双水相萃取纯化钝顶螺旋藻藻蓝蛋白技术探讨

采用正交试验法对双水相萃取纯化钝顶螺旋藻藻蓝蛋白技术进行优化,研究体系中PEG2000含量、酒石酸钾钠含量及p H值三个因素对钝顶螺旋藻藻蓝蛋白纯化的影响,确立了双水相萃取纯化钝顶螺旋藻藻蓝蛋白的优化条件:双水相体系总质量为20 g,加入C-PC粗提液5m L时,PEG2000的浓度为17%(w/w),酒石酸钾钠的浓度为21%(w/w),p H值为6.5。结果表明,双水相萃取纯化钝顶螺旋藻藻蓝蛋白所得的PC纯度3.11,C-PC的回收率为93.07%。     

两步盐析联合双水相萃取提取纯化蓝藻中藻蓝蛋白

以巢湖新鲜蓝藻为处理对象,采取冻融破壁的方式获取藻蓝蛋白的粗提液,采取两步盐析联合双水相萃取的方法提取纯化藻蓝蛋白。运用0.618法选点实验研究了两步盐析中(NH4)2SO4饱和度对提取纯化影响,构建了聚乙二醇（polyethylene glycol,PEG）-(NH4)2SO4的双水相体系,综合考虑PEG相对分子质量、PEG质量分数、(NH4)2SO4质量分数、pH值和藻蓝蛋白质量浓度对提取纯化藻蓝蛋白的影响。结果表明：室温25 ℃条件下,一步盐析时(NH4)2SO4的最佳饱和度为21%,二步盐析时(NH4)2SO4的最佳饱和度为30%。两步盐析后得到的藻蓝蛋白构建成PEG-(NH4)2SO4的双水相体系后,当PEG相对分子质量1 000、PEG 1 000质量分数10%、(NH4)2SO4质量分数25%时,藻蓝蛋白的纯度可达3.45。     

双水相萃取藻蓝蛋白的研究

双水相萃取是近年来发展起来的蛋白纯化方法。本研究运用双水相技术分离提取钝顶螺旋藻中藻蓝蛋白,对构成双水相体系中不同分子量PEG和酒石酸钾钠浓度的影响进行了分析。确定了双水相组成体系为16%的PEG 2000（w/w）和25%的酒石酸钾钠（w/w）,pH值为6.0,在此体系中藻蓝蛋白主要分布在上相,最高纯度3.69,分配系数20.7,回收率94.56%。多次双水相萃取有利于藻蓝蛋白纯度提高,3次双水相萃取后,藻蓝蛋白纯度高达4.15。     

响应面法优化黑胡萝卜红色素双水相萃取工艺

采用聚乙二醇（PEG）/硫酸铵双水相体系萃取纯化黑胡萝中的花青素。通过单因素实验考察了硫酸铵、PEG6000、粗提液的质量分数对花青素选择性系数和萃取率的影响,并以花青素的萃取率为响应值,结合响应面试验优化萃取工艺。结果表明,各因素对萃取率的影响程度由大到小依次为硫酸铵质量分数>粗提液质量分数>PEG6000质量分数。以双水相体系的总质量为基准,实验最佳萃取条件为:硫酸铵质量分数为20.0%、粗提液质量分数为12.0%、PEG6000质量分数为14.0%,黑胡萝卜红色素的平均萃取率为94.17%。此萃取方法得到的黑胡萝卜红色素具有一定的抗氧化活性,对DPPH自由基清除能力的IC₅₀值为30.51 mg/L。     

响应面分析法优化麦麸酯酶双水相萃取的条件

研究采用聚乙二醇/硫酸铵双水相体系萃取麦麸酯酶,通过单因素实验考察不同PEG分子量、PEG浓度、无机盐种类、无机盐浓度、pH和离子强度对麦麸酯酶总蛋白分配系数、酶活回收率、纯化倍数的影响,并通过响应面分析法优化了萃取条件。结果表明最佳萃取条件为:PEG1000质量浓度为21%、(NH4)2SO4质量浓度为18%、pH4.4。回归方程预测双水相萃取纯化倍数可达到2.9208,三次验证实验的平均纯化倍数为2.9190,与预测值相对误差为0.06%。     

双水相体系萃取纯化紫甘蓝色素

采用聚乙二醇(PEG)/硫酸铵双水相体系萃取纯化紫甘蓝中的花青素。通过单因素实验优化了硫酸铵、PEG、粗提液的质量分数和体系的pH,通过正交实验确定各因素对花青素选择性系数的影响程度,粗提液的质量分数 pH硫酸铵的质量分数 PEG的质量分数。实验最佳提取条件为:粗提液的质量分数为12%,硫酸铵质量分数为20%,pH为3.5,PEG的质量分数为15%,花青素的选择性系数为750.26。     

