肠出血性大肠杆菌(EHEC)流行趋势(综述)

肠出血性大肠杆菌（Ｅｎｔｅｒｏ－ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃＥ．ｃｏｌｉ,ＥＨＥＣ）是指能引起人的出血性肠炎的一群大肠埃希氏菌,以Ｏ１５７：Ｈ７血清型菌株为主,还包括Ｏ１５７：ＮＭ,Ｏ２６：Ｈ１１,Ｏ１１１：Ｈ８,Ｏ１２５：ＮＭ,Ｏ１２１：Ｈ１９,Ｏ４：Ｎ...     

5 类致泻性大肠埃希氏菌多重荧光PCR检测方法的建立

目的：建立快速检测和鉴别5?类致泻大肠埃希氏菌的多重实时荧光聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）方法。方法：根据5?类致泻大肠埃希氏菌的11?组毒力基因eae、stx1、stx2、ipaH、uidA、estla、estlb、aggR、pic、elt、astA建立多重实时荧光PCR方法,该方法包括A、B?2?个反应体系,可分别检测肠致病性大肠埃希氏菌、肠出血性大肠埃希氏菌、肠侵袭性大肠埃希氏菌、肠产毒大肠埃希氏菌、肠聚集性大肠埃希氏菌,优化反应体系的引物、探针浓度以及PCR反应条件,并对该方法的灵敏度和特异性进行检测。结果：11?组基因的探针和引物均可特异性地扩增相应的基因片段,A体系检测下限可达到2.6×104?copies/反应,B体系检测下限可到达2.2×104?copies/反应。结论：本研究所建立的多重实时荧光PCR方法可以对同一样本同时采用A、B?2?个反应体系进行检测,不但可以确定待测样本是否为大肠埃希氏菌,而且还能判定其致病型别。为大肠埃希氏菌的临床检测、疾病预防以及爆发溯源等提供参考。     

傅立叶变换红外光谱技术对6种致病性大肠埃希氏菌快速分型的研究

目的建立肠致病性大肠埃希氏菌(Enteropathogenic E.coli,EPEC)、肠产毒性大肠埃希氏菌(Enterotoxigenic E.coli,ETEC)、肠侵袭性大肠埃希氏菌(Enteroinvasive E.coli,EIEC)、肠黏附性大肠埃希氏菌(Enteroadhesive E.coli,EAEC)、肠出血性大肠埃希氏菌(Enterohmorrhagic E.coli,EHEC)、弥散粘附性大肠埃希氏菌(Diffusely adherent E.coli,DAEC)6种致病性大肠埃希氏菌的傅立叶变换红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FT-IR)数据库及FT-IR分型方法。方法应用FT-IR技术对6种致病性大肠埃希氏菌进行指纹图谱数据采集并对其进行基线校正、归一化等处理,应用化学计量学方法对光谱数据进行分析。结果本研究建立了6种致病性大肠埃希氏菌的FT-IR光谱数据库,实现了对6种可疑目标大肠埃希氏菌鉴定;建立了主成分分析(principal component analysis,PCA)和分级聚类分析(hierarchical cluster analysis,HCA)2种模型,成功实现了对6种致病性大肠埃希氏菌的快速分型。结论 FT-IR分析方法快速、简便、易操作,结果重现性好,是一种鉴定6种致病性大肠埃希氏菌的有效方法。     

