微波辅助孵育法富集麦胚多肽的工艺优化

目的 采用微波处理与孵育法结合探索影响麦胚多肽微波孵育的工艺条件。方法 以麦胚为实验原料,采用微波辅助预处理方法,研究孵育温度、时间、pH及料液比4种因素对孵育后的蛋白酶活力及多肽含量的影响,通过单因素和响应面实验进行工艺条件优化。结果 与未进行微波辅助预处理的样品相比,微波辅助处理(600 W, 10 s)能显著提高(P<0.05)孵育后样品中的蛋白酶酶活力(约9.4倍)和多肽含量(约3.1倍)。经过微波辅助处理后,孵育温度为51.5℃、pH为4.0、时间为6.33 h、料液比为1:7 (g:mL)时,蛋白酶活力达最高为3826.23 U/g;孵育温度为45.0℃、pH为4.8、时间为8.00 h、料液比为1:7 (g:mL)时,多肽含量达最高为261.23 mg/g。结论 微波辅助处理能有效地激活麦胚孵育液中的内源性蛋白酶活性,促进蛋白水解反应,显著提高孵育后的多肽含量。     

微波联合金属离子对麦胚中肽的富集研究

为高效富集麦胚多肽,采用微波联合金属离子处理麦胚,考察微波功率、微波时间、ZnSO₄浓度、MnSO₄浓度、CaCl₂浓度对麦胚肽含量和蛋白酶活力的影响,在单因素实验的基础上通过正交试验对工艺参数进行了优化。结果表明:在微波功率400 W,微波时间10 s,ZnSO₄浓度1.0 mmol/L,MnSO₄浓度1.6 mmol/L,CaCl₂浓度1.4 mmol/L的条件下,麦胚中的多肽含量可达228.85 mg/g,蛋白酶活力提高至2268.40 U/g。微波联合金属离子处理对麦胚中肽的富集有显著促进作用。     

孵育法富集麦胚多肽工艺参数优化

对孵育法富集麦胚多肽工艺进行优化。结果表明：孵育时间、温度、孵育液pH 值及液料比对麦胚孵育液中多肽含量有显著影响。采用Design Expert 中Box-Behnken 试验设计对上述因素进行响应面优化,结果表明当孵育时间6h、孵育温度49℃、孵育液pH3 及液料比10:1(mL/g)时为最佳组合,麦胚孵育液中多肽含量高达88.46mg/g,是原料麦胚的2.98 倍。     

麦胚富集γ-氨基丁酸的培养液组分优化

以培养液中添加金属离子等物质对麦胚中γ–氨基丁酸(γ-amino butyric acid,GABA)进行富集研究。通过Plackett-Burman试验设计考察了11种添加物对麦胚富集GABA的影响,对呈显著正效应的添加物采用中心组合试验设计(CCD)对其最适浓度进行优化。结果表明,CaCl2,LiCl,CuSO4,NaCl和Glu对麦胚GABA富集有显著正效应;CCD设计优化的培养液组分为CaCl2浓度2.48 mmol/L,NaCl为3.95 mmol/L,Glu为1.66 mmol/L,在此条件下麦胚中GABA含量达到53.37 mg/g,是原料的8.00倍。表明优化后的培养液组分能显著提高麦胚中GABA含量。     

响应面法优化发芽大豆富集多肽的培养液组分

以浸润方式培养大豆,考察赤霉素(GA3)、CaCl2等10种添加物对发芽大豆多肽富集的影响,对呈显著正效应的添加物进行最适浓度优化,并探讨各组分浓度对发芽大豆多肽富集的影响。结果表明：GA3、CaCl2、AlCl3和MnSO4对发芽大豆多肽富集有显著正效应;Box-Behnken试验结果显示,发芽大豆中多肽含量与培养液组分浓度之间的二次多项模型显著(P＜0.05),可预测发芽大豆中多肽的富集;其中GA3、CaCl2、AlCl3和MnSO4最适浓度分别是61.00μmol/L、11.20mmol/L、10.13mmol/L和12.17mmol/L,在此条件下培养的发芽大豆中多肽含量达到162.57mg/g,分别是对照和原料大豆的2.10倍和3.97倍,由此表明优化后的培养液组分能显著提高发芽大豆多肽含量。     