双水相萃取分离葡萄籽中原花青素

采用双水相萃取葡萄籽中原花青素,首先研究双水相萃取体系组成、辅助萃取方法、萃取策略对原花青素萃取效果的影响,并采用正交试验对原花青素萃取条件进行优化。结果表明,双水相萃取体系组成为无水乙醇/硫酸铵,辅助萃取方法为微波辅助法,萃取策略为乙醇+水+葡萄籽微波处理后加入硫酸铵,条件为无水乙醇/硫酸铵萃取体系为质量分数30%无水乙醇/质量分数20%硫酸铵,加入葡萄籽质量分数为3%,pH为4.0,微波功率100 W,微波时间5 min,在该条件下,葡萄籽中原花青素的萃取率为94.1%,得率为25.8mg/g;     

双水相系统提取槐米总黄酮的工艺研究

采用超声辅助双水相系统进行槐米总黄酮的提取,以萃取率为指标,考察了聚乙二醇1000（polyethylene glycol 1000,PEG1000）质量分数、料液比、浸提温度和硫酸铵质量分数对总黄酮提取的影响。通过正交试验得出最佳提取工艺参数为聚乙二醇1000质量分数28%,硫酸铵质量分数10%,料液比1∶60（g/mL）,浸提温度40℃。在此工艺条件下进行3次平行试验,总黄酮的萃取率为95.91%,得率为20.53 mg/g。该提取方法工艺稳定,结果重现性好。     

聚乙二醇/硫酸铵双水相体系萃取葡萄糖氧化酶的研究

采用聚乙二醇/硫酸铵[PEG/(NH4)2SO4]双水相体系对葡萄糖氧化酶的萃取进行了研究。以双水相系统的上、下相的酶活、比酶活、相比R、分配系数K和萃取率Y等为参数,探讨了PEG质量分数、不同PEG浓度和不同硫酸铵浓度对葡萄糖氧化酶在PEG/(NH4)2SO4双水相系统中分配行为的影响。实验结果表明:葡萄糖氧化酶在25%的PEG4000和10%硫酸铵的双水相体系中可获得较高的萃取率达81.11%,分配系数为0.134。     

乙醇-硫酸铵双水相体系萃取坛紫菜多糖

探究不同系线长度的乙醇-硫酸铵双水相体系对坛紫菜多糖萃取的影响。采用浊点滴定法绘制乙醇-硫酸铵双水相相图,选取不同系线长度体系,测定其对紫菜多糖分配情况。结果表明：在乙醇质量分数27%、硫酸铵质量分数18%（即系线长度为40）、体系相比R为1.1时,紫菜多糖的回收率可达79.8%,分配系数K为0.23;其蛋白去除率明显高于传统醇沉法（双水相萃取多糖蛋白含量为1.20%,醇沉多糖蛋白含量为6.17%）,且具有较好的脱色效果,可用于紫菜多糖的分离纯化。     

双水相法萃取分离猪胰α-淀粉酶体系的初步研究

采用聚乙二醇(PEG1500)/硫酸铵[(NH4)2SO4]双水相体系对猪胰α-淀粉酶分离条件进行了研究。探讨PEG质量分数、p H值和(NH4)2SO4质量分数对猪胰α-淀粉酶在PEG1500/(NH4)2SO4双水相中的分配系数Ka及萃取率Y的影响,并通过正交试验优化双水相萃取条件。结果表明,在p H值为7.0,PEG1500质量分数为18%,(NH4)2SO4质量分数为12%的双水相体系中,α-淀粉酶的分配系数Ka为8.48,萃取率Y为80.25%,α-淀粉酶活为1 690 U/m L。     

逐级盐析法结合双水相萃取纯化葛仙米藻蓝蛋白

利用逐级盐析法结合双水相萃取对葛仙米藻蓝蛋白进行纯化,设计三因素二次回归正交旋转组合试验对提取工艺进行优化,并应用Design-Expert 7.0软件建立了各影响因素与萃取纯度的数学回归模型。结果显示最佳的提取工艺为:20%(NH4)2SO4盐析去沉淀后用40%和50%(NH4)2SO4盐析得藻蓝蛋白,再用质量分数10%的聚乙二醇6 000、质量分数18%的(NH4)2SO4进行双水相萃取。所得产物纯度可达到8.6,回收率为71.40%。对所得产物进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,得到清晰的两条条带(条带1和条带2),其分子质量分别在35 ku和15 ku左右。通过质谱分析可知,条带2的分子质量为15 ku左右,等电点5.35,部分肽的氨基酸序列为TPLTEAVAAADSQGR和DIGYYLR。通过SWISS-MODEL网站模拟蛋白质结构得出,条带2可能是葛仙米藻蓝蛋白的α亚基。     

双水相萃取米糠多糖工艺条件的探究

旨在探究聚乙二醇/硫酸铵双水相体系萃取米糠中多糖成分的最佳条件。以双水相系统的相比、分配系数、收率等为参数,探究了PEG的相对分子质量、PEG的质量分数以及硫酸铵质量分数对米糠多糖在两相系统中的分配行为的影响。结果表明:萃取最佳条件为PEG分子量为6000,硫酸铵质量分数为14.8%,PEG 6000质量分数为14.3%,多糖得率为0.826388。     