2019—2021年武汉市致泻大肠埃希菌分子分型与耐药性研究

目的 了解2019—2021年湖北省武汉市腹泻患者来源致泻大肠埃希菌的毒力基因分布、耐药情况以及种群多样性。方法 定期收集来自武汉市5家医疗机构的致泻大肠埃希菌菌株并通过生化反应和飞行时间质谱进行确认。对经确认的菌株进行药敏试验以及多重PCR检测毒力基因。采用脉冲场凝胶电泳技术和多位点序列分型技术对收集的菌株进行分子分型。通过聚类比对和构建最小生成树进行同源性分析。结果 收集到59株致泻大肠埃希菌，共检出3种基因型别。其中检出产肠毒素大肠埃希菌（ETEC）29株，占比最高为49.15%；肠集聚性大肠埃希菌（EAEC）、肠致病性大肠埃希菌（EPEC）各检出15株，占比均为25.42%。59株致泻性大肠埃希菌对除多黏菌素E外的11种抗生素表现出不同程度的耐药，对氨苄西林（67.80%）、萘啶酸（61.02%）、四环素（45.76%）、复方新诺明（37.29%）、头孢噻肟（30.51%）、氯霉素（13.56%）表现出较高的耐药性。EAEC和EPEC均存在14种不同的脉冲场凝胶电泳带型，均可被分为11种不同的ST型别。ETEC存在28种不同的脉冲场凝胶电泳带型，可被分为10种不同的ST型别，且超过50%的ETEC属于同一种优势克隆复合体CC-10。结论 武汉市食源性致泻大肠埃希菌的污染长期存在且耐药情况严重，其中EAEC和EPEC型别多样，ETEC的优势克隆复合体CC-10被广泛检出。     

2018—2019年密云地区肠聚集性大肠埃希氏菌基因型及耐药分析

摘要：目的 了解密云地区食源性疾患肠聚集大肠埃希氏菌的感染情况、基因型分布和耐药趋势。方法 以密云区区医院、中医院为哨点医院,采集符合病例定义的腹泻病人粪便868份。从粪便中检出68株肠聚集性大肠埃希氏菌,进行基因分型、耐药实验,并对结果进行统计学分析。结果 68株肠聚集性大肠埃希氏菌基因型aggR占51.47 % , asta+pic基因占36.76 %,aggR+asta+pic基因 11.76 %,在11种抗生素药物敏感性试验中耐药率为100%,2019年比2018年肠聚集性大肠埃希氏菌氨苄西林耐药率升高21.98%（Ｐ＜０.０５）,萘啶酸耐药率升高24.31%（Ｐ＜0.05）,四环素耐药率升高24.31%（Ｐ＜０.０5）其他8种抗生素耐药率变化无统计学意义（Ｐ＞０.０５）。结论 鉴于EAEC的耐药现状相关部门应加大抗生素使用监管力度,临床应合理利用抗生素,大力开展食源性疾患的主动监测, 了解本地区致病因子的流行状态及耐药趋势。     

2016年江苏省食源性疾病患儿中致泻大肠埃希氏菌毒力基因分布与耐药性特征

目的 了解江苏省食源性疾病患儿中致泻大肠埃希氏菌的流行状况、不同毒力基因型的分布和对抗生素的敏感性特征。方法 从江苏省各设区市的三甲医院共收集3566例食源性疾病患儿的粪便或肛拭子标本进行致泻大肠埃希氏菌检测, 用实时荧光定量PCR进行毒力分型, 用微量肉汤稀释法进行药敏实验。结果 江苏省食源性疾病患儿中, 共检出致泻大肠埃希氏菌104株, 总检出率为2.9%(104/3566)。在5种毒力基因型致泻大肠埃希氏菌中, 肠聚集性大肠埃希氏菌、肠致病性大肠埃希氏菌是主要的毒力基因型, 分别占61.5%(64/104)、26.9%(28/104)。致泻大肠埃希氏菌对氨苄西林耐药率最高, 达71.2%, 其次为四环素和萘啶酸, 分别为59.6%和54.8%。未发现亚胺培南耐药菌株。多重耐药率为75.0%。结论 肠聚集性大肠埃希氏菌是导致江苏省儿童食源性疾病最主要的致泻大肠埃希氏菌。约95%以上的致泻大肠埃希氏菌对头孢他啶、头孢西丁敏感, 100%对亚胺培南敏感。耐药率及多重耐药率高, 应加强致泻大肠埃希氏菌耐药性监测及临床抗生素合理使用。     

