牛α(1,3)-半乳糖转移酶基因片段的克隆及一种全新的无启动子打靶载体的构建

利用La—PCR的方法，从牛的基因组中成功地获得分别约为2．4kb、15．0kb的两段扩增产物。两个片段分别克隆于pCR—XL—TOPO载体。测序结果表明所克隆的两片段均为牛α(1，3)GT基因的基因组序列。其中2．4kb片段位于5～7外显子之间，包括了完整的第五及第六内含子；15．0kb片段位于3～4外显子，包括了完整的第三内含子。15．0kb、2．4kb片段分别作为打靶载体的5’、3’同源臂，使用融合基因策略构建了一种全新的无启动子打靶载体7zf-neo17．4。电击转染牛胎儿成纤维细胞以期敲除牛的α(1，3)-GT基因。     

猪、牛成纤维细胞α-1,3-半乳糖基转移酶基因的敲除以及人白细胞抗原-G1基因的敲入

构建了敲除猪α-1,3-GT并敲入人白细胞抗原HLA-G1基因的打靶载体pZJ,其中以新霉素抗性基因(Neo)为正筛选基因,绿色荧光蛋白基因(GFP)为负筛选基因.采用优化的脂质体转染法将打靶载体pZJ转染于一个长势良好的胎猪成纤维细胞系中,经7天G418(600 μg/ml)药物筛选,共获得30个Neo抗性细胞克隆,其中12个为非绿色荧光细胞克隆,7个扩大培养良好,提取阳性克隆细胞的基因组DNA并进行PCR检测.经PCR结果检测,打靶载体转入到胎猪成纤维细胞中,其中3个非荧光阳性单克隆细胞在细胞基因组中进行了定点整合.以同样的脂质体转染条件将pZJ转染牛胎儿成纤维细胞,经筛选并对其进行PCR检测,其中2个均为定点整合阳性.该研究为今后克隆出表达HLA-G1而不表达α-1,3-GT基因的个体猪,从而提供可以真正用于临床的异种器官打下了基础,也为猪牛之间的跨物种敲除提供了一个佐证.     

突变生物合成药物技术

随着基因技术的发展，突变生物合成技术可直接对次级代谢途径中-特定酶基因进行改造获得突变株，大大提高了工作效率和准确性。本文综述了突变生物合成技术在微生物药物领域的应用，特别是结合基因技术进行突变生物合成研究的新进展。     

两段杨树叶绿体DNA片段的克隆及叶绿体定点转化载体的构建

利用PCR方法,从毛白杨（Populus tomentosa C.）叶绿体基因组中克隆了1．7kb和1．6kb的相邻DNA片段,对其进行序列分析表明,扩增片段分别具有1766个和1601个核苷酸,前者包括3′rps12,rps7基因的编码区及其边界序列,后者包含ndhB基因的第一外显子和内含子。本文还构建了杨树这两个片段的限制酶切图谱,并以这两个相邻片段为同源重组片段,分别将绿色荧光蛋白（GFP）基因和苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白（Bt）基因,及其原核表达框插入其间,构建了杨树叶绿体定点转化载体pPZG和pPZB。这两个特异性载体将定位整合到杨树叶绿体基因组中反向重复区的rps7和ndhB基因的间隔区,并高效表达GFP和Bt基因。迄今为止,本文所报道的内容在国内、外尚属首次。     

固氮斯氏假单胞菌固氮调节基因ntrB的功能研究

利用三亲接合的方法将含有ntrB基因部分序列的自杀载体导入固氮斯氏假单胞菌（Pseudomonas stutzeri）A1501中,获得了mrB基因的非极性突变株（AdnB）。RT-PCR实验证明,AdnB菌株中与ntrB连锁的下游基因ntrC能正常转录;ntrB基因的非极性突变导致细胞完全丧失固氯能力,但其突变株能在含NH4^＋的基本培养基K中正常生长;在以硝酸盐为唯一氯源时,AdnB比野生型A1501的细胞生长延迟约14～18h,认为ntrB基因与硝酸盐的氮代谢有关。功能互补实验结果表明,AdnB的功能互补菌株能完全恢复细胞的固氮作用和对硝酸盐的利用。     

盐霉素高产菌的选育技术

根据盐霉素生物合成途径对其产生菌进行了推理选育。在常规诱变基础上选用丁酸作为筛选剂检出所需要的突变株,成功获得三株高产菌株3233#、3244#和3250#,其效价比出发菌株F21#分别提高了34％、44．9％和39％。     

N—氨甲酰基—D—氨基酸酸胺水解酶基因的克隆与表达

按本室纯化的N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶（DCase)的N-末端氨基酸序列设计了正向引物，并在巳报道的不同来源菌株DCase的氨基酸序列同源性分析的基础上，设计了反向引物。用菌株No.2262总DNA为模板，经PCR扩增获得长度为约0.9kpb的片段，DNA序列分析表明基因全长为912bp。将该片插入PET-3a，构建成重组子pET-DCase，并在E.coliDH5a中获得表达，经SDS-PAGE检测，表达产物分子量与天然纯DCase相同，约为35kd.     