无花果蛋白酶在双水相体系中分配行为

双水相萃取(ATPS)是近年来发展起来的新型、廉价酶纯化方法。为了扩展该方法应用领域,对PEG(polyethylene glycol)/(NH4)2SO4 双水相体系萃取无花果叶中无花果蛋白酶的实验条件进行研究,考察PEG 相对分子质量、成相物质量分数、pH 值、温度对无花果蛋白酶在两相体系中分配系数(K 值)的影响。结果表明：当两相体系中PEG 相对分子质量为1000、PEG 质量分数为20%、(NH4)2SO4 质量分数为19%、pH 值为6、温度室温(25℃)时蛋白酶在两相体系中分配系数最高可达3.6。     

响应面法优化黑豆酯酶的双水相萃取工艺

采用双水相萃取技术对黑豆酯酶进行分离纯化,优化黑豆酯酶在聚乙二醇4000/硫酸铵双水相体系中的分配行为。首先,制作PEG4000/(NH4)2SO4双水相相图;然后考察PEG4000质量分数、(NH4)2SO4质量分数、萃取体系p H值3个因素对黑豆酯酶萃取率的影响;最后采用Box-Behnken中心组合试验设计对黑豆酯酶双水相萃取工艺进行优化,确定最佳工艺条件为:PEG4000质量分数为28%、萃取体系p H为7.30、(NH4)2SO4质量分数为17%。此条件下黑豆酯酶萃取率为(93.95±0.24)%,黑豆酯酶酶比活力达到7.893 U/mg。与粗酶液纯度相比,黑豆酯酶双水相萃取工艺提纯倍数为7.363倍。该结果为黑豆酯酶的提纯和进行有机磷农药残留的检测提供科学依据。     

双水相萃取法提取米糠脂肪酶研究

该实验采用双水相萃取法提取米糠脂肪酶,通过确定米糠脂肪酶最佳提取条件,为日后大规模生产提供理论依据。用蒸馏水对米糠脂肪酶粗提取实验,通过单因素实验确定最佳提取工艺参数:料液比1∶15,提取温度40℃,提取pH 7.0,提取时间1 h。双水相萃取对粗酶液纯化实验,对影响双水相萃取各种因素进行探讨,并通过正交实验优化提取条件,于PEG浓度22.5%,硫酸铵浓度20%,pH 7.0条件下进行双水相萃取,脂肪酶纯化倍数最高。     

聚乙二醇-硫酸铵双水相体系萃取螺旋藻藻蓝蛋白的研究

对聚乙二醇-硫酸铵双水相体系直接从螺旋藻破碎液中萃取藻蓝蛋白的技术进行了研究。结果表明,对于藻蓝蛋白含量为0.282mg/mL的螺旋藻细胞破碎液,10%PEG2000与20%的硫酸铵双水相体系萃取藻蓝蛋白的效果最佳,经2次萃取,藻蓝蛋白总萃取率为96.1,藻蓝蛋白纯度达到1.2。     

双水相萃取芡实多糖工艺研究

目的:探究聚乙二醇/硫酸铵双水相体系萃取芡实中多糖成分的最佳条件。方法:以双水相系统的相比、分配系数、收率等为参数,探究了聚乙二醇(PEG)的相对分子质量、PEG的质量分数以及硫酸铵质量分数对芡实多糖在两相系统中的分配行为的影响。结果:萃取最佳条件为PEG分子量为6 000、硫酸铵质量分数为20.6%、PEG6000质量分数为15.7%。结论:聚乙二醇/硫酸铵双水相提取方法可减少加工过程中对多糖成分的破坏。     

双水相体系萃取分离鲍鱼内脏中的β-葡萄糖苷酶

采用聚乙二醇(PEG)/磷酸二氢钠(NaH₂PO₄)双水相萃取技术对鲍鱼内脏中的β-葡萄糖苷酶进行萃取分离。分别考察PEG分子量、PEG、NaH₂PO₄的质量分数、双水相体系的pH、样品加入量及超声波辅助方法对下相总酶活、纯化倍数及萃取率的影响,并通过单因素实验及正交实验进行优化。结果表明:室温下12% PEG4000+15% NaH₂PO₄双水相组成对粗酶液有最佳萃取效果,目标酶富集于下(盐)相,酶活为1.45 U,萃取率为0.991,分配系数为104,纯化倍数为4.4;该体系自然状态下的pH萃取效果最佳,最大处理量为体系总质量的20%,体系所有组分混匀后超声波180 W处理5 min辅助处理,能略微提高萃取效果。     

聚乙二醇-硫酸铵双水相体系分离纯化黄花蒿黄酮的研究

采用聚乙二醇-硫酸铵双水相体系分离纯化黄花蒿黄酮。通过单因素实验考察聚乙二醇平均分子量、(NH4)2SO4质量分数、聚乙二醇质量分数、pH和体系温度等对分配系数、萃取率的影响,并通过正交实验对萃取工艺条件进行进一步的优化,获得最佳工艺条为:双水相体系组成30%PEG600-25%(NH4)2SO4,体系温度45℃,体系pH为3。在此条件下,黄花蒿黄酮主要分布在上相,分配系数为21.86,萃取率达到96.33%。