2017—2021年河南省肉与肉制品食源性致病菌监测及部分肠杆菌耐药特征分析

目的 了解河南省肉制品中食源性致病菌的污染状况,并对肠杆菌进行血清学分型和耐药特征分析。方法 收集2017—2021年河南省郑州市等21个监测点的1 934份肉与肉制品,参考《国家食品污染物和有害因素风险监测工作手册》和《河南省食品微生物风险监测工作手册》进行沙门菌、致泻大肠埃希菌、小肠结肠炎耶尔森菌、产气荚膜梭菌、单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌和空肠弯曲菌等7种食源性致病菌的检测,使用微量肉汤稀释法对致泻大肠埃希菌和沙门菌进行药敏试验,分析耐药率和耐药谱等特征。结果 1 934份样品中检出478株致病菌,其中沙门菌96株,共26个血清型,以肠炎沙门菌为主;致泻大肠埃希菌82株,以肠集聚性大肠埃希菌为主;产气荚膜梭菌68株,小肠结肠炎耶尔森菌38株,空肠弯曲菌33株,单核细胞增生李斯特菌140株和金黄色葡萄球菌21株。致病菌总检出率为24.72%,调理肉制品检出率最高达到89.00%,其次为生禽肉（36.79%）和生畜肉（22.35%）。96株沙门菌对氨苄西林（71.88%）、萘啶酸（63.54%）及四环素（58.33%）高水平耐药;82株致泻大肠埃希菌对四环素（84.38%）、...     

肠出血性大肠艾希氏菌O157：H7（综述）

肠出血性大肠艾希氏菌Ｏ１５７：Ｈ７（综述）冉陆卫生部食品卫生监督检验所（１０００２１）１９７５年从一位患出血性腹泻的加利福尼亚妇女的粪便中首次分离到大肠艾希氏菌Ｏ１５７：Ｈ７（ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＯ１５７：Ｈ７）。１９８２年，Ｒｉｌｅｙ［１...     

辽宁省婴幼儿食品中肠集聚性大肠埃希菌的病原学特征及耐药谱研究

目的 对2018—2020年辽宁省婴幼儿食品中致泻大肠埃希菌开展持续监测,了解和掌握本省内致泻大肠埃希菌的病原学特征、药物敏感性特征,为本省致泻大肠埃希菌流行病学研究奠定坚实基础,为可能导致的食源性疾病合理用药提供依据。方法 采集辽宁省共208份婴幼儿食品,分离肠杆菌科细菌,并进行16S rRNA基因测序分析与生化鉴定。对鉴定得到的大肠埃希菌进行毒力基因检测,收集分离的肠集聚性大肠埃希菌（EAEC）进一步进行血清学分型和耐药谱研究。结果 16S rRNA基因测序通过对肠杆菌科进行种鉴定,发现与生化结果一致。其中EAEC的检出率较高,且EAEC的毒力基因pic携带率高。毒力基因分型和血清分型具有一致性。共检测出25株EAEC,其中40%菌株（血清型O134:H9）携带毒力基因pic,28%菌株（血清型O3:H2）同时携带毒力基因aggR和astA,16%菌株（血清型O9:H6）携带毒力基因aggR,16%菌株（血清型O62:H7）携带毒力基因astA。78株大肠埃希菌中EAEC毒力基因的携带率为32.1%。25株EAEC为多重耐药株,主要对β内酰胺类、大环内酯类、喹诺酮类、四环素类抗菌药...     

肠侵袭性大肠埃希氏菌国家核酸标准样品的研制

目的研制肠侵袭性大肠埃希氏菌核酸标准样品,并对其均匀性和稳定性进行评价。方法本文研究了肠侵袭性大肠埃希氏菌核酸标准样品的关键制备技术和保存技术,定值技术和定值方式,开展均匀性和稳定性试验,并对食品中肠侵袭性大肠埃希氏菌核酸标准样品的不确定度进行确定;标准样品采用Pico Green DNA分子荧光定量方法进行定值。多家单位合作定值,确定标准样品的标准值及其不确定度。结果标准样品均匀性标准不确定度为0.016%,不稳定标准差为0.0100,均匀性和稳定性试验结果表明,本文研制的标准样品均匀且稳定。结论研制出具有溯源性的肠侵袭性大肠埃希氏菌核酸标准样品并获得国家标准样品证书,可适用于肠侵袭性大肠埃希氏菌的检测和质量控制。     

