 只C57BL/6小鼠为正常对照组。灌胃12 周后,测定血糖、胰岛素、脂联素、瘦素及 PI3K/Akt信号通路中相关基因的表达水平。结果：与模型组相比,鱼油低剂量组血糖水平极显著降低（P＜0.01）, 鱼油低、中剂量组胰岛素水平显著提高（P＜0.05）,鱼油各剂量组的脂联素水平显著提高（P＜0.05）。此外,鱼油 各剂量组可上调胰岛素受体底物-1、PI3K、Akt、葡萄糖转运蛋白-4基因的表达,其中低剂量鱼油对Akt和葡萄糖转 运蛋白-4基因的调控效果更显著。结论：低剂量鱼油可能通过调节PI3K/Akt信号通路改善糖代谢。     

浓缩山西老陈醋对高脂血症小鼠血脂及血糖的调节作用

目的：基于PI3K/AKT1通路探究山西老陈醋对高脂饮食诱导大鼠抗氧化作用机制。方法：30只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为5组：正常组（C,常规饲料）、高脂模型组（M,高脂乳剂）、低（LV）、中（MV）、高（HV）剂量山西老陈醋干预组（1.35、2.7、5.4 g/（kg·bw））。造模（5周）同时给予陈醋干预后,山西老陈醋继续干预5周。检测血清血脂含量、肝损伤指标及抗氧化酶活性;HE染色观察肝组织病理学状态;qRT-PCR和Western blotting检测大鼠肝脏中PIK3CA、AKT1 mRNA及蛋白水平表达,免疫组织化学技术进行定位分析。结果：与C组相比,M组肝脂肪变性严重,血清中脂质含量和肝损伤程度极显著升高（P<0.01）,抗氧化酶活性极显著下降（P<0.01）,肝组织中PIK3CA和AKT1 mRNA及蛋白水平表达极显著升高（P<0.01）,高脂血症大鼠造模成功,同时PI3K/AKT1通路被激活。血清学检测结果显示,山西老陈醋可显著下调血清中脂质含量、改善肝损伤、增加抗氧化酶活性（P<0.05）,使其肝组织病理损伤减轻,且HV和MV组改善效果优于LV组。qRT-PCR、Western blotting及免疫组织化学技术检测结果显示,PIK3CA、AKT1主要定位于肝细胞质及细胞核中,山西老陈醋可极显著下调PI3K/AKT1通路中PIK3CA、AKT1 mRNA及蛋白水平表达（P<0.01）,HV和MV组干预效果优于LV组。结论：不同剂量山西老陈醋可不同程度改善高脂饮食大鼠脂质、抗氧化及肝功能指标,最佳剂量可能在2.7~5.4 g/（kg·bw）之间,山西老陈醋可能通过调控PI3K/AKT1通路发挥抗氧化应激损伤作用,进而改善高脂饮食诱发的大鼠高脂血症。     

Regulation of lipid and glucose homeostasis by mango tree leaf extract is mediated by AMPK and PI3K/AKT signaling pathways

Ethanolic extract of Mangifera indica (mango) dose-dependently decreased serum glucose and triglyceride in KK-A^y mice. Our in vitro and in vivo investigations revealed that the effect of mango leave extract (ME) on glucose and lipid homeostasis is mediated, at least in part, through the PI3 K/AKT and AMPK signaling pathway. ME up-regulated the expression of PI3 K, AKT and GYS genes by 2.0-fold, 3.2-fold, and 2.7-fold, respectively, leading to a decrease in glucose level. On the other hand, ME up-regulated AMPK and altered lipid metabolism. ME also down-regulated ACC (2.8-fold), HSL (1.6-fold), FAS (1.8-fold) and PPAR-γ (4.0-fold). Finally, we determined that active metabolites of benzophenone C-glucosides, Iriflophenone 3-C-β-glucoside and Foliamangiferoside A from ME, may play a dominant role in this integrated regulation of sugar and lipid homeostasis.     

牦牛血低聚肽对缺氧介导的H9c2心肌细胞损伤的保护及其作用机制

体外培养H9c2心肌细胞建立缺氧损伤模型,随机分为5组(n=6):正常对照组、缺氧组、牦牛血低聚肽低、中、高剂量组。结果表明,缺氧组的细胞存活率显著降低(P0.01)、细胞凋亡率显著升高(P0.01)、LDH释放水平显著升高(P0.01),线粒体膜电位极显著降低(P0.01),表明缺氧对H9c2心肌细胞产生了损伤。与缺氧组相比,牦牛血低聚肽干预组的细胞存活率增加,细胞凋亡减少以及细胞中LDH的释放水平下降,并呈良好的剂量依赖关系。同时,牦牛血低聚肽能够抑制线粒体膜电位下降,提高细胞T-AOC水平,降低TNF-α水平,抑制缺氧介导的细胞色素C的释放,上调抗凋亡蛋白(Survivin、p-Akt、Akt)的表达,降低促凋亡蛋白(Caspase-3/9)的活性,且牦牛血低聚肽也影响编码上述蛋白的m RNA水平。以上结果表明;牦牛血低聚肽对H9c2心肌细胞的保护与抑制PI3K-Akt信号转导通路、保护细胞线粒体结构功能完整性有密切关系。