A群脑膜炎球菌兔抗血清的制备及鉴定

目的制备A群脑膜炎球菌兔抗血清内部参考品,并进行鉴定。方法用新鲜培养的A群脑膜炎球菌混悬液按确定的免疫方案免疫日本大耳白兔,免疫完成后,按确定的采血时间点,经颈动脉采血,分离血清,进行凝集试验,观察兔抗血清凝集反应情况;采用免疫双扩散和ELISA法检测兔抗血清效价,同时利用火箭免疫电泳和ELISA法鉴定兔抗血清的血清学特异性。结果确定免疫方案为基础免疫4周后,加强免疫2周;免疫完成后第6天为最佳采血时间点。6份自制A群脑膜炎球菌兔抗血清的凝集试验效价均达到1︰160,与相应的多糖能够产生沉淀线的最大稀释倍数均不低于1︰8,与A群脑膜炎球菌荚膜多糖反应的抗体滴度均在106及以上,与C、Y和W135群脑膜炎球菌荚膜多糖之间无交叉反应。结论自制的A群脑膜炎球菌兔抗血清可作为A群脑膜炎球菌荚膜多糖疫苗的定性和定量检测的内部参考品,同时也为其他多糖类疫苗血清抗体的制备提供了参考。     

ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗多糖含量火箭电泳检测方法的建立及其验证

目的建立ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗多糖含量检测的火箭电泳法,并对该方法进行验证。方法分别用A、C、Y、W135群菌液免疫家兔,制备特异性抗血清,加至琼脂糖凝胶平板中,以定量的各群多糖原液作为抗原参考品进行火箭电泳,用已知的多糖浓度及对应的火箭峰高绘制标准曲线,得出直线回归方程,根据样品的火箭峰高计算多糖含量,确定该方法的检测限,并对该方法进行专属性、线性重复性、准确度、精密度验证;用建立的方法检测3批ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗多糖含量。结果根据该方法绘制的标准曲线呈良好的线性关系,R2均≥0.95;该方法确定样品多糖浓度检测范围为3~7μg/ml,回收率在90%~110%范围内;重复性及不同操作者间的精密度试验结果 RSD均小于5%;特异性好,未检出各群抗原之间的交叉反应。3批ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗多糖含量均符合企业内部《ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗制造与检定规程》的要求。结论建立的火箭电泳方法可用来检测ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗的多糖含量。     

四价脑膜炎球菌多糖疫苗中结合物多糖抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证

目的建立一种检测A、C、W135和Y群四价脑膜炎球菌多糖疫苗中各血清群多糖蛋白结合物的双抗体夹心定量ELISA检测方法,并进行验证。方法以白喉类毒素无毒变异体(CRM197)特异性单抗为包被抗体,HRP标记的脑膜炎球菌A、C、W135和Y群多糖特异性单抗为捕获抗体,建立可定量检测脑膜炎球菌各血清群结合物多糖含量的双抗体夹心ELISA法,确定方法的最佳线性范围和检测限,并对方法的特异性、准确性和重复性进行验证。结果定量检测A群脑膜炎球菌结合物(GAMP-CRM197)多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为3.75~120 ng/ml,检测限为3.75 ng/ml;定量检测C群脑膜炎球菌结合物(GCMP-CRM197)多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为1.875~30 ng/ml,检测限为0.938 ng/ml;定量检测W135群脑膜炎球菌结合物(GWMPCRM197)多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为7.5~240 ng/ml,检测限为7.5 ng/ml;定量检测Y群脑膜炎球菌结合物(GYMP-CRM197)多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为1.875~60 ng/ml,检测限为0.938 ng/ml。A、C、W135、Y群双抗体夹心ELISA法均能特异性地检测相应的结合物多糖抗原含量,而不与其他群的结合物多糖抗原发生交叉反应;A、C、W135、Y群双抗体夹心ELISA法的回收率均在80%~120%之间,检测相应的结合抗原样品时,变异系数(CV)均小于15%。结论建立的双抗体夹心ELISA法特异性较强,准确性较高,重复性良好,可用于四价脑膜炎球菌多糖疫苗中各血清群结合物多糖抗原的定量检测。     

