ELISA检测盐酸克伦特罗残留的方法学评价

以盐酸克伦特罗(clenbuterolhydrochloride)重氮化后分别连接到牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)上制得免疫原BSA-CL和包被抗原OVA-CL。通过免疫兔获得含有多克隆抗体的血清,经硫酸铵沉淀、纯化,得到兔源抗CL的抗体,在此基础上建立了间接酶联免疫检测方法。实验结果表明,抗CL抗体最适稀释度为1:1000,羊抗兔酶联抗体(HRP-IgG)的最适稀释度为1:1500。该检测方法的检测灵敏度为1.452μg/L,线性检测范围为7.26～90.75μg/L。     

盐酸克伦特罗快速检测胶体金试纸的研制

为建立快速检测猪尿等样品中盐酸克伦特罗（CL）的胶体金免疫层析方法,用柠檬酸三钠还原氯金酸制备了胶体金,将其标记抗CL单克隆抗体,制备了金标抗体;以CL-人血清白蛋白（HSA）为包被抗原、羊抗鼠IgG为质控线二抗,制成胶体金试纸。优化了胶体金颗粒粒径、标记抗体用量和pH值等各项参数,最终确定胶体金粒径为15 nm、每毫升胶体金溶液中添加20 ?g抗体、胶体金溶液pH值为7.4、金标抗体稀释液为添加0.1 %牛血清白蛋白（BSA）的0.05 mol/L磷酸盐缓冲液（pH 7.4）、金标抗体喷涂量为50 ?L/cm2、CL-HSA和羊抗鼠IgG的包被浓度分别0.5 mg/mL和2 mg/mL。研制的CL胶体金试纸检测限为3 ng/mL,与莱克多巴胺、沙丁胺醇等六种?-兴奋剂类药物无交叉反应。对42份猪尿样品的检测结果与市售酶联免疫（ELISA）试剂盒的符合率为100 %。试纸无需仪器辅助,操作简便,可在5 min内完成,适用于对CL残留进行现场检测。     

沙丁胺醇铕标记时间分辨荧光免疫分析方法的建立

基于抗沙丁胺醇(SAL)的单克隆抗体,初步建立了检测SAL的高灵敏度的时间分辨直接竞争免疫分析法(CDTRFIA)。采用辛酸-硫酸铵纯化抗SAL杂交瘤细胞株腹水单克隆抗体,用稀土离子Eu3+偶联物进行标记,制备铕标抗体;通过合成SAL-SUC半抗原并与卵清蛋白偶联获得SAL-OVA包被抗原:采用直接竞争的方式,游离SAL和固相SAL-OVA包被原共同竞争有限的铕标SAL单抗,初步建立SAL时间分辨免疫分析方法。研究发现,优化的TRFIA半抑制量IC_(50)为1.6 ng/mL,检测范围为0.39 ng/m L~12.77 ng/mL,最低检测限为0.136 ng/mL。通过对其他常用β-兴奋剂进行交叉反应分析,研究发现建立的TRFIA方法特异选择性高,与克伦特罗的交叉率较小(2.29%),而与莱克多巴胺没有交叉。     

动物性食品中盐酸克伦特罗ELISA检测方法的建立及应用

目的:建立动物性食品中盐酸克伦特罗残留快速检测技术,确保食品安全.方法:以盐酸克伦特罗重氮化后分别连接到牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)上制得免疫原BSA-CL和包被抗原OVA-CL.通过免疫得到多抗血清,经硫酸铵沉淀,Sephrose 4B-proteinA对抗体进行纯化,在此基础上建立间接竞争ELISA方法.结果表明:包被抗原的最适质量浓度为10 μg/mL,抗体的最佳稀释度为1∶1000;该方法的IC50为2.18 ng/mL,最低检测限达0.05 ng/mL,与沙丁胺醇和妥洛特罗的交叉反应率分别为8.28％和7.75％,平均加标回收率为90.78％.结论:该法灵敏度高,样品前处理简便、快速,适用于动物源性食品中盐酸克伦特罗残留的大批量现场检测.     

基于Arah6的花生间接竞争ELISA检测方法的建立

建立了基于花生主要过敏原蛋白Arah6的间接竞争酶联免疫检测法,实现了对食物中花生的定量检测。利用花生过敏原Arah6纯品免疫新西兰大白兔,制得兔抗Arah6的多克隆抗体,以Arah6纯品作为包被抗原、自制抗体为一抗、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG为二抗,确定了包被抗原质量浓度为1μg/mL,一抗最佳稀释度为1:50000,酶标二抗稀释度为1:5000。此检测方法对Arah6的定量检测范围为16.5～10000ng/mL(折合成含花生的含量,约为165ng/mL～100μg/mL),抑制方程为抑制率I=21.418lgC-6.0633(C为Arah6的质量浓度,单位ng/mL),IC50为414.6ng/mL,相关系数R2=0.9989。该检测方法灵敏度高,检测范围广,适用于食品中花生现场快速检测。     