ATP＋IMS 实现大肠埃希菌O157：H7快速检测

大肠埃希菌O157：H7属于大肠杆菌中的埃希菌属（Escherichia）,是一种致病菌。自1982年,美国发生首次由大肠埃希菌O157：H7引起的出血性肠炎以来,该菌在世界范围内曾多次暴发食源性疾病。目前,大肠埃希菌O157：H7已被认定为20世纪七十年代以来新发现的8种传染病病原体之一。近年来,其感染呈全球流行趋势,并已经成为人类健康的重要微生物威胁。     

3种方法检测食品中致泻大肠埃希氏菌检测能力验证结果分析

目的提高食品中致泻大肠埃希氏菌的检测能力,促进实验室检测能力的提高。方法参照GB4789.6-2016《食品微生物学致泻大肠埃希氏菌检验》方法进行检测,采用VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定系统进行生化鉴定、血清学鉴定,对可疑菌落进行普通PCR确证试验。同时使用多重实时荧光PCR法以及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionizationtime-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)分析鉴定可疑菌落。结果国标法和多重实时荧光PCR法能准确鉴定出目标菌,MALDI-TOF-MS可以检测大肠埃希氏菌,但无法区分致泻大肠埃希氏菌和肠出血性大肠埃希氏菌。结论 3种方法各有优劣,同时使用,综合判断,能确保试验结果准确快速。     

2015—2017年河南省食源性疾病致泻大肠埃希菌监测情况分析

目的 了解河南省食源性疾病致泻性大肠埃希菌(DEC)的致病型和分布情况,为食源性疾病的防控提供参考数据。方法 对哨点医院食源性疾病患者的粪便标本进行DEC检测,确定致病型和毒力基因。结果 4 137份粪便标本有215份DEC阳性,阳性检出率为5.2%,其中有4份标本是不同型别的DEC混合感染。共分离DEC菌株219株,其中肠聚集性大肠埃希菌(EAEC)156株,产肠毒素大肠埃希菌(ETEC)28株,肠致病性大肠埃希菌(EPEC)28株,肠出血性大肠埃希菌(EHEC)2株,肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)5株。215例阳性病例中,5岁以下儿童有95例,占比为44.2%。DEC病例在6月和10月有一个发病的高峰,在其他月份均有检出。可疑暴露食品中,由肉与肉制品、乳与乳制品引发的病例分别为34和31例,占比分别为17.3%(34/196)和15.8%(31/196)。结论 河南省食源性疾病DEC基因型中,EAEC占比最高,感染以5岁以下儿童为主,全年均有检出,夏秋季多发,肉与肉制品、乳与乳制品引发病例较多。     

2002-2005年北京市顺义区食品致病菌监测分析

目的了解北京市顺义区食品致病菌的污染状况。方法按照GB/T4789─2003食品微生物检验标准方法进行检验。结果2002-2005年共监测了6类食品（590份）中的4种致病菌（沙门菌、金黄色葡萄球菌、肠出血性大肠埃希菌O157：H7、单核细胞增生性李斯特菌）。检出致病菌57株,阳性率为9.7%,其中检出沙门菌2株,金黄色葡萄球菌26株,单核细胞增生性李斯特菌29株,未检出肠出血性大肠埃希菌O157：H7。6类食品中生牛奶、生畜（禽）肉类产品致病菌阳性率较高,分别为15.5%、14.5%;冰淇淋、水产品、散装熟食中也有检出,分别为5.0%、4.4%、1.9%;生食蔬菜中没有检出致病菌。结论生牛奶、生畜（禽）肉类产品是致病菌污染的主要食品,由此造成的二次污染是引起食物中毒的隐患,应该引起足够重视。     