A群C群脑膜炎球菌结合疫苗的制备

目的制备A群C群脑膜炎球菌结合疫苗,并对其进行生化检测及免疫原性和抗原性分析。方法经溴化氰(CNBr)分别活化的A群、C群脑膜炎球菌荚膜多糖,在己二酰肼(ADH)的连接作用和碳二亚胺(EDAC)的偶联作用下,与破伤风类毒素(Tetanic toxoid,TT)形成结合物。以不同剂量的GAMP-TT和GCMP-TT的混合物免疫小鼠,检测小鼠血清中GAMP、GCMP和TT的抗体滴度,评价其免疫效果。根据剂量试验结果,制备A群C群脑膜炎球菌结合疫苗并进行抗原性检测,并与市售同类产品进行对比试验。结果制备的3批GAMP-AH和3批GCMP-AH的批间差异较小,GAMP-AH和GCMP-AH的衍生率相差较大,由GCMP-AH制备的GCMP-TT的结合率明显高于GAMP-TT(P<0.01),结合物含量差异无统计学意义(P>0.05)。GAMP-TT和GCMP-TT具有良好的免疫原性和抗原性,多糖蛋白结合物组较多糖组可诱导产生更高水平的GAMP和GCMP抗体,且具有免疫记忆。由以上两者制备的A群C群脑膜炎球菌结合疫苗生化指标、血清抗体效价与市售的同类产品差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功研制了具有良好免疫原性和抗原性的A群C群脑膜炎球菌结合疫苗,为其产业化奠定了基础。     

A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的研制

目的 制备安全有效的Ａ群脑膜炎球菌多糖结合疫苗。方法 通过碳二亚胺（ＥＤＡＣ）将Ａ群脑膜 炎球菌多糖－ＡＨ衍生物与破伤风类毒素（ＴＴ）蛋白共价结合,制备Ａ群脑膜炎球菌多糖结合疫苗。结果 所结合 成的多糖－蛋白结合物,具有Ａ群脑膜炎球菌多糖和破伤风类毒素抗原特异性。单独用多糖免疫小鼠未能诱导出 高水平的血清Ｐｓ抗体,而用结合物免疫小鼠却诱导出高水平的血清Ｐｓ抗体及ＴＴ抗体,并有免疫记忆性。结论 为进一步临床评价该疫苗的人群免疫效果提供了实验基础。     

C群和W135群流脑结合疫苗的制备及其初步免疫评价

用NaIO4分别衍生C群和W135群脑膜炎球菌荚膜多糖(GCMP和GWMP),经异端基双官能团交联剂N-β-马来酰亚胺丙酸酰肼偶联破伤风类毒素TT,制备两种多糖结合疫苗并免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA法测定血清中多糖特异性抗体和TT特异性抗体,采用硫氰酸盐洗脱法测定多糖特异性抗体亲合力. 结果表明,GCMP?TT和GWMP?TT结合物的多糖蛋白比分别约为0.4和1.0;初次免疫后两周、一次和二次加强免疫后各一周,GCMP?TT组的抗C糖特异性抗体滴度分别是GCMP组的3.2, 1.4和1.2倍,而GWMP?TT组则分别为GWMP组的2.5, 2.2和2.8倍,表明两种结合物均可有效提升纯抗原的免疫效果;两个结合物组的血清免疫球蛋白亚型的比值IgG2a/IgG1均高于多糖对照组,表明结合载体蛋白后多糖由TI抗原转变为TD抗原;两种结合物的多糖特异性抗体亲和力指数约为纯抗原的2倍,表明结合物均可诱导出较强的免疫记忆.     

差异火箭免疫电泳定量检测四价脑膜炎球菌结合疫苗游离多糖方法的建立及验证

目的建立差异火箭免疫电泳(differential rocket immunoelectrophoresis,DRIEP)定量检测四价脑膜炎球菌结合疫苗游离多糖的方法,并对该方法进行验证。方法制备非均一性抗体琼脂糖凝胶,建立脑膜炎A群、C群、Y群、W135群游离多糖的DRIEP定量检测法,并对该方法的专属性、分离效果、线性、重复性及稳定性进行验证。分别采用DRIEP法及DOC沉淀化学法对11批各群脑膜炎球菌单价结合物进行检测。结果各群多糖抗原只与其相应特异性抗体发生结合,无交叉反应;各群结合物或混合物中的TT可完全与多糖分离;A群、W135群游离多糖定量对照品在2.5~20μg/ml范围内,C群、Y群游离多糖定量对照品在2~10μg/ml范围内,与沉淀峰高度呈良好线性关系,R2均>0.99;各群单价结合物的9次检测结果的CV值均<15%;多价脑膜炎球菌结合疫苗中各群游离多糖含量均比较接近。DRIEP法检测值较DOC沉淀化学法高约1/2倍,但两种方法检测结果的高低趋势具有相似性。结论DRIEP法可用于四价脑膜炎球菌结合疫苗中游离多糖的定量检测,提高了该疫苗的质控水平。     