用核糖体工程技术二次开发海洋微生物菌株资源的研究

经对无活性的海洋来源放线菌B3054进行链霉素抗性筛选,获得了一株具有抗肿瘤活性的链霉素抗性突变株SY-1.从该突变株的发酵物中分离得到了4个活性化合物,其中1个为新天然产物.对该菌株突变前后的rpsL基因(编码核糖体蛋白S12)进行分析未发现发生突变,提示突变位点可能在核糖体的另外亚基上.实验结果表明,核糖体工程技术可用于无活性菌株资源的二次开发利用.     

非水溶性有机试剂萃取海藻多糖

以褐藻糖胶为模型多糖,对用非水溶性有机试剂从水溶液中萃取褐藻糖胶进行了初步研究,结果表明,选用的非水溶性功能试剂N263能非常有效地从水溶液中萃取褐藻糖胶。对影响取褐藻糖胶的水溶液初始PH,温度及N263浓度等因素研究结果表明,N263浓度是影响褐藻糖胶萃取的主要因素,而初始PH,温度等的影响不大,本工作为海藻多糖的分离提取提供了一个新的方法和途径。     

Estimation of Parameters of Universal Distribution of Moments of Failure of Products

A method is proposed for estimating the parameters of a mixture of exponential and Weibull distributions for which the accuracy of preliminary estimates obtained by graphical analysis is refined in accordance with the criterion of maximum likelihood. The efficiency of the proposed method is supported by the results of statistical modeling.     

水三相点复现的不确定度评定

水三相点是开尔文热力学温度的唯一基准点，也是ITS-90国际温标重要的定义固定点。因此，水三相点不确定度分析对整个温标的建立、温度量值传递起着至关重要的作用。近3年来，中国计量科学研究院研制出一系列高质量的水三相点容器，加强了水三相点的研究，为不确定度的分析提供了更为可靠的实验依据。同时，不确定度的分析也是客观评价新研制容器性能的一个重要指标。因此，根据实验结果对新研制容器所复现的水三相点进行了不确定度评定。评定结果表明，其扩展不确定度为0．16mK(k=2．69，P=0．99)。     

Assurance of the Uniformity of Measurements of the Power of Laser Radiation

On the basis of an analysis of the principle underlying the construction of standards and systems designed for reproduction of the unit of mean power and energy of laser radiation, it is shown that these standards consist of unified subsystems that carry the principal metrological load. By means of such a division, it is possible to realize a systems-engineering synthesis of standards with preassigned error. __________ Translated from Izmeritel'naya Tekhnika, No. 11, pp. 20–23, November, 2005.     

Assurance of the Uniformity of Measurements of Energy of Short-Pulse Coherent Radiation

Ways of creating unified automatized reference (calibration) and standard measurement equipment for the purpose of developing a subsystem for the assurance of the uniformity of measurements of the energy of short-pulse laser radiation are considered. __________ Translated from Izmeritel'naya Tekhnika, No. 11, pp. 24–28, November, 2005.     

方波幅度的测量不确定度

介绍了用众数法评价方波幅度时的不确定度分析和评价过程;讨论了主要的不确定度来源,包括众数判别区间的影响、波形测量系统幅度测量误差的影响等等;给出了减小不确定度的主要措施,并结合一个实例,给出了方波幅度的不确定度评价结果。     

水线震荡对斜拉桥拉索风雨激振稳定性的作用

从理论和试验两个方面研究了水线震荡对斜拉桥拉索风雨激振稳定性的作用。建立了拉索和水线的运动方程，应用李雅普诺夫函数给出了水线不平衡角的判别公式。设计了一种新型的带有可运动人工水线的拉索模型，并进行了风洞试验。理论和试验结果表明，水线震荡是导致拉索风雨激振具有较大不稳定范围的主要原因。试验结果证明了理论模型和分析的结果是正确的。     

二硝基重氮酚重氮化反应机理再探

文中依据杂化理论分析了亚硝酸的结构特点，主要以分子结构理论为基础，从理论上指出在ＤＤＮＰ重氮化反应中，可能是氯化亚硝酰作为重氮反应的亲电试剂，其进攻发生在氨基的氮上，从而推测了获得ＤＤＮＰ的反应历程。     

逻辑分析仪部分参数测量结果的不确定度评定

介绍了逻辑分析仪部分参数测量结果的不确定度分析评定方法,评定过程及结论,可应用在对于计量标准进行相应指标的不确定度评定分析上。     

空压机轴承箱蜗壳温度探头油封改造

由于空压机进气侧轴承箱蜗壳温度探头密封效果不好,使空压机及其后续管道受到油污染。后将温度探头的O形圈密封改为骨架油封,杜绝了轴承箱漏油问题。文章简介空压机的结构和技术参数,详细介绍了骨架油封的制作和优点。     

Calculation of the Heat of Combustion of Hydrocarbon Components of Fuels

Development is continued of the empirical method for the calculation of the heat of combustion of organic compounds and, in particular, of hydrocarbons of different structures by the additive scheme based on their chemical structure.