2017—2019年郴州市食源性疾病主动监测病原学特征及耐药分析

目的 了解郴州市食源性疾病的病原学特征和流行规律,为食源性疾病预防控制措施提供科学依据。方法 收集2017—2019年郴州市2家哨点医院主动监测的病例信息、粪便或肛拭子标本,依据《国家食源性疾病监测工作手册》中的方法对标本开展病原学检验、病原体分型以及药敏试验。结果 采集腹泻病例标本825份,病原体总检出率为30.18%（249/825）,其中沙门菌16.24%（134/825）、诺如病毒11.76%（97/825）、致泻大肠埃希菌3.52%（29/825）、副溶血性弧菌0.73%（6/825）、志贺菌0.12%（1/825）;第二、第三季度细菌检出率高,第一、第四季度病毒检出率高;不同年龄段病原体检出率以2～6岁年龄段最高（40.79%,31/76）;可疑暴露食品主要为乳及乳制品、粮食类及其制品和水果类及其制品;检出的沙门菌中以鼠伤寒沙门菌占比最高（74.63%,100/134）,致泻大肠埃希菌中以肠黏附型（EAEC）和产肠毒素型（ETEC）占比最高（34.48%,10/29）,诺如病毒以GⅡ型为主（85.57%,83/97）;沙门菌对四环素（TET）耐药率最高达88.71%（110/124）,沙门菌多重耐药率达85.48%（106/124）;致泻大肠埃希菌对氨苄西林（AMP）耐药率较高（79.31%,23/29）,致泻大肠埃希菌多重耐药率为62.07%（18/29）。结论 郴州市食源性疾病腹泻病例的主要病原体为沙门菌和诺如病毒,沙门菌和致泻大肠埃希菌耐药严重,应针对性地开展食品安全监管,强化抗生素耐药监测,严防抗生素滥用。     

北京市大兴区2018—2020年腹泻病人致泻大肠埃希氏菌检测结果分析

目的 了解北京市大兴区食源性疾病病例中致泻大肠埃希氏菌的感染情况、流行病学和病原学特征及耐药状况,为疾病防控及临床治疗提供依 据。 方法 通过收集三年大兴区辖区定点医院肠道门诊腹泻病人的粪便标本,依照GB4789.6-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 致泻大肠埃希氏菌检验》和WS271-2007《感染性腹泻诊断标准附录B.2 肠致泻性大肠杆菌检验》进行检验,在传统生化分离培养基础上采用实时荧光PCR方法对菌株进行鉴定,并对分离出的菌株做出分析。 结果 三年共检测标本1049件,检出致泻大肠埃希氏菌75株(7.15%),多数基因型别均有检出,肠道集聚性大肠埃希氏菌(EAEC,3.91%)检出率最高,其次为产肠毒素大肠埃希氏菌(ETEC,2.29%),有3株菌为双重菌合并感染,；1~10岁年龄组感染率最高(13.91%),年龄组别有统计学差异,男女感染无显著性差异；药敏试验结果耐药程度差异较大,耐药率最高的抗菌药物为红霉素(100%),其次为氨苄西林(87.1%)。结论 致泻大肠埃希氏菌在腹泻病人中感染率较高,其不同型别致病性、毒力、引起的症状均有不同,临床治疗也有差异,关注致泻大肠埃希氏菌感染情况更多要关注不同基因型别的感染状况,对预防和治疗意义更大。     

6类致泻大肠埃希氏菌多重PCR检测体系的建

目的 构建食源性致泻大肠埃希氏菌高效、快速、特异性强的检验方法。方法 根据6类致泻大肠埃希菌11种毒力基因引物, 采用煮沸法制备细菌基因组DNA作为模板构建致泻大肠埃希氏菌单菌多重PCR检测体系; 采用试剂盒法制备细菌基因组DNA作为模板构建6类菌十重PCR检测体系, 对2种检测体系进行优化并对其进行特异性、重复性验证。结果 构建了6类致泻大肠埃希氏菌多重PCR检测体系, 包括单菌多重PCR、6类菌十重PCR检测体系。仅6类致泻大肠埃希氏菌阳性菌株有特异性条带产生; 不同类型致泻大肠埃希氏菌菌株均检出其特异性阳性条带, 该多重PCR检测方法重复性好, 稳定性强。结论 该方法可高效快速地确定待测样是否为大肠埃希氏菌及其致病型, 为食品中致泻大肠埃希氏菌的监控、预警及爆发引起食物中毒后溯源等提供参考。     