C群脑膜炎球菌结合疫苗的工艺稳定性及其免疫原性

目的研究C群脑膜炎球菌荚膜多糖(Group C meningococcal polysaccharide,GCMP)与破伤风类毒素(Tetanustoxoid,TT)结合疫苗的工艺稳定性及其免疫原性。方法以己二酸二酰肼(ADH)作为间隔剂,碳二亚胺(EDAC)为缩合剂,扩大量制备8批GCMP-TT结合物,以生化、免疫学方法分析8批GCMP-AH衍生物和GCMP-TT结合物的主要特性;将8批GCMP-TT结合物分别免疫NIH小鼠,ELISA法检测小鼠血清中特异性抗GCMP和抗TT的IgG抗体,分析其免疫原性。结果 8批GCMP-AH衍生物及GCMP-TT结合物各项生化检测指标基本一致,批间差异较小,均达到《欧洲药典》的规程(7.0版)要求,并具有良好的抗原性。免疫小鼠的血清中均产生了较高水平的抗GCMP和抗TT的特异性IgG抗体,与GCMP产生的特异性IgG抗体相比,差异有统计学意义(P0.001);GCMP-TT结合疫苗第2针、第3针与第1针相比,免疫后产生的IgG抗体水平差异均有统计学意义(P0.001)。结论 GCMP-TT结合疫苗的制备工艺稳定、可靠,具有良好的免疫原性,并可诱导免疫记忆,为脑膜炎球菌结合疫苗的规模化生产提供了重要的实验依据。     

A群C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的免疫原性及免疫持久性观察

目的观察A群C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗在不同年龄段的免疫原性及免疫持久性。方法选择广西南宁市隆安县4岁以内健康易感婴幼儿1 190名,分为3~8月龄(试验组220名,对照组133名)、1~2岁(试验组202名,对照组212名)、3~4岁(试验组218名,对照组205名)3个年龄段,试验组经上臂外侧三角肌附着处肌肉注射A群C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗,对照组经上臂外侧三角肌附着处皮下注射A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗。3~8月龄组共免疫3针次,1~2岁组共免疫2针次,均间隔1个月;3~4岁组免疫1针次。各组免疫剂量均为0.5 ml/次。3~8月龄组分别于免疫前和第2针免疫后4周、第3针免疫后4周及末次免疫后3年采血,1~2岁组分别于免疫前、第2针免疫后4周及末次免疫后3年采血,3~4岁组分别于免疫前、免疫后4周及免疫后3年采血,采用杀菌力试验及ELISA法检测血清抗体水平,观察疫苗的免疫效果及抗体随时间变化情况。结果不同年龄段婴幼儿免疫A群C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗后,抗体水平均显著提高,且在免疫后3年仍保持较高的抗体保护水平。结论A群C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗针对不同年龄段均保持很高的免疫保护水平。     

不同载体蛋白制备的A群脑膜炎球菌多糖结合物的免疫原性比较

目的比较不同载体蛋白(TT、DT和rEPA)制备的A群脑膜炎球菌多糖(GAMP)结合物的免疫原性。方法采用溴化氰(CNBr)活化多糖,以无水己二酸二肼(ADH)为连接剂,1-乙基-1-3-(3-二甲基氨基-丙基)-碳化二亚胺(EDAC)为偶联剂,制备结合物并免疫小鼠,检测小鼠血清中抗GAMP与抗载体蛋白抗体及抗GAMP抗体的杀菌活性。结果多糖衍生物、多糖-蛋白质结合物均具有GAMP抗原特异性;结合物免疫小鼠可诱生较单独多糖更高水平的血清抗GAMP IgG抗体和更强的体外杀菌活性,并能产生免疫记忆。结论3种载体蛋白制备的结合物均能提高多糖抗原的免疫原性。     

Synthesis and characteristics of chelating fibers containing imidazoline group or thioamide group