培育条件对麦胚中蛋白酶活力及蛋白质性质的影响

以脱脂小麦麦胚为原料,经微波辅助处理（600 W,10 s）后,通过改变培育温度、培育时间、培育液pH、培育液液料比,提高麦胚中内源性蛋白酶的活力,达到富集多肽的目的。研究结果表明,温度、时间、pH、液料比对麦胚中蛋白酶活力、肽含量皆有显著影响（P<0.05）。采用Box-Behnken设计对上述单因素进行响应面优化试验,发现培育温度50 ℃、培育时间6 h、培育液pH4.5和液料比10:1 mL/g为最优组合,蛋白酶活力、肽含量分别为3812.34 U/g、303.12 mg/g。实验表明,优化培育条件能够有效提高经脱脂、微波处理麦胚中蛋白酶活力及肽含量。     

复合酶二次酶解法制备紫菜多肽原液及其ACE抑制活性的研究

坛紫菜用粉碎、研磨、蛋白酶酶解处理法提取多肽,考察了破碎酶解法对蛋白质含量、蛋白质提取率、ACE抑制率的影响;多肽提取物采用脱腥处理,考察了β-环糊精对腥味的影响;多肽提取物采用杀菌处理,考察了杀菌对感官指标、菌落总数和ACE抑制率的影响。结果发现,坛紫菜经粉碎、研磨、蛋白酶酶解处理后蛋白质含量和蛋白质提取率得到显著提高,ACE抑制率也得到一定程度的提高。不同蛋白酶酶解效果差异较大,其中以胰蛋白酶和碱性蛋白酶进行复合酶二次酶解的效果较好,蛋白质提取率达85.22%,ACE抑制率达93.51%。提取物添加1.5%β-环糊精具有较好的脱腥效果。提取物经灭菌后仍有较好的ACE抑制作用。      

麦胚多肽对小鼠肝脏自发诱导脂质过氧化的抑制作用

目的:研究麦胚多肽的抗氧化作用及其量效关系,确定麦胚抗氧化肽的分子质量范围.方法:采用体外生物模型,通过测定其中丙二醛(MDA)的含量,反映麦胚多肽对其脂质过氧化的抑制作用.结果:各分子段的麦胚多肤对MDA的产生具有明显的抑制作用,且量效关系与BHT、VC相似;通过分离纯化,获得抗氧化性能较高的峰组分F3和F4,当其质量浓度为2 mg/mL时,对脂质过氧化的抑制率分别为50.26%和52.05%;通过标定,峰组分F3和F4的相对分子质量介于307和1450之间.结论:麦胚多肽具有较强的抗氧化能力.     

酶解魔芋飞粉蛋白制备ACE抑制肽

目的：用魔芋飞粉制备血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽,以开发魔芋飞粉资源。方法：以体外ACE抑制率为指标筛选最佳用酶并确定酶解条件。结果：碱性蛋白酶为酶解魔芋飞粉用酶,其最佳酶解条件为：底物浓度2.25%(净蛋白),酶用量3500U/g 底物蛋白,温度50℃,pH8.0,酶解时间270min,此时酶解液的ACE 抑制率为95.69%,多肽得率为12.70%;制得的魔芋多肽为淡黄色粉末,蛋白质含量为62.30%,多肽含量为52.67%,其抑制ACE 活性的IC50 为0.80mg/mL。结论：魔芋飞粉经蛋白酶酶解可制备高活性的ACE 抑制肽。     

麦胚蛋白双酶酶解物的制备及其体外醒酒活性的研究

为充分利用麦胚资源,制备具有醒酒作用的麦胚肽,本研究以Na_2CO_3预处理过的麦胚为原料,以肽得率(TCA-PSI)、水解度(DH)及乙醇脱氢酶(ADH)激活率为指标,研究了碱性蛋白酶(Alcalase)、中性蛋白酶(Neutral)双酶分步酶解工艺及酶解物的醒酒活性。结果表明,双酶分步酶解的最优工艺条件为麦胚蛋白质量分数为3.5%,Alcalase添加量4 000 U/g,Neutral添加量1000 U/g,所得酶解物的TCA-PSI、DH、ADH激活率分别为:75.49%、65.18%、68.37%。表明麦胚蛋白双酶酶解物可以显著提高ADH的活力,具有较好的体外醒酒活性。     