广州市蔬菜类凉拌菜中微生物污染状况调查及大肠埃希氏菌耐药现象研究

;目的 了解广州市蔬菜类凉拌菜的微生物污染状况及大肠埃希氏菌耐药情况,为食源性疾病的预防和控制提供科学依据。方法：从广州市的超市、集贸摊点采集300份凉拌菜,依据GB 4789-2016进行微生物检验,用VETIK 对检出的大肠埃希氏菌进行药敏试验,PCR法检测致泻性大肠埃希氏菌毒力基因。结果：300份样品中大肠菌群检出率为41.7%,大肠埃希氏菌检出率为6.7%,金黄色葡萄球菌检出率为2.0%,未检出沙门氏菌。药敏结果显示大肠埃希氏菌对头孢唑啉的抗性最高(40.0%)、其次为氨苄西林(30.0%),对其它受试抗生素不具有耐药性,且无多重耐药菌株。20株大肠埃希氏菌中检出3株致泻大肠埃希氏菌。结论：广州地区蔬菜类凉拌菜中存在较为严重的微生物污染,食源性大肠埃希氏菌具有一定的耐药现象,应加大卫生监督力度,保障食品安全。     

2018—2020年上海市致泻大肠埃希氏菌感染的流行病学特征分析

目的 了解上海市致泻大肠埃希氏菌感染的流行病学特征,为致泻大肠埃希氏菌感染的预防和控制提供科学依据。方法 应用描述流行病学的方法,对收集的2018—2020年来自上海市30家食源性疾病监测哨点医院感染性腹泻病例的流行病学信息和致泻大肠埃希氏菌的检测结果进行统计分析。结果 2018—2020年共收集到13 672例有自诉可疑食物史腹泻病例及其标本,致泻大肠埃希氏菌阳性检出率为5.71%(781/13 672),其毒力基因型以ETEC和EAEC为主。7岁以下年龄组和职业为农民的就诊病例致泻大肠埃希氏菌的阳性检出率最高,7～9月是致泻大肠埃希氏菌阳性检出最高的月份,有发热症状、无呕吐症状、腹泻次数在3～9次/d的就诊病例致泻大肠埃希氏菌阳性检出率明显高于其他病例。自诉可疑食物类别为水果及其制品的就诊病例致泻大肠埃希氏菌阳性检出率相对较高。结论 本市致泻大肠埃希氏菌感染毒力基因型以ETEC和EAEC为主,感染高峰出现在夏季。通过对特定临床症状的询问,对疾病临床诊断和治疗具有一定的指导作用。应加强对餐饮服务业和街头食品的监督管理,加强对公众食品安全意识和良好食品安全习惯的宣传与培训,降低致泻大肠...     

荧光型重组酶聚合酶扩增技术检测食品中大肠埃希氏菌O157

研究基于荧光型重组酶聚合酶扩增(exo-RPA)技术原理,建立了一种大肠埃希氏菌O157的快速检测方法。应用该方法对多种大肠埃希氏菌O157菌株和非大肠埃希氏菌O157菌株的检测结果表明,该方法的荧光探针和引物具有良好的特异性。对于梯度稀释的插入靶基因序列的质粒pUC57-rfbE和大肠埃希氏菌0157的检测,大肠埃希氏菌O157 exo-RPA检测灵敏度分别可以达到10~2 copies/μL和2.1×10~4 cfu/mL。对食品样品中大肠埃希氏菌0157的检测,exo-RPA方法显示出了良好的稳定性。并且食品样品中目标菌经4 h增菌后,该方法的灵敏性可以满足对食品样品中初始浓度为2.1×10~1 cfu/mL的目标菌的检测。因为大肠埃希氏菌exo-RPA方法配套设备简便、廉价,所以该方法可以在各级检测机构中推广,并适用于食品生产到消费各环节中大肠埃希氏菌0157的即时检测。