Two types of chelating fibers containing an imidazoline or thioamide group were prepared through the functionalization of hydrazine‐modified polyacrylonitrile fiber by ethylenediamine and through the amination and sulfurization reaction of the hydrazine‐modified polyacrylonitrile fiber under appropriate conditions, respectively. It is shown that the reaction temperature, time, and agent concentration are the dominant factors in the synthesis of fibrous sorbents. The increase of the ethylenediamine concentration from 33 to 45% (v/v) at 95–98°C results in a twofold higher increase of the fibrous sorbent with the imidazoline group, and a doubling of the reaction time from 2 to 4 h leads to a weight increase of the fibrous sorbent from 10 to 25% (w/w). Raising the temperature by about 5°C significantly accelerates the amination reaction of the hydrazine‐modified fiber, but the temperature is an insensitive factor in the thioamide‐functionalized reaction of the aminated fiber. The introduction of a thioamide or imidazoline group is further verified by IR spectroscopy analysis. X‐ray diffraction spectroscopy indicates the absolute disappearance of crystalline peaks for the fibers containing an imidazoline or thioamide group. However, the crosslinking reaction of the polyacrylonitrile fiber by hydrazine may make up for the effect of the crystallinity on the mechanical strength of the fibers, and the surface crackles of fibrous sorbents are not found by SEM photographs. The adsorption experiment results show that the newly prepared sorbents have high sorption capacities for noble metals in a high acidity, and it is also proved that Au(III) loaded on the chelating fibers may be reduced to Au(0). © 2002 Wiley Periodicals, Inc. J Appl Polym Sci 83: 1608–1616, 2002     

侧基聚醚/二苯甲酮紫外吸收基聚硅氧烷的合成与表征

以H2PtCl6.6H2O为催化剂,甲苯为溶剂,通过硅氢化反应将端烯丙基聚氧乙烯聚氧丙烯醚(F6)和紫外吸收剂4-(3-烯丙氧-2-羟基)丙氧基-2-羟基二苯甲酮(AHDBP)同时引入聚甲基含氢硅氧烷(PHMS),合成了侧基聚醚/二苯甲酮紫外吸收基聚硅氧烷(PE-PUVSi),并用IR、UV和1HNMR对产物结构进行了表征。结果表明,在反应温度为80℃~100℃,甲苯用量为m(甲苯)∶m(PHMS)=1∶1,n(C=C)∶n(Si-H)=1.23∶1,n(F6)∶n(AHDBP)=2∶1的条件下可得到具有良好水溶性和对波长为243.6 nm、289.2 nm、325.0 nm处的紫外光有强吸收作用的产物。     

烷基与酯基的引入对高吸水性树脂吸液性能的影响

以丙烯酸(AA)为单体,通过水溶液聚合法分别与丙烯酸丁酯、甲基丙烯酸、甲基丙烯酸甲酯和丙烯酸甲酯(MA)共聚合,制备了二元共聚高吸水性树脂,并采用傅里叶变换红外光谱仪、扫描电子显微镜和热重分析仪等进行了表征。结果表明:酯基与烷基的引入拓宽了树脂的三维网络结构,明显提高了树脂的吸液性能。其中,AA与MA的二元共聚物吸液性能最优,与聚丙烯酸相比,吸水倍率提高39%,吸水速率提高26%,吸CaCl2和NaCl水溶液的速率明显增强,得到的吸水性树脂结构致密、质地均匀、热稳定性好。     

旋光性和带官能团的三元共聚物--香茅醇、苯乙烯和甲基丙烯酸甲酯的合成与表征及动力学研究

深入研究了一系新型的三元共聚物合成，包括两个给电子单体，即单茅醇（旋光性）和苯乙烯，一个接受电子单体，甲基丙烯酸甲酯，用BPO为自由基引发剂，二甲苯为溶剂，在80℃下反应2h.该体系符合理想动力学特征，总活性自由能为33KJ／mol,用H－NMR分析了三元共聚物的结构，7－8δ的峰为苯基质子峰，3．4－4δ的峰为含甲氧基质子峰，7－7．5δ为乙醇基质子峰，此外，用FTIR光谱分析，在波长2900cm^-1,1750cm^-1和3400cm^-1分别是苯基，甲氧基，和乙醇基的峰，进入共聚物组分的单体通过Kelen-Tudos方法确定，反应比率的值为r1(MMA)=0.9,r2(苯乙烯＋香茅醇）＝0．02。     

宝洁VS纳爱斯:射与雕的骊歌

一个是实力强大且有百年历史的跨国公司，一个是中国洗涤用品行业的龙头老大，他们如何针锋相对?到底谁能笑傲江湖?宝洁公司下一步将使用何种招数?纳爱斯以及更多的本土企业又将怎样应对?