腰果蛋白ACE抑制肽的分离纯化研究

以海南腰果为原料,通过碱溶酸沉法制备腰果蛋白,对其氨基酸的组成进行了分析,并通过酶解法制备腰果蛋白多肽,依次经过透析、柱层析分离纯化来研究腰果蛋白多肽的血管紧张素酶(Angiotensin Converting Enzyme,ACE)抑制活性。实验结果表明,腰果蛋白中富含必需氨基酸与非必需氨基酸,是一种优质蛋白资源,腰果蛋白中疏水性氨基酸含量为20.4g/100g,有助于其ACE抑制活性。利用碱性蛋白酶进行酶解后制得的酶解液(1mg/mL)ACE抑制率为71.24%±5.96%,经过透析后所得小分子组分[(0～3500)u]的ACE抑制率(1 mg/mL)为85.01%±1.44%,经葡聚糖凝胶(Sephadex G-25)分离纯化后,得到6种组分,其中ACE抑制活性最高的组分为P4,1 mg/mL P4的ACE抑制率为90.01%±0.16%[IC_(50)为(36.25±0.12)μg/m L],将P4进行反向高效液相色谱进一步分离纯化后,得到3个组分,其中P4-3的ACE抑制活性最高,1 mg/mL P4-3的ACE抑制率为91.04%±0.31%[IC_(50)为(2.12±0.067)μg/mL],表现出较高的ACE抑制活性,腰果蛋白ACE抑制肽有望应用于高血压的预防与功能食品的开发,对腰果中蛋白资源的开发利用有一定的实验意义。     

葵花籽多肽的制备及其降压活性研究

试验以低温脱脂葵花籽粕为原料,进行脱脂和脱绿原酸处理后,用碱性蛋白酶制备葵花籽多肽。以水解度和ACE抑制率为评价指标,对底物浓度、加酶量、酶解温度、酶解时间和pH值进行单因素试验,在此基础上采用响应面试验优化碱性蛋白酶制备葵花籽多肽的最佳水解工艺。结果表明:底物浓度为15g/mL、加酶量为3 700U/g、酶解温度为56℃和pH值为8.2的条件下水解3h,ACE抑制率可达63.74%。     

干酪乳杆菌LC2W发酵脱脂乳营养因子优化

通过向还原脱脂乳中添加碳源、氮源及金属离子,对干酪乳杆菌(L.casei)LC2W发酵脱脂乳营养因子进行优化。在单因素试验基础上,以脱脂乳中葡萄糖、大豆多肽和MnSO4添加量为自变量,以发酵乳中L.caseiLC2W菌落总数对数值为响应值,通过三因素三水平的Box-Behnken响应面分析法,分析各自变量及交互作用对L.caseiLC2W菌落总数的影响,并对营养因子进行优化。结果表明:各营养因子对L.casei LC2W菌落总数的影响顺序为:MnSO4添加量>大豆多肽添加量>葡萄糖添加量,且MnSO4添加量与大豆多肽添加量的交互作用影响显著。各营养因子的优化参数为:葡萄糖添加量65.90g/L、大豆多肽添加量7.68g/L、MnSO4添加量13.88mg/L。在此优化条件下发酵24h后,干酪乳杆菌LC2W菌落总数可达2.6×109CFU/mL,比优化前(2.1×108CFU/mL)提高了11.38倍。     

不同蛋白酶酶解对蚕豆蛋白生物活性的影响

以青海蚕豆为原料,通过干燥、粉碎、等电点沉淀、冻干等工艺提取蚕豆蛋白,选用酸性蛋白酶、菠萝蛋白酶、胃蛋白酶对其进行酶解,并以抗氧化活性及α-葡萄糖苷酶活性抑制率为评价指标,考察不同蛋白酶酶解对蚕豆蛋白生物活性的影响。结果表明:经蛋白酶酶解后,蚕豆蛋白多肽得率极显著升高;胃蛋白酶处理后的蚕豆蛋白多肽得率达39. 14%;经菠萝蛋白酶和酸性蛋白酶酶解后可以明显增加蚕豆蛋白中氨基酸的种类和含量。菠萝蛋白酶处理后的蚕豆蛋白酶解产物对ABTS自由基的清除率可达90. 53%(质量浓度96μg/mL),对α-葡萄糖苷酶的活性抑制率可达88. 10%(质量浓度48μg/mL);经酸性蛋白酶处理后的蚕豆蛋白酶解产物对DPPH自由基的清除率可达95. 71%(质量浓度96μg/mL)。经蛋白酶酶解后蚕豆蛋白的生物价值得以大幅度提升,具有很好的开发前景。     

富硒螺旋藻蛋白水解多肽的制备及其对ACE活性的抑制作用

从富硒螺旋藻(SeSP)中提取含硒总蛋白(SeSP-TP),建立蛋白酶水解制备含硒多肽(SeSP-PP)的最佳条件,体外检测SeSP-PP对血管紧张素转化酶(ACE)活性的抑制作用,采用ICP法快速测定藻粉及总蛋白中的硒含量。结果发现,5种常见蛋白酶对SeSP-TP的水解度趋势为:胃蛋白酶-胰蛋白酶-胰凝乳蛋白酶联合酶>碱性蛋白酶>木瓜蛋白酶>胰凝乳蛋白酶>胰蛋白酶>胃蛋白酶。利用胃蛋白酶-胰蛋白酶-胰凝乳蛋白酶联合酶水解,可显著提高蛋白水解度,达到87.94%,且联合水解的多肽对ACE抑制效率最高(89.47%)。碱性蛋白酶水解得到的多肽对ACE的抑制率也较高。当荧光检测出的含硒多肽高于50μg/mL时,对NO的合成有明显的促进效应,而含硒蛋白效果不明显。水溶性和非水溶性组分中测定的硒含量之和占总硒的95.47%,可能在提取制备SeSP-TP过程中,部分含硒蛋白质和含硒小分子会在沉淀、复溶和透析等步骤中丢失。     