共振光散射法检测肉制品中盐酸克伦特罗

目的:建立一种测定盐酸克伦特罗的新方法.方法:人血清白蛋白(HSA)与盐酸克伦特罗结合,用共振瑞利散射光法进行盐酸克伦特罗的检测.结果:在365nm处共振光散射增强强度与盐酸克伦特罗的浓度呈线性关系.以K2HPO4-NaH2PO4为缓冲体系维持盐酸克伦特罗测定溶液的pH=5.80,当温度为305.16K(28℃)和静置时间为30min时,方法的检出限为0.10μg/mL,线性范围为0.10～2.80μg/mL,线性相关系数r=0.995,方法精密度(RSD)和准确度(P)分别 2.98%～5.19%和92.50%～108.00%.结论:方法可靠、简便、快速,可直接测定样品中的盐酸克伦特罗.     

草甘膦单克隆抗体的制备及酶联免疫分析方法的建立

目的 制备出草甘膦(glyphosate,GLY)单克隆抗体,建立间接竞争酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)快速检测茶叶中GLY的方法。方法 首先合成GLY完全抗原(包被原和免疫原),通过免疫小鼠成功制备出GLY单克隆抗体。根据ELISA的检测流程,采用棋盘法确定最佳包被抗原和抗体的稀释倍数,确定最佳包被的温度和时间,并确定最佳加入一抗、二抗后反应时间,建立检测方法并对其性能进行评价。结果 GLY包被抗原和抗体的稀释倍数为1:2000,包被温度为37℃、包被时间为90 min,加入一抗、二抗后反应时间为60min。该方法的线性方程为Y=-0.2353X+0.6539(r²=0.9871),半抑制浓度(50%inhibiting concentration, IC₅₀)为4.508 ng/mL,检出限为1.18 ng/mL。变异系数均在10%以下,与异菌脲、多菌灵、三唑磷、甲基对硫磷、噻菌灵这5种标准品的交叉反应率均低于0.03%,在茶叶中加标回收率为90.86%～110.35%,...     

SM_2单克隆抗体的初步应用研究

以磺胺二甲嘧啶(SM2)-人血清白蛋白(HSA)为免疫抗原和SM2-卵清白蛋白(OVA)为包被抗原。制备SM2单克隆抗体;利用杂交瘤技术和有限稀释法经亚克隆,得到三株特异性稳定分泌SM2抗体的杂交瘤细胞,与其他四种磺胺药和两种载体蛋白HSA、OVA均无交叉反应。利用本试验制备的单克隆抗体初步建立了动物组织中检测SM2的间接竞争ELISA方法。最低检出限为9.95 ng/mL,灵敏度为47.12 ng/mL。     

基于Arah6的花生问接竞争ELISA检测方法的建立

建立了基于花生主要过敏原蛋白Arah6的间接竞争酶联免疫检测法,实现了对食物中花生的定量检测。利用花生过敏原Arah6纯品免疫新西兰大白兔,制得兔抗Arah6的多克隆抗体,以Arah6纯品作为包被抗原、自制抗体为一抗、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG为二抗,确定了包被抗原质量浓度为1μg／mL,一抗最佳稀释度为1：50000,酶标二抗稀释度为1：5000。此检测方法对Arah6的定量检测范围为16．5～10000ng/mL（折合成舍花生的含量,约为165ng／mL～100μg／mL）,抑制方程为抑制率I=21．4181gC-6．0633（c为Amh6的质量浓度,单位ng／mL）,IC50为414．6ng/mL,相关系数R2=0．9989。该检测方法灵敏度高,检测范围广,适用于食品中花生现场快速检测。     

酶联免疫法检测克伦特罗残留量的质量控制

对酶联免疫法检测克伦特罗残留量的质量控制方法进行了探讨.应用酶联免疫法检测克伦特罗残留量可从克伦特罗试剂盒的检测下限、校正曲线的线性检验、精密度验证、以及添加克伦特罗标准品做回收率试验等方面来进行质量控制.结果表明,本方法的样品检测下限(定性检出)为0.03ng/mL,定量检测下限为0.1ng/mL;克伦特罗标准校正曲线Y=-0.1884X 0.4159在0.1～8.1ng/mL范围内具有良好的线性相关关系,相关系数为-0.9913;克伦特罗标准液的浓度分别为0.1、0.3、0.9、2.7、8.1ng/mL时,变异系数分别为3.7%、5.3%、9.7%、9.2%、8.7%,在3.7%～9.7%的范围内;当克伦特罗标准品添加水平分别为0.5、1.0ng/mL时,平均回收率分别为84%、90%,在80%～100%的范围内.上述指标均符合残留分析质量控制的要求.