麦胚酸奶的营养成分分析

分析麦胚酸奶的营养成分,为综合利用麦胚这一营养资源,开发麦胚酸奶这一新型产品提供科学依据.分别测定普通酸奶、麦胚酸奶(10％)中的水分、粗脂肪、粗蛋白质、矿物质等营养素指标.麦胚酸奶的蛋白质,脂肪含量分别为5.27g/100g,3.57g/100g,麦胚酸奶的钙、铁、锌、镁、铜含量分别为89.62mg/100g,0.95mg/100g,1.57mg/100g,29.01 mg/100g,0.07mg/100g.直接添加麦胚发酵酸奶中粗蛋白、粗脂肪、钙、镁、铁、锌、铜含量均高于普通酸奶(p＜0.05).     

酶法水解卵黄蛋白制备多肽的工艺优化

利用酶法制备卵黄蛋白多肽。比较复合风味蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、复合蛋白酶水解卵黄蛋白的效果,确定碱性蛋白酶与复合风味蛋白酶为复合酶解的工艺用酶。采用响应面分析法,以水解度、多肽含量为响应值,研究加酶量、酶用量比、复合酶解时间比、pH值对制备多肽工艺的影响。结果表明：酶法水解卵黄蛋白制备多肽的最佳工艺条件为：卵黄蛋白质量浓度10g/100mL、温度55℃、pH7.2,按0.8g/100mL添加碱性蛋白酶水解2h后,再按0.4g/100mL添加复合风味蛋白酶水解2h,在该条件下水解度和多肽含量分别为(13.31±0.5)%和(1.85±0.5)mg/mL。     

豆粕制备ACE抑制肽最优酶筛选及其条件优化

以ACE抑制率为指标,筛选得到碱性蛋白酶水解产物的ACE抑制率远高于中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶。采用正交实验和Box-Behnken实验相结合的方法进一步对碱性蛋白酶的水解条件优化,确定碱性蛋白酶最佳水解条件为:温度60℃,底物浓度为5%,酶浓度为3000U/g,水解时间为4h,pH为8.1。通过验证实验,得到产物的ACE抑制率达到51.91%。     

响应面法优化孵育麦胚功能肽研究

麦胚是小麦加工成面粉后的副产物,蛋白质含量高且必需氨基酸组成合理,但在现实生活中却没有很好地利用。从功能肽的角度对麦胚资源开发进行了研究,利用麦胚自身的内源蛋白酶进行水解。以肽含量为响应值,在孵育温度、时间、孵育液pH、液料比等单因素实验基础之上,进行了响应面优化实验,确定了最优条件:孵育温度为45℃、提取时间为4.31h、液料比为30、pH4.39,在此条件下,依据建立的数据模型,肽最大提取产量预测值达171.074mg/g,经验证,实测值达(169.04±0.42)mg/g,说明模型是可信的。     

富硒螺旋藻多肽对血管紧张素转化酶的抑制作用

从富硒螺旋藻(SeSP)中提取总蛋白(SeSP-TP),用不同蛋白酶水解SeSP-TP制备富硒螺旋藻多肽(SeSP-Ps),体外测定SeSP-Ps对血管紧张素转化酶(ACE)的抑制作用。结果表明：5种常见蛋白酶在最适条件下对SeSP-TP水解度明显不同,其中胃蛋白酶-胰蛋白酶-胰凝乳蛋白酶联合使用时的酶水解度最高;虽然不同蛋白酶水解制备的SeSP-Ps均对ACE具有较强的抑制作用,但不同酶水解的SeSP-Ps对ACE的50%抑制浓度(IC50)存在明显差异,其中胃蛋白酶-胰蛋白酶-胰凝乳蛋白酶联合酶解制备的SeSP-Ps对ACE的IC50值最低,为74.6μg/mL。结果提示：SeSP在体内经胃肠蛋白酶消化产生的多肽,对ACE具有较强的抑制活性,且SeSP-Ps对ACE的抑制作用呈现显著的剂量-效应